常见病原性球菌-链球菌属（微生物检验技术课件）

链球菌属细菌鉴定1掌握链球菌属主要生物学特性熟悉链球菌属临床意义23掌握链球菌属种间鉴定与鉴别试验4掌握链球菌属微生物学检验学习目标

链球菌属细菌为一类触酶阴性的革兰染色阳性球菌，广泛分布于自然界、人及动物肠道和健康人鼻咽部。链球菌属细菌鉴定

1.形态与染色G+球菌，直径0.5～1um。

（1）液体培养基中链状排列，长短不一。短由4～8个菌组成，长者可达20～30个细菌组成。（2）在固体培养基或脓汁标本中，呈短链、成双或单个散在排列。一、生物学特性A群链球菌肺炎链球菌B群链球菌链球菌属细菌鉴定链球菌幼龄时可见荚膜，继续培养荚膜消失。肺炎链球菌常常呈双排列，故又称为肺炎双球菌。在动物体内它可形成较厚的荚膜。链球菌属无鞭毛、无芽胞。肺炎链球菌荚膜链球菌属细菌鉴定

2.培养特性营养要求高，兼性厌氧菌，在含葡萄糖、血清、血液培养基中生长良好。最适pH值7.4～7.6，温度35～37℃（22～42℃）。在5%～10%CO2环境下生长更好。

（1）液体培养基（血清肉汤）：沉淀生长（上清液澄清/微混）。（2）血平板：菌落小，灰白色，半透明，不同菌种的溶血现象不同，有α-溶血、β-溶血和γ-溶血（不溶血）。链球菌属细菌鉴定α-溶血β-溶血γ-溶血链球菌属细菌鉴定

3.生化反应生化活性较活跃：触酶阴性，葡萄糖+，菊糖－。

（1）A群链球菌：杆菌肽S

A、B和D群链球菌杆菌肽试验

A群杆菌肽S链球菌属细菌鉴定

3.生化反应

（2）B群链球菌：CAMP+，马尿酸钠+

（3）D群链球菌：PYR+，七叶苷+B群CAMP+D群链球菌七叶苷+（上）A群链球菌七叶苷-（下）CAMP原理？链球菌属细菌鉴定

3.生化反应（4）肺炎链球菌：OptochinS，胆汁溶菌+，菊糖+肺炎链球菌OptochinS胆汁溶菌（平板法）胆汁溶菌（试管法）链球菌属细菌鉴定

4.分类根据下述链球菌的溶血特征和Lancefield血清学等传统的分类法，目前仍然是临床实验室鉴定链球菌的常规使用方法。

（1）根据培养基上溶血特性分类：

1）甲型溶血性链球菌（甲链/草绿色链球菌）：绿色、α-溶血环：菌落周围1～2mm草绿色溶血环（不完全溶血）。甲链为咽喉部正常菌群。

2）乙型溶血性链球菌（β-溶血环，透亮）：菌落周围宽大（2～4mm）透明的溶血环，致病菌以溶血现象为主，主要为溶血毒素所致。

链球菌属细菌鉴定

3）丙型链球菌（无溶血环）（溶血链球菌或不溶血性链球菌）：亦称γ-溶血现象。菌落较甲链、乙链大，不溶血。分类菌落特征甲型（α）溶血性链球菌灰色、针尖状菌落、周围有草绿色溶血环（α溶血）乙型（β）溶血性链球菌灰白色细小菌落、周围有宽大透明溶血环（β溶血）丙型（γ）链球菌灰白色小菌落、无溶血环链球菌属细菌鉴定（2）根据抗原结构分类：链球菌Ag结构较复杂，含多种抗原，主要有：

1）多糖抗原（群特异性抗原）：位于细胞壁上，Lancefield将乙链（溶血性）分成A、B、C、D等20个群。链球菌Ag群中，对人类致病者90%属A群，B、C、D、F、G群也常感染致化脓性疾患。2）蛋白抗原（型特异性抗原）：位于菌体表面，有M、T、R和S蛋白。3）核蛋白抗原（P抗原）链球菌属细菌鉴定（3）根据链球菌对氧的需求分为三类：需氧、厌氧、微需氧链球菌，还有噬菌体及细菌素分型等方法。（4）综合溶血性、抵抗力、生化反应性状作为综合分类：1）化脓性链球菌（广义溶血性链球菌）：A群、B、C、G、H群。2）草绿色链球菌：（甲链）3）乳链球菌：N群，易污染牛奶4）肠链球菌：D群5）厌氧链球菌链球菌属细菌鉴定

5.抵抗力对外界抵抗力不强，对各种的常用消毒剂均很敏感，60℃30min即可将其杀死。对红霉素、霉素、氯霉素、磺胺等药物均敏感。链球菌属细菌鉴定1.致病物质（1）酶和菌体成分：①透明质酸酶：又称扩散因子；②链激酶：溶纤维蛋白酶；③链道酶：脱氧核糖核酸酶；④M蛋白：引起超敏反应的异嗜性抗原。二、临床意义（2）毒素：①溶血毒素：具有溶解RBC、杀WBC及毒害心脏作用。②红疹毒素：引起猩红热。溶血毒素主要分为O，S两种。

链球菌属细菌鉴定

B．溶血毒素S：多肽，分子量少，无抗原性，对氧稳定。

2.所致疾病A群链球菌(化脓性链球菌)、B群链球菌(无乳链球菌)和肺炎链球菌是本属的3种重要致病菌。

A群链球菌临床上常可引起急性咽炎、丹毒、脓疱病、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。此外，A群链球菌感染后亦可发生急、慢性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变态反应性后发症。

A．溶血毒素O：耐热，含-SH基的蛋白质，对氧敏感，易被氧化成-S-S，失去溶血能力。其抗原性很强，可刺激机体产生抗“O”抗体，可辅助诊断链球菌性疾病如风湿热及链球菌感染后的肾小球肾炎。链球菌属细菌鉴定

B群链球菌是导致新生儿败血症和脑膜炎的主要病原菌。

其它溶血性链球菌亦可引起上呼吸道、皮肤、创伤部位和生殖道的感染。

肺炎链球菌是急性肺炎、化脓性脑膜炎、胸膜炎、腹膜炎以及中耳炎、鼻窦炎等疾病的常见病原菌。

草绿色链球菌群常为口腔和鼻咽部的正常菌丛，其毒力虽低，但可因刷牙、拔牙等原因造成局部损伤后侵入血流，在有慢性心瓣膜损害的病人如风湿性心脏病患者中引起亚急性细菌性心内膜炎。

链球菌属细菌鉴定

D群链球菌也称为肠球菌所致的感染中最常见者为尿路感染，其中大部分为医院感染，多与尿路器械操作、保留导尿管和病人的尿路结构异常等有关。其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。链球菌属细菌鉴定微生物检验程序标本血液、尿液、创伤标本、脓性分泌物等

直接涂片镜检分离培养*注意与葡萄球菌属、肠球菌属鉴别，链球菌分群鉴定生长现象溶血类型生化反应：触酶、PYR、七叶苷、菊糖、胆汁溶菌等形态染色：革兰阳性球菌药敏试验报告血清学试验抗“O”试验Lancefield分群链球菌属细菌鉴定

1.标本采集：根据临床症状及体征采集标本，如血液、尿液、创伤标本、脓性分泌物等。

三、微生物学检验2.直接涂片：形态与染色。标本或增菌液直接涂片，革兰染色镜检见革兰阳性呈链状排列球菌，或见革兰阳性矛头状球菌成双排列，菌体周围有透明环，即可做出“查见革兰阳性球菌，链状排列，疑为链球菌”；或“查见革兰阳性矛头状球菌，成双排列，疑为肺炎链球菌”的初步报告。3．分离培养：1）增菌培养：A.需氧：MgSO4肉汤；B．厌氧：疱肉基。链球菌属细菌鉴定

增菌液中生长现象：

A．产生β-溶血的链球菌：沉淀生长，从下而上的溶血现象。

B．产生α-溶血的链球菌：混浊生长，产生草绿色荧光。

C．D群链球菌：混浊生长。

D．厌氧链球菌：在疱肉基中生长呈混浊现象。一般菌培养7天，无现象则要盲目传代2次。亚急性细菌性心内膜炎血培养4周，每周移种平板一次。链球菌属细菌鉴定2）血平板：培养条件：需加血清、血液等营养物质。培养基—羊血平板（有助于其溶血特征的识别和进一步鉴定）。初代分离应置5％～10％的二氧化碳环境下培养。如采用二氧化碳孵箱或烛缸。需氧、厌氧各一块培养经37℃培养1～2天。观察菌落特征、溶血现象。

*溶血性检查要点：溶血毒素“O”与“S”，A群链球菌大多产生“S”，一般链球菌只产生“O”。检查“O”时降低氧分压：厌氧培养；倾注倒板；穿刺接种，使只产生溶血毒素“O”的菌也表现出溶血现象。链球菌属细菌鉴定4．鉴定实验链球菌属的细菌的鉴定应根据其菌体形态、菌落形态和溶血特征，结合以下鉴定试验进行。（1）与其他革兰氏阳性球菌鉴别：（2）属内鉴定：

1）分类：复习2）生化反应

Lancefield分群试剂盒链球菌属细菌鉴定3）多糖抗原分群（群特异性抗原）

Lancefield血清学凝集试验

甲型溶血性链球菌和丙型链球菌鉴定到肺炎链球菌、D群链球菌，其他的统称为草绿色链球菌；链球菌属细菌鉴定乙型溶血性链球菌鉴定种，鉴定到抗原群（A、B、C、G）

1类：乙型溶血性链球菌：A、B、C、D、F、G群链球菌属细菌鉴定2类：胆汁七叶苷水解阳性鸟链：Q群+，其它D群+青霉素6.5%NaCL肉汤生长D群链球菌S-肠球菌R+3类：其它草绿色溶血性链球菌链球菌属细菌鉴定（3）其他鉴定试验：1）链激酶：A群+2）牛乳美蓝试验：粪链、乳链不被抑制3）马尿酸钠水解试验：B群+4）肺炎链球菌：荚膜肿胀试验+

链球菌属微生物鉴定技术抗“O”试验

（ASOtest）：