真菌学习讲座课件

邵柏2012.7

真菌学分离与鉴定吴李培南通大学附属东台医院2015年1月8日/2023/7/292标本采集

常规检验

常见真菌检验真菌123/2023/7/293概述一、真菌为真核细胞型微生物，属于真菌界，不含叶绿素，无根、茎、叶，以腐生或寄生方式生存，有性或无性生殖。二、分类：⑴浅部真菌；（癣）⑵深部真菌；（感染、死亡）

三、临床上最多见的浅部真菌为皮肤癣菌，包括毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子菌属。/2023/7/294概述四、引起全身性感染的病原菌有假丝酵母菌、隐球菌、曲霉菌、毛霉菌及其他酵母菌等。五、真菌学目前是微生物学科的一个主流部分，由于受免疫损伤的人群在不断扩大，机会致病菌的种类在以惊人的速度增长，真菌感染已成为严重影响公共健康的公害。

/标本采集一、浅部真菌感染标本二、深部真菌感染标本2023/7/295///深部真菌感染标本1、血液采血量一般为7-10ml.2、脑脊液采样量不少于3-5ml，真菌培养同时可做墨汁染色或隐球菌抗原检测。3、其他深部真菌感染标本痰、脓、体腔液、尿液、粪便等标本，采集及送检方法与细菌学检验相同。2023/7/298/常规检验一、观察菌落形态二、涂片镜检三、培养四、生化反应五、血清学试验六、组织病理学检查七、分子生物学检查2023/7/299/常规检验大小形态颜色色素质地真菌菌落/涂片镜检1、直接镜检本法适用于皮屑、黏膜或指甲、断发残根等标本。简单、实用、快速，阳性结果即可确定真菌感染。2、染色镜检⑴正染色-----革兰染色、乳酸酚棉蓝染色、抗酸染色、瑞氏染色等。⑵负染色-----墨汁染色（新生隐球菌）2023/7/2911/培养1、大培养法常用的培养基：沙保罗培养基、血琼脂平板等，30℃培养2周，观察菌落生长情况。该法不适合球孢子菌、组织胞浆菌等。2、小培养法-------用于观察真菌菌体的自然结构和生长发育全过程

⑴玻片法⑵钢圈法⑶方块法2023/7/2912/生化反应一、利用酵母菌或酵母样菌对糖、醇发酵和同化等生理学特征进行医学酵母的分类鉴定。二、已有商品化的手工和仪器法的配套试验2023/7/2913/血清学试验1、检测真菌抗原2、检测真菌抗体3、检测真菌的代谢产物

针对真菌胞壁或胞内成分：烯醇化酶、甘露糖等。2023/7/2914/组织病理学检查

有时培养出来的真菌不能断定是否为致病菌，要经过确认其在组织中的寄生形态及宿主的组织反应来判断，组织中真菌的鉴定可提高真菌病的诊断水平。2023/7/2915/分子生物学检查原位杂交技术可通过检测致病真菌特异性靶序列来对真菌进行鉴定。-----原位杂交特异性强，探针的设计已变得准确和容易，并且许多步骤可在高温下进行，使实验时间大大缩短，越来越多的实验室有能力开展此项技术。2023/7/2916/常见真菌检验一、致病酵母菌二、皮肤癣菌三、双项真菌四、镰刀菌属五、临床经验2023/7/2917/致病酵母菌1、假丝酵母菌属2、隐球菌属3、曲霉菌属4、毛孢子菌属2023/7/2918/假丝酵母菌属该菌属为条件致病菌，可引起皮肤、黏膜、内脏的假丝酵母菌病。种类：⑴白假丝酵母菌；⑵热带假丝酵母菌；⑶光滑假丝酵母菌；⑷近平滑假丝酵母菌；⑸克柔假丝酵母菌；⑹季也蒙假丝酵母菌等。2023/7/2919/假丝酵母菌属上呼吸道的假丝酵母菌感染临床上停用抗菌药物，有时感染即可控制；若中性粒细胞数减少引起的感染，应及时纠正免疫功能及抗真菌治疗。2023/7/2920/假丝酵母菌属假丝酵母菌可在许多培养基上生长，包括：沙保罗培养基、血琼脂平板、中国蓝琼脂平板、麦康凯琼脂平板等。目前实验室广泛采用酵母菌显色培养基----基于不同假丝酵母菌具有不同的特异性胞外酶，可分解复合底物释放显色基团的原理，从而根据不同颜色的菌落快速判断白假丝酵母菌、热带假丝菌的方法。2023/7/2921/假丝酵母菌属鉴定1、直接镜检2、牙管形成试验3、厚膜孢子形成试验4、糖同化或发酵试验2023/7/2922/糖同化或发酵试验

1、白假丝酵母菌属-----沙保罗培养基25℃中等速度生长，形成奶油状、光滑、闪光的酵母样菌落。显色培养基上呈蓝绿色菌落。2、热带假丝酵母菌属------沙保罗培养基25℃中等速度生长，形成光滑、乳白色奶油状菌落。显色培养基上呈蓝灰色菌落。2023/7/2923/糖同化或发酵试验3、光滑假丝酵母菌------沙保罗培养基25℃形成柔软、闪光、光滑奶油样菌落。显色培养基呈粉紫色菌落。4、近光滑假丝酵母菌------沙保罗培养基25℃形成柔软、闪光、光滑的奶油样菌落。显色培养基呈白色或淡粉色菌落。2023/7/2924/糖同化或发酵试验5、克柔假丝酵母菌-----沙保罗培养基25℃形成柔软、扁平菌落。显色培养基呈淡粉紫色菌落。6、季也蒙假丝酵母菌------沙保罗培养基25℃形成光滑、扁平、奶油样菌落。显色培养基呈淡粉紫色菌落。2023/7/2925/隐球菌属隐球菌属中新生隐球菌为人类致病菌，侵犯中枢神经系统，常在脑脊液图片中检出该菌。分型（血清型）：

⑴A----世界性分布⑵B----比C型普遍⑶C⑷D----世界性分布2023/7/2926/隐球菌属

1、墨汁染色-----取离心过的脑脊液沉淀物1滴与1滴新鲜墨汁在玻片上混和，加盖玻片镜检，在黑色背景上见圆形或椭圆形双层厚壁孢子，荚膜通常比菌体宽1-2倍，折光性强。菌细胞有出芽，但无假菌丝和菌丝。2023/7/2927/隐球菌属2、培养物经API20C、ID32C可鉴定到种。3、血清学检查：⑴抗原检查--简便快速诊断隐球菌性脑膜炎⑵抗体检查—有助于诊断和病情变化判断2023/7/2928/曲霉菌属

曲霉菌是仅次于假丝酵母菌的真菌，严重播散性感染常发生于免疫缺陷患者。主要常见菌：⑴烟曲霉----最常见；⑵黄曲霉----第二位；⑶黑曲霉----第三位。2023/7/2929/毛孢子菌属毛孢子菌属可引起指甲、毛发、皮肤等部位感染，统称为毛孢子病。近年来，毛孢子菌属感染有增多的趋势，可在危重或免疫功能低下患者的痰液和尿液中分离出该菌，播散性感染和系统性假丝酵母菌有着同样的传统的传播途径。2023/7/2930/毛孢子菌属

生物学特性

1、Tween-80玉米培养基上生长旺盛2、沙保罗培养基菌落多呈白色，3、衰老菌落变成脑回状，呈褐色。2023/7/2931/皮肤癣菌一、毛癣菌属二、小孢子菌属三、表皮癣菌属2023/7/2932/毛癣菌属1、红色毛癣菌---沙保罗培养基25℃生长较快，表面为淡粉色，背面为典型酒红色。2、须癣毛癣菌---沙保罗培养基25℃生长较快，菌落呈粉状、毛状或颗粒状，表面白色、乳白色、背面黄色、褐色。3、许兰毛癣菌---沙保罗培养基25℃生长较慢，菌落光滑似蜡样，乳黄色，下沉现象明显，可使培养基裂开。2023/7/2933/毛癣菌属4、紫色毛癣菌---沙保罗培养基25℃生长非常慢，菌落小、光滑，表面红到紫色，背面深红色到紫色5、断发毛癣菌---沙保罗培养基25℃生长缓慢，呈粉状或丝绒状，表面白色、黄色或褐色。2023/7/2934/小孢子菌属1、铁锈色小孢子菌---沙保罗培养基25℃生长较慢，菌落光滑呈毛状，表面黄色、锈色或白色，背面可无色。2、石膏状小孢子菌---沙保罗培养基25℃生长快速，呈白色绒毛状气生菌丝的菌落，随后表面颗粒状、粉末状，颜色转为棕黄色，背面红棕色。2023/7/2935/小孢子菌属3、犬小孢子菌---沙保罗培养基25℃生长较快，起初为白色至黄色羊毛状生长，2周后菌丝较多，呈棉絮状，表面呈黄白色，背面橘黄色。4、奥杜盎小孢子菌---沙保罗培养基25℃生长较快，菌落为绒毛状，表面米黄色，背面棕红色或苍白色。2023/7/2936/表皮癣菌属沙保罗培养基25℃生长缓慢，质地由膜状到粉末状，表面呈黄色到土黄色，背面褐色，中心有不规则脑回状沟，转种后可变为绒毛状。2023/7/2937/双项真菌1、申克孢子丝菌---沙保罗培养基25℃生长较快，为褐色至黑色短绒毛状菌落。镜检花朵样分生孢子梗和套袖状分生孢子。2、马内菲青霉素---25℃培养为青霉相，中央气生菌丝呈白色绒毛状，菌落周围培养基背面产生葡萄酒红色并扩散到整个培养基；37℃培养为酵母相，菌落为奶酪色，脑回样邹缩。2023/7/2938/双项真菌3、组织胞浆菌---沙保罗培养基25℃时初代生长缓慢，呈白色至棕色，继代培养白色；37℃转变为酵母相。继代培养可有典型大分子孢子，表面有指状突起；小分子孢子出芽似哑铃状。2023/7/2939/镰刀菌属主要致病菌种：

⑴茄病镰刀菌；

⑵串珠镰刀菌；⑶尖孢镰刀菌；⑷半裸镰刀菌；⑸层生镰刀