ABO血型鉴定标准操作规程

ABO血型鉴定标准操作规程1.检验原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或／和抗—B。2.试剂和材料：1、抗—A（B型血）、抗—B（A型血）及抗—A十B（O型血）分型血清，2、5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。3、受检者血清；4、受检者5％红细胞盐水悬液。3.方法3.1.试管法（1）取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混合。（2）另取洁净小试管（内径10mm×60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混合。（3）立即以1000r／min离心lmin。（4）将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。（5）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。（6）凝集强度判断标准4十红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1十肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞土镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞MF混合凝集外观（mixedfield）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。3.2.玻片法（1）取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔画成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混合。（2）另取洁净玻片一张（或白瓷板1块），用蜡笔画成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。（3）将玻片（或白瓷板）不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min，以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。如以玻片作试验时，也可用低倍镜观察结果。4.结果判定ABO血型正反定型结果分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞抗-A抗-B抗-A十BA细胞B细胞O细胞十─十A─十──十十B十一────O十十─十十十AB───注：十为凝集；一为─不凝集。[附注]1.分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。2.试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。3.试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。4.操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。5.按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20—24℃）内进行试验，37℃可使反应减弱。6.离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。7.观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。8.判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。RhD（IgM）血型定性测定标准操作规程1.检验原理：本品采用英国Serologicals公司生产的RhD（IgM）单克隆抗体浓缩液经稀释而成。根据D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阴性。2.试剂主要组成成分：抗D（IgM）单克隆细胞株培养上清液，NaCl，磷酸盐缓冲液。3.样本要求：红细胞抗凝或不抗凝样本。4.检验方法：4.1平板法（玻片法）加一滴抗D试剂于玻片上。再加一滴35%-45%的被检红细胞悬液。该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。在圆形的玻片区域中混匀，（直径约为20mm大小），前后缓慢摇晃玻片。2分钟左右肉眼判读结果。不要将试剂的干燥与凝集相混淆。如果阴性，需要用试管法重做一遍试验。4.2试管法加一滴抗D试剂于一支预先标记好的试管中（75×12mm或75×10nm）.再加一滴约3%-5%的被检红细胞悬液于试管中，混匀。离心，速度和时间可选择以下两种之一转速100rpm，时间1分钟转速3400rpm，时间15秒检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再次悬浮起来观察凝集状况，并立即记录结果，必要时可借助显微镜。若阴性结果，需在37℃孵育15—30分钟，然后离心再观察结果。结果呈阴性需进一步确认是否是弱D。4.3微量板法（U型板）加一滴抗D试剂于U型底的微孔中。再在微孔中加1滴约3%-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中。用机械的方法将U型板混匀。用板式离心机离心：2000rpm，时间30秒。不同的离心机、不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果如果需要适当的离心，使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。检测溶血情况（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）。结果判读：用机械振荡U型板，再悬浮细胞，根据悬浮情况来判断凝集。阳性反应，出现红细胞凝集，而阴性反应则在微孔中会出现均匀细胞悬液。可见肉眼和自动化仪器判读结果。如果呈阴性，需用试管法重做一遍试验。5.检验结果的解释阳性反应：出现红细胞凝集，为RhD阳性阴性反应：红细胞不出现凝集，为RhD阴性6.检验方法的局限性本试剂不能凝集CategoryD细胞，对于阴性和弱阳性结果，请按有关安全输血规范进行确认试验，必要时送血型参比实验室进行确认。7.产品性能指标：抗D（I