促黄体生成素测定标准操作规程

促黄体生成素测定标准操作规程1.检验原理：采用两步法免疫检测，运用化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术与灵活的检测模式的结合，测定人血清和血浆中的促黄体生成素（LH）。第一步，将样本和促黄体生成素β亚基抗体包被的顺磁微粒子混合。样本中促黄体生成素与促黄体生成素β亚基抗体包被的微粒子结合。冲洗后进入第二步，加入吖啶酯标记的促黄体生成素α亚基抗体结合物，形成反应混合物。再次冲洗后，将预激发液和激发液加入反应混合物中；测量产生的化学发光反应，以相对发光单位（RLUs）表示。样本中的TSH含量和ARCHITECTi光学系统检测到的RLUs值成正比。2.试剂主要组成部分：2.1试剂盒微粒子：促黄体生成素β亚基（小鼠、单克隆）抗体包被的粒子，储存于含有蛋白（牛，小鼠）稳定剂的4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）缓冲液中。最低浓度：0.04%固体物质。防腐剂：ProClin300.结合物：吖啶酯标记的促黄体生成素α亚基抗体（小鼠、单克隆）结合物，储存于含有蛋白（牛，酪蛋白）稳定剂的2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）缓冲液中。最低浓度：170ng/mL.防腐剂：ProClin300和ProClin9502.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有1.32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。防腐剂：抗菌剂。3.样本要求：人血清（包括采集于血清分离管中的血清）或采集于肝素或EDTA钾抗凝管中的血浆。血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。2-8℃可保存7天；-10℃以下可保存6个月。样本应避免反复冻融。4.检验方法：仪器法（详见雅培i1000标准操作规程）5.参考范围样本参考范围（mIU/ml）血清、血浆男性0.57-12.07女性卵泡期：1.08-11.78排卵期：7.59-89.08黄体期：0.56-14.00绝经期：5.16-61.996.检验结果的解释促黄体生成素项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线7.检验方法的局限性7.1将检测结果用于诊断时，应与其他数据：如症状、其他甲状腺检查结果、临床表现等结合使用。7.2促黄体生成素检测结果与临床症状不符时，需要通过附加试验来验证检测结果。7.3接受小鼠单克隆抗体制剂诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人小鼠抗体（HAMA）。使用含有小鼠单克隆抗体的试剂盒检测此样本时，检测值可能会假性升高或降低。7.4人血清中的异嗜性抗体可与试剂中的免疫球蛋白发生反应，干扰体外免疫测定。经常与动物或动物血清产品接触的患者，其样本可能容易受到此干扰，并使检测结果出现异常值。可能需要其他信息用于诊断。8.产品性能指标8.1精密度：当促黄体生成素≦70mIU/ml时，雅培促黄体生成素项目的不精密度（组内）为总CV≤7%；当促黄体生成素值＞70mIU/mL时，不精密度为总CV≤10%。当促黄体生成素值在0.5-1mIU/mL之间时，项目不精密度为≦0.07SD。8.2准确性（回收率）：添加已知浓度的促黄体生成素（浓度范围为10-70mIU/mL）至样本中，通过雅培促黄体生成素项目检测该样本，得出该项目的平均回收率为100±8%8.3灵敏度：促黄体生成素项目的定量限（LoQ）≤0.5mIU/mL。8.4特异性：向TSH浓度正常的人血清样本中添加下列物质（浓度见下表）然后进行检测，促甲状腺激素项目的分析特异性通过与以下物质的交叉反应率来表示，结果＜10%项目浓度LH分析物浓度（mIU/mL）交叉反应率%尿促卵泡素169mIU/mL00.01179mIU/mL≦100.00162mIU/mL50-700.15促甲状腺激素124mIU/mL00.00126mIU/mL≦100.01137mIU/mL50-70-0.69人绒毛促性腺激素209770mIU/mL00.01218532mIU/mL≦100.01206844mIU/mL50-700.018.5干扰性项目浓度检测结果变化（%）10-20mIU/mL50-70mIU/mL胆红素≧20mg/dL0-1蛋白质≧12g/dL-8-8甘油三酯≧3000mg/dL0-2血红蛋白≧20mg/dL108.6相关性：和雅培促黄体生成素（6C25）项目相比，检测浓度范围为0至250mIU/mL的样本时，雅培促黄体生成素（2P40）项目的斜率为0.9-1.15，相关系数（r）≧0.959.临床意义：人体促黄体生成素（LH，促黄体素）是糖蛋白激素，有两个不同亚基（α和β）。其α亚基和尿促卵泡素（FSH，促卵泡激素）、促甲状腺激素（TSH，促甲状腺素）以及人绒毛膜促性腺素（hCG）的α亚基相同。其β亚基和尿促卵泡素和促甲状腺激素的β亚基差别较大，但是和人绒毛膜促性腺素的β亚基非常相似。促黄体生成素和尿促卵泡素均由垂体的促性腺激素细胞在下丘脑内侧基底部分泌的促性腺素释放激素（LHRH,GnRH）作用下分泌。卵巢类固醇激素，主要是雌激素，调控促黄体生成素和尿促卵泡素的分泌，从而调节女性的月经周期。当卵泡及卵泡中的卵细胞成熟时，促黄体生成素高峰促使卵泡破裂，释放卵细胞。卵泡的残余物转变成黄体，分泌孕酮和雌二醇。卵泡期和黄体期的促黄体生成素浓度比促黄体生成素高峰时的浓度要低很多。在卵泡期和黄体期，雌激素对促黄体生成素的释放有负反馈作用。稍早于中期促黄体生成素高峰，卵巢类固醇激素，尤其是雌二醇，对促黄体生成素的释放有正反馈作用。测定促黄体生成素的浓度对预测排卵期，诊断不孕症以及诊断垂体和性腺功能障碍有重要意义。促黄体生成素浓度在排卵之前升高，如果要为性生活或人工授精选择最佳的受孕时机，则需要测定每天的促黄体生成素浓度，以预测排卵期。对于体外受精，注射精子需要卵泡破裂的精确时间，则需要更频繁地取样测定。在绝经期或施行卵巢切除术后，女性体内雌激素的浓度下降。雌激素浓度下降导致促性腺激素释放的负反馈消失，从而造成促黄体生成素和尿促卵泡素的浓度上升。在男性体内，促黄体生成素主要刺激睾丸间质细胞（Leydig细胞）生成睾酮。促黄体生成素通过生成睾酮和尿促卵泡素来调节睾丸曲细精管中支持细胞的精子发生过程。睾酮对促黄体生成素释放有负反馈作用。在性成熟的成人体内，促性腺激素不足通常是垂体功能减退的早期指征。患有这种疾病的人，促黄体生成素、尿促卵泡素以及类固醇类激素浓度都较低。相反，下丘脑和垂体的促性腺激素分泌瘤可导致促黄体生成素和尿促卵泡素浓度升高。因此，可根据促黄体生成素和尿促卵泡素浓度升高以及性腺类固醇浓度降低来诊断性腺衰竭，它是导致不孕症的原因之一。女性体内促黄体生成素浓度升