促甲状腺素测定标准操作规程 

促甲状腺素测定标准操作规程 1检验原理：采用两步法免疫检测，运用化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术与灵活的检测模式的结合，测定人血清和血浆中是否含有促甲状腺激素（TSH）。第一步，将样本、βTSH抗体包被的顺磁微粒子和TSH项目稀释液混合。样本中的TSH与TSH抗体包被的微粒子结合。冲洗后进入第二步，加入吖啶酯标记的αTSH抗体结合物。然后将预激发液和激发液加入反应混合物中；测量化学发光反应结果，以相对发光单位（RLUs）表示。样本中的TSH含量和ARCHITECTi光学系统检测到的RLUs值成正比。2.试剂主要组成部分：2.1试剂盒微粒子：βTSH抗体（小鼠、单克隆）包被的微粒子，储存于含有蛋白（牛）稳定剂的三羟甲基氨基甲烷（TRIS）缓冲液中。最低浓度：0.07%固体物质。防腐剂：抗菌剂。结合物：吖啶酯标记的αTSH抗体（小鼠、单克隆）结合物，储存于含有蛋白（牛）稳定剂的2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）缓冲液中。最低浓度：60ng/mL.防腐剂：抗菌剂。项目稀释液：促甲状腺激素（TSH）项目稀释液，储存于三羟甲基氨基甲烷（TRIS）缓冲液中。防腐剂：抗菌剂。2.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有1.32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。防腐剂：抗菌剂。3.样本要求：人血清（包括采集于血清分离管中的血清）或采集于肝素、肝素锂或EDTA钾抗凝管中的血浆。血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。2-8℃可保存7天；-10℃以下可保存6个月。样本应避免反复冻融。4.检验方法：仪器法（详见雅培i1000标准操作规程）5.参考范围样本参考范围（uIU/ml）血清或血浆0.35-4.946.检验结果的解释6.1促甲状腺激素项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线6.2结果单位转换：浓度（uIU/ml）×1=浓度（mIU/ml）7.检验方法的局限性7.1进行TSH检测时必须按照采集管生产商指导说明书对样本进行处理。处理不充分，包括与建议的凝固时间、离心时间、离心速度和样本制备技术存在偏差都有可能使检测结果不准确。7.2将检测结果用于诊断时，应与其他数据：如症状、其他甲状腺检查结果、临床表现等结合使用。7.3TSH检测结果与临床症状不符时，需要通过附加试验来验证检测结果。7.4由于TSH水平较低或检测不到而怀疑为甲状腺功能亢进时，应通过附加甲状腺功能检查并结合其他临床资料进行验证。7.5接受小鼠单克隆抗体制剂诊断或治疗的患者，其样本中可能含有人小鼠抗体（HAMA）。使用含有小鼠单克隆抗体的试剂盒检测此样本时，检测值可能会假性升高或降低。7.6人血清中的异嗜性抗体可与试剂中的免疫球蛋白发生反应，干扰体外免疫测定。经常与动物或动物血清产品接触的患者，其样本可能容易受到此干扰，并使检测结果出现异常值。可能需要其他信息用于诊断。7.6关于样本局限性的信息，参加本试剂盒说明书第一节8.产品性能指标8.1精密度：促甲状腺激素项目的精密度为总CV≤10%8.2回收率：通过检测已知TSH浓度的样本得出促甲状腺激素项目的平均回收率为100±10%8.3灵敏度：8.3.1功能灵敏度；功能灵敏度定义为批间CV在20%时能检测到的TSH浓度。促甲状腺激素项目的功能灵敏度≦0.01uIU/ml，符合第三大TSH检测的要求。8.3.2分析灵敏度：促甲状腺激素项目的分析灵敏度≦0.0025uIU/ml。8.4分析特异性：向TSH浓度正常的人血清样本中添加下列物质（浓度见下表）然后进行检测，促甲状腺激素项目的分析特异性通过与以下物质的交叉反应率来表示，结果＜10%项目浓度FSH≤500uIU/mlLH≤500uIU/mlhCG≤200，000uIU/ml8.5干扰性项目浓度干扰率血红蛋白≤500mg/dL＜10%胆红素≤20mg/dL＜10%甘油三酯≤3000mg/dL＜10%蛋白质≤2g/dL和12g/dL＜10%8.6准确度（相关性）：促甲状腺激素项目与AxSYM超敏hTSHⅡ项目比较的斜率为1.00±0.20，相关系数（r）≧0.959临床意义：人促甲状腺激素（TSH）或甲状腺刺激激素是一种糖蛋白，分子量约为28,000道尔顿，由垂体前叶的嗜碱性细胞（促甲状腺细胞）合成。TSH由α和β两个亚基非共价连接而成。虽然促黄体生成素（LH），尿促卵泡素（FSH）以及人绒毛膜促性腺激素（hCG）中都含有与TSH相同的α亚基，但这些糖蛋白的β亚基都是激素特异性的，具有生物学和免疫学特异性。α和β亚基同时存在才具有生物学活性。TSH通过与甲状腺细胞表面的特定受体相互作用，刺激具有代谢活性的甲状腺激素、甲状腺素（T4）以及三碘甲状腺原氨酸（T3）的生成和分泌。T3和T4负责调节体内各种生化反应，这些生化反应是人体生长、新陈代谢和神经系统正常工作的必要保障。血液中甲状腺激素水平较低时，促甲状腺激素释放激素（TRH），一种下丘脑分泌的三肽会刺激TSH的合成和分泌。T3和T4水平的升高会通过经典的负反馈机制抑制TSH的生成。另有证据表明生长激素抑制素和多巴胺可以抑制TSH的释放，这表明下丘脑既能抑制又能刺激由脑垂体分泌的TSH的生成。任何程度的下丘脑-垂体-甲状腺轴失调都会导致T4和/或T3生成不足（甲状腺功能减退）或生成过量（甲状腺功能亢进）。原发性甲状腺功能减退时，T3和T4水平较低而TSH水平却会明显升高。无论是由于内源性下丘脑疾病还是垂体疾病引起的垂体功能紊乱，即中枢性甲状腺功能减退，基础TSH水平正常或轻度升高，虽然T4和/或T3水平会显著下降。通常在这种情况下，TSH的生物活性降低，从而使TSH出现异常值。这种情况下建议通过常规TRH刺激试验来确诊。继发性甲状腺功能减退往往会降低TSH对TRH的反应，而三发性甲状腺功能减退时TSH对TRH的反应可能为正常、延迟或过度。原发性甲状腺功能亢进（如Grave病或结节性甲状腺）与高水平的甲状腺激素和低水平或低于检测水平的TSH有关。甲状腺功能亢进的诊断中使用了TRH刺激试验。甲状腺功能亢进患者对TRH试验的反应低于正常人。另外，大量使用糖皮质激素、生长激素抑制素、多巴胺和甲状腺激素替代疗法都会减少或从总体上削弱TSH对TRH的反应。早期使用血清TSH检测作为判断甲状腺功能的初步检测时，显示出检测方法的灵敏度较低。现在出现了各种灵敏的TSH检测方法，改变了甲状腺功能检测。随着检测能力的提高，这些检测项目可以明确的鉴别甲状腺功能正常和甲状腺功能亢进人群。分析灵敏度，曾经是评估低值检测准确度的方法，已被功能灵敏度所取代。美国甲状腺协会已经正式建议使用功能灵敏度作为TSH项目的灵敏度指标，虽然目前广泛使用的仍是分析灵敏度。第三代TSH项目可以用于鉴别真正的甲状腺功能亢进患者和亚临床甲状腺功能亢进以及一些非甲状腺疾病引起的TSH抑制患者，在检测浓度<0.02μIU/mL的样本时间CV为20%。