游离甲状腺素测定标准操作规程

游离甲状腺素测定标准操作规程1.检验原理：采用两步法免疫检测，运用化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术与灵活的检测模式的结合，测定人血清和血浆中的游离甲状腺素。第一步，将样本和甲状腺素包被的顺磁微粒子混合。样本中的游离甲状腺素与甲状腺素抗体包被的微粒子结合。冲洗后进入第二步，加入吖啶酯标记的三碘甲状腺原氨酸（T3）结合物。然后将预激发液和激发液加入反应混合物中；测量化学发光反应，以相对发光单位（RLUs）表示。样本中的游离甲状腺素含量和ARCHITECTi光学系统检测到的RLUs值之间成反比。2.试剂主要组成部分：2.1试剂盒微粒子：甲状腺素抗体（绵羊）包被的微粒子，储存于含有绵羊IgG稳定剂的三羟甲基氨基甲烷（TRIS）缓冲液中。最低浓度：0.05%固体物质。防腐剂：叠氮钠。结合物：吖啶酯标记的三碘甲状腺原氨酸结合物，储存于含有氯化钠（NaCl）和聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-100）稳定剂的2-（N-吗啡啉）乙磺酸（MES）缓冲液中。最低浓度：0.2ng/mL.防腐剂：ProClin。2.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有1.32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。防腐剂：抗菌剂。3.样本要求：人血清（包括采集于血清分离管中的血清）或采集于肝素、肝素锂（包括肝素锂血浆分离管）或EDTA钾抗凝管中的血浆。血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。2-8℃可保存6天；如果不能在6天内进行检测，需要把样本冻存在-10℃或更低温度下。在-10℃或更低温度下冻存6天的样本没有表现出性能差异。样本应避免反复冻融。4.检验方法：仪器法（详见雅培i1000标准操作规程）5.参考范围样本参考范围（ng/dl）血清或血浆0.70-1.486.检验结果的解释6.1游离甲状腺素项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线6.2结果单位转换：浓度（ng/dL）×12.87=浓度（pmol/L）7.检验方法的局限性7.1将检测结果用于诊断时，应与其他数据：如症状、其他甲状腺检查结果、临床表现等结合使用。7.2游离T3检测结果与临床症状不符时，需要通过附加试验来验证检测结果。7.3本项目尚未建立新生儿样本的性能指标。8.产品性能指标8.1精密度：游离甲状腺素项目在检测低值质控（0.65ng/dL）、中值质控（1.2ng/dL）和高值质控（2.8ng/dL）浓度内的样本时，检测精密度为总CV≤10%8.2分析灵敏度：游离甲状腺素项目的定量限（LoQ）≦0.4ng/dL。LoQ定义为精密度为CV≤10%时样本中的待测物可被精确测量的最低限。8.3分析特异性：游离甲状腺素项目的平均分析特异性通过交叉反应性来表示，当检测含有0.5ng/dL游离甲状腺素和12000ng/dL三碘甲状腺原氨酸的样本时，产生的交叉反应率≦0.0035%8.5干扰性项目浓度干扰率血红蛋白≤500mg/dL＜10%胆红素≤20mg/dL＜10%甘油三酯≤3000mg/dL＜10%蛋白质≤12g/dL＜10%8.6准确度（相关性）：与AxSYM游离甲状腺素项目比较时，ARCHITECT游离甲状腺素项目的斜率为1.00±0.20，相关系数（r）＜10%。9.临床意义：甲状腺素(T4)在血液中以游离状态和结合状态存在，两者比例恒定。甲状腺素结合球蛋白（TBG），白蛋白以及前白蛋白分别结合了大约75%，10%和15%的循环甲状腺素。这些蛋白与甲状腺素结合后，循环中未结合的游离甲状腺素（游离T4）仅占0.03%。这个在总甲状腺素（总T4）中占比例很小的部分，代表了生理学上可利用的激素，具有生物活性。一旦游离甲状腺素被靶细胞所吸收，该平衡会重新建立循环游离甲状腺素水平。在血清结合蛋白浓度或亲和力发生变化时，该平衡会起到保持游离甲状腺素水平不变的作用。因此在任何正常（妊娠）或异常（家族性异常白蛋白高甲状腺素血症，FDH）状态下，或者在使用了某些药物（例如，呋塞米8和芬氯酸），都可以确保组织得到所需量的激素。由于游离甲状腺素对血清结合蛋白的变化不敏感，因此，游离甲状腺素值可以作为判断甲状腺功能障碍的最佳指标。一直以来，在对甲状腺功能进行诊断时，除进行甲状腺素摄取（TU）检测外，还要对相同样本进行一次总甲状腺素检测。通过对这两个检测结果进行数学组合计算，得出游离甲状腺素指数（FTI），可以间接评估游离甲状腺素。除此之外，已开发的直接检测方法如平衡透析分析，超滤法，RIA以及固相EIA技术可用于游离甲状腺素检测。在这些方法中，对游离和结合甲状腺素示踪剂的分离是使用膜或通过将游离甲状腺素结合到固相抗体上实现的。该提取步骤清除