无菌检验技术-无菌检查方法验证

项目七无菌检验技术任务3无菌检验方法验证知识点3无菌检查方法无菌检查方法3无菌检查方法3.1无菌检查法概念无菌检查法是指检查《中国药典》要求应无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他要求无菌的品种是否染有活菌的一种方法（供试品符合无菌检查法的规定，仅进表明了供试品在该检查条件下未发现被微生物污染）。为了保证药品的卫生质量，保证药品在临床上的安全使用和保障人民的健康，《中国药典》规定：注射用药、灭菌的外用制剂等均需做无菌检查。3.2无菌检查的一般方法无菌检查需用最严格的无菌操作法将被检查的药品或材料的样本分别接种于适合各种微生物生长的不同培养基中，于不同的适宜温度下培养一定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性对照试验的结果，判断供试品是否被微生物污染，从而判断供试品是否合格。无菌检査法一般包括薄膜过滤法和直接接种法。前者适用于有抗菌作用或大容量的供试品如抗生素青霉素钠注射液和5%葡萄糖注射液(500ml)，后者适用于小容量非抗菌作用的供试品如维生素B12注射液(1ml)。无菌检查方法3.3无菌检查的范围凡进入人体无菌部位(人体的血液循环系统、肌肉、皮下组织)或接触创伤、溃疡面等部位而发生作用的制品或要求无菌的材料、无菌器具均应进行无菌检查。对于规定灭菌的药物，包括注射剂及用于体腔、严重烧伤、溃疡及眼科用药等，必须严格无菌，即在规定检验量的供检品中不得检出活微生物。需要进行无菌检查的品种包括药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他要求无菌的品种。主要包括以下几类。无菌检查方法(1)注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末和注射用浓溶液)，包括：用于肌内皮下和静脉的各种针剂。(2)植入剂，指将药物与辅料制成供植入体内的无菌固体制剂，即用于包埋于人体内的药物制剂，如不溶于水的激素、避孕药物、免疫药物及抗肿瘤药物等要求无菌的制剂。心脏瓣膜以及固定金属板和有机器材等。(3)冲洗剂，即用于冲洗开放性伤口或腔体的冲洗剂。(4)眼用制剂。(5)用于烧伤、创伤或溃疡的制剂。包括：用于烧伤或严重创伤的局部用散剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂；用于烧伤、创伤或溃疡的气雾剂和喷雾剂等。无菌检查方法(6)用于手术、耳部伤口或耳膜穿孔的滴耳剂或洗耳剂。(7)用于手术或创伤的鼻用制剂。(8)用于止血并可被组织吸收的制剂。如明胶发泡剂、凝血酶等，用于止血并可被组织吸收的各种药物制剂。(9)要求无菌的医疗器械，包括外科用敷料、器材。如外科手术刀片、输血(输液)袋、博士伦等。(10)其他要求无菌的产品。无菌检查方法1.4无菌检查的环境要求无菌检査的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室(区)环境的稳定性，为确保检査结果的可考性，对洁净室(区)的环境质量采取合理的控制措施和评价是必要的。无菌检查应在环境洁净度B级和局部洁净度A级的单向流空气区域內或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向流空气区、工作台面及环境应定期按现行国家标准进行洁净度验证。无菌检查方法3.5无菌检查一般步骤(1)玻璃仪器的洗涤、干燥、包扎、灭菌。(2)培养基的制备及适应性检查(3)无菌检查环境的测定。(4)菌悬液的制备。(5)检查方法验证。(6)样品的无菌检查。(7)报告检查结果。无菌检查方法项目七无菌检验技术任务3无菌检验方法验证技能点3无菌检查方法验证操作规程无菌检查方法验证操作规程3无菌检查方法验证操作3.1概述

无菌检查是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其它品种是否无菌的一种方法。无菌检查工作量大、操作不规范、人员的知识匮乏、检查方法应用不当等都会导致试验失败，因此在对一个产品进行无菌检查之前应先对无菌检查方法进行验证。无菌检查方法验证操作规程3.2验证目的确认所用的无菌检查方法适用于“所有无菌产品”的无菌检查。确保检查结果的准确性、可靠性、准确性和重现性以及检查方法的完整性。通过对不同批次产品无菌检查的比较，对医用即无菌产品的生产全过程进行质量监控。3.3验证范围“所有无菌产品”的无菌检查。无菌检查方法验证操作规程3.4验证条件3.4.1验证用菌株金黄色葡萄球菌

菌种传代次数铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌白色念珠菌无菌检查方法验证操作规程3.5无菌检验仪器及相关设备压力蒸汽灭菌器生化培养箱霉菌培养箱超净工作台3.6验证依据《中国药典》2015年版二部附录无菌检查法方法验证试验无菌检查方法验证操作规程3.7验证过程3.7.1培养基无菌性检查每批培养基随机取不少于5支，培养14天，应无菌生长。3.7.1培养基灵敏度检查取每管装量为12mL的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌菌悬液各1mL，每种培养基各接种2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9mL的TSB的培养基3支，其中2支分别接种小于100CFU的白色念珠菌悬液1mL，另1支不接种作为空白对照，培养5天，逐日观察结果。空白对照管无菌生长,加菌的培养基管均生长良好,判灵敏度检查合格。无菌检查方法验证操作规程3.7.2检查结果培养基硫乙醇酸盐流体培养基（12mL/管）TSB（9mL/管）菌液金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌空白白色念珠菌空白1#2#备注：“+”表示长菌，“－”表示不长菌，“±”表示可疑长菌无菌检查方法验证操作规程3.8方法验证3.8.1样品处理取经过EO灭菌的“取样器”样品，按物料进入净化区程序送入无菌室，用酒精擦拭表面后去掉最外层包装。将于人体接触的关键部位剪成1cm×3cm的片段装进100ml无菌广口瓶中制成样品备用。无菌检查方法验证操作规程3.8.2直接接种法取8支装量为12mL/支的硫乙醇酸盐流体培养基管，分别接入1mL小于100cfu/mL的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管，其中取一管倒入8.3.1样品瓶中，再倒入硫乙醇酸盐流体培养基浸没供试品，另一管作对照，置30～