控制菌及螨类检查技术-控制菌检查用培养基及适用性检查

项目九控制菌及螨类检查技术任务2控制菌检查用培养基及其适用性检查知识点2培养基制备及适用性检查2培养基适用性检查培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价检验用培养基是否符合检验要求。

培养基制备及适用性检查

2.1培养基适用性检查适用范围2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。2.2微生物限度检查用培养基质量控制的一般原则2.2.1不同处方培养基的替代使用不能通过培养基使用性检查试验简单确定。2.2.2.培养基适用性检查不能取代供应商或其他法定标准对培养基的有效期、保存条件、制备方法等的更严格的规定。2.2.3.如果没有特殊规定，培养基配制采用蒸馏水或纯化水均可，但应采用一定措施加以检测控制，如蒸馏水应核实PH是否为5~7；采用离子交换法制备的纯化水，电阻值应不小于2MΩ等。

培养基制备及适用性检查

2.2.4尽量临用现配。培养基灭菌后在能取出的前提下，尽快取出，切忌在高压锅内过夜存留；固体培养基灭菌或融化后，融化状态放置不得超过8h；一般预制培养基可置洁净环境2~25℃保存，但不应超过20天；固体琼脂培养基熔化再使用应不超过一次。2.2.5干粉培养基或培养基原料变质不应再用；预制培养基储存过程中发现浑浊、变色、长菌、严重脱水等变化不应再用。2.3对照培养基对照培养基应通过严格的质量研究和控制，具备性能稳定、质量优异的特点。对照培养基作为一种标准试剂，应具备可靠的来源和保障。

培养基制备及适用性检查

2.4培养基适用性检查指标及常用方法2.4.1检测指标：促生长能力、指示能力、抑制能力。2.4.2常用方法：直接接种法、浇碟法、表面接种法（涂布法）。2.4.3液体培养基通常采用直接接种法测定上述3种指标，接种时应注意接种量不得超过培养基体积的10%。固体培养基采用浇碟法和表面接种法测定上述指标。采用浇碟法考察固体培养基时，为了保证取样的平行性，平行测定两皿求平均数；采用表面接种法考察固体培养基时，表面接种菌液不多于0.2ml/皿，尽量控制在0.1ml/皿，保证取样的平行性，平行测定两皿观察结果。

培养基制备及适用性检查

2.5计数培养基的适用性检查微生物限度检查中计数用培养基3种，营养琼脂、玫瑰红钠营养琼脂和酵母浸出粉葡萄糖琼脂。2.5.1计数培养基适用性检查试验菌株：

大肠埃希菌［CMCC(B)44102］金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］

枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］

白色念珠菌［CMCC(F)98001］

黑曲霉菌［CMCC(F)98003］

菌株培养基菌液制备同微生物限度检查方法验证

培养基制备及适用性检查

2.5.2实验操作2.5.2.1培养基制备按规定程序新鲜配置营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠营养琼脂（被检培养基和对照培养基）以及酵母浸出粉葡萄糖琼脂（被检培养基和对照培养基），灭菌后备用。2.5.2.2营养琼培养基取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50~100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照营养琼培养基，混匀，凝固后于30~35℃倒置培养48h,计数；被检培养基同法操作。

培养基制备及适用性检查

2.5.2.3玫瑰红钠营养琼脂取5个无菌平皿，分别接种白色念球菌、黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50~100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照玫瑰红钠营养琼脂，混匀，凝固后倒置培养72h,计数；被检培养基同法操作。2.5.2.4酵母浸出粉葡萄糖琼脂

取3个无菌平皿，分别接种白色念球菌2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50~100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照酵母浸出粉葡萄糖琼脂，混匀，凝固后倒置培养72h,计数；被检培养基同法操作。

培养基制备及适用性检查

2.5.2.4结果判断若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。

培养基制备及适用性检查

2.6控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配置的培养基均应检查。检查项目包括培养基的促生长能力、指示和抑制特性能力。2.6.1计数培养基适用性检查试验菌株。

大肠埃希菌［CMCC(B)44102］

金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］

铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］

乙型副伤寒沙门菌［CMCC(B)50094］

白色念珠菌［CMCC(F)98001］

枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］

菌株培养基菌液制备同微生物限度检查方法验证。

培养基制备及适用性检查

2.6.2各种培养基需要测试的能力及判断指标2.6.2.1液体培养基促生长能力检查：取不大于100cfu的试验菌株分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养基温度（30~35℃）及最短培养基时间下培养。增菌培养基多为澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊。2.6.2.2固体培养基促生长能力检查：取试验菌液0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养基温度（30~35℃）及最短培养基时间下培养。与对照培养基比较，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。培养基制备及适用性检查

2.6.2.3液体培养基指示能力检查：取不大于100cfu的试验菌株分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养基温度（30~35℃）及最短培养基时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基中试验菌应生长情况/指示剂反应等应与对照培养基一致。2.6.2.4固体培养基指示能力检查：取试验菌液0.1ml（含菌数50~100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养基温度（30~35℃）及最短培养基时间下培养。被检培养基上试验菌的菌落形态特征、菌落颜色及指示剂反应情况应与对照培养基一致。培养基制备及适用性检查

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