微生物数量检验技术-供试液制备

项目八微生物数量检查技术任务2供试液制备知识点2不同剂型药品供试液制备2.供试液的制备根据被检药品的理化特性与生物学特性，采取适宣的方法制备供试液。所用乳化剂、分散剂、中和剂或灭活剂及其用量应证明是有效的，并对微生物无毒性。供试液的制备若需用水溶加温时，温度不应超过45℃，时间不得超过30min。除另有规定外,常用的供试品制备方法如下。2.1一般供试品溶液的制备2.1.1.液体供试品

取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。

环境、人员和取样的要求2.1.2固体、半固体或黏稠液供试品

取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。2.2用特殊方法制备供试液的供试品2.2.1非水溶性供试品2.2.1.1软膏、乳膏剂

取供试品5g(或5ml)，加至含熔化的5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80的无菌混合物(熔化温度不超过45℃)的烧杯中，即先将烧杯中无菌助溶剂混合物溶化，待温度不超过45℃时，加入供试品，用无菌玻棒搅拌成团后，分次慢慢加入45℃的pH7.0无菌氯化钠一蛋白陈缓冲液至100，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1:20供试液。

环境、人员和取样的要求2.2.1.2油剂

取供试品10m，加入无菌聚山梨酯805-8m1，摇匀，再加入稀释剂至100m，作为1:10供试液。2.2.1.3栓剂

称取供试品10g，置灭菌锥形瓶中，加适量稀释剂，置45℃水溶保温10min，使熔化，加入无菌聚山梨酯805～8ml，振摇使之乳化，再加稀释剂(稀释剂和山梨酯80总量为100ml)，摇匀，作为1：10供试液。2.2.1.4膏剂

取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯(制法见《中国药典》部附录ⅪH“无菌检查法”)和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45℃的pH7.0无菌氧化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5-10min，萃取，待油水明显分层，取其水层作为1:10供试液。

环境、人员和取样的要求2.2.2.非水溶性膜剂供试品

一般取样为100cm2，置灭菌锥形瓶中，加入适量的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，于45℃水浴中保温，浸泡，振摇，以供试品浸液作为1:10供试液。中药膜剂取100cm2，剪碎，加适量的pH7.0无菌氧化钠-蛋白胨缓冲液(通常1cm2加1ml或2ml)，浸泡，振摇，以供试品浸液作为1:10供试液。2.2.3肠溶及结肠溶制剂供试品

取供试品10g，肠溶制剂加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液至100ml，结肠溶制剂加pH7.6无菌磷酸盐缓冲液至100ml，均置45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1:10供试液。

环境、人员和取样的要求2.2.4气雾剂、喷雾剂

供试品取规定量供试品，置冰箱冰冻室(-20℃以下)内约lh。取出，迅速消毒供试品容器的开启部位周围，用无菌钢锥在容器上钻一小孔，在室温轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的稀释剂(若含非水溶性成分，加适量的无菌聚山梨酯80)中，混匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1:10的供试液。2.2.5茶剂供试品

取供试品10g，置灭菌锥形瓶中，加入稀释剂100ml，振摇2～3min，以灭菌纱布过滤(如为袋泡茶，可直接取2袋，以称样结果按1:10加稀释剂浸泡30min)。以上供试品如吸水膨胀，或黏度过高，可增加稀释剂的量，制成1:20～1:100供试液。

环境、人员和取样的要求2.2.6贴膏剂供试品

取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料(如无菌纱布)覆盖贴剂的粘贴面以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有灭活剂(如聚山梨酯80或卵磷脂)的稀释剂中，用力振荡至少30min，或放置于均质仪均质10min，或以其他方法制备成供试液。2.3具抑菌活性的供试品当供试品具有抑菌活性时，应消除供试液的抑菌活性后，再依法检查。常用的方法如下：2.3.1稀释法

取规定量的供试液，加至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少至不具抑菌作用。用平板法测定菌数时，1ml供试液可等量分注多个平皿。培养基稀释法适用于抑菌作用不强的制剂。

环境、人员和取样的要求2.3.2离心沉淀法

此方法用于去除供试液中的沉淀物，对于抑菌活性较强的供试品，如供试液中有不溶颗粒、沉淀，取供试液，先以500r/min，离心3min，取上清液进行试验。2.3.3薄膜过滤法

见“灭菌药物的无菌检验”中的“薄膜过滤法”。本法适用于含有各种抑菌、抗菌、防腐等成分的供试品。2.3.4中和法

凡含汞、砷或防腐剂的供试品，可用相应的试剂钝化、中和其抑菌活性，制成供试液。

环境、人员和取样的要求2.4供试液的稀释(10倍递增稀释法)2.4.1取2～3支灭菌试管，分别加入9mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液灭菌稀释剂(此时操作一般为：左手执试管并将塞打开，倾斜，右手执10ml吸管吸量。切勿在酒精灯火焰的正上方操作，以免火焰将供试液中的菌细胞杀灭)。加稀释剂后，试管塞应立即塞上。

环境、人员和取样的要求2.4.2另取1支1ml灭菌吸管吸1:10均匀供试液1ml，加入装有9mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液灭菌稀释剂的试管中，混匀，即得1:100供试液。以此类推，根据供试品污染程度，可稀释至1：103等适宜稀释级。每递增1稀释级，必须另换一支吸管。稀释时，吸管插入第1级稀释液内不低于液面