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内江市环境保护监测站实验报告分析人员:质量负责人:技术负责人:报告单位：内江市环境保护监测站报告日期：2010年8月2日叶绿素a的测定（B）一、 样品名称：叶绿素a编号：叶绿素a考核任务来源：四川省环保厅上岗考核组实验目的：四川省监测人员上岗考核实验日期：2010年7月27日报告日期：2010年7月27日二、 实验目的叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素。通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。三、 水样的采集与保存可根据工作的需要进行分层采样或混合采样。湖泊，水库采样500ml，池塘300ml，采样量视浮游植物的分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000ml。采样点及采样时间同“浮游植物”。水样采集后应放置在阴凉处，避免日光直射。最好立即进行测定的预处理，如需进过一段时间（4〜48h）方可进行预处理，则应将水样保存在低温（0〜4°C）避光处。在没升水样中假如1%碳酸镁悬浊液1ml，以防止酸化引起色素溶解。水样在冰冻情况下（-20C）最长可保存30d。四、 仪器设备（1） 分光光度计（2） 真空泵离心机乙酸纤维滤膜(孔径0.45ug)抽滤器组织研磨器或其他细胞破碎器碳酸镁粉末90%丙酮五、 实验步骤以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。倒入定量体积的水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大(约为50kpa)。水样抽完后，继续抽1〜2min，以减少滤膜上的水分。如需段时期保存1〜2d时，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存(30d)，则应放入低温冰箱(-20°C)保存。取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6〜8h后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2〜3ml90%的丙酮，充分研磨，提取液绿色a。用离心机(3000〜4000r/min)离心10min。将上清液倒入5ml或10ml容量瓶中。再用2〜3ml的90-%的丙酮，继续研磨提取，离心10min，并将上清液再转入容量瓶中。重复1~2次，用90%的丙酮定容为5ml或10ml，摇匀。将上清液在分光光度计上，用1cm光程的比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90%的丙酮做空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。六、 计算方法叶绿素a的含量按如下公式计算(11.64X(D-D)—2.16X(D-D)+0.10X(D-D)).V663 750 645 750 630 750 1叶绿素a(mg/

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