高效液相色谱法测定苯磺酸氨氯地平片中的有关物质

高效液相色谱法测定苯磺酸氨氯地平片中的有关物质

苯磺酸铵-2-二级二羟吡啶钙抗剂。它的化学名字是3-1甲基二羟丁基二-氨基二甲酯（2-氨基二甲酯）-4-（2-氯仿二羧基）-1，4-二羟基二甲酯-3，5-吡啶二羧酸酯苯磺酸盐，第一代抗剂。苯磺酸氨氯地平片LC~lOAtvp型高效液相色谱仪(日本岛津公司);N2000色谱工作站(浙江大学).苯磺酸氨氯地平(中国药品生物制品检定所100374-200301);苯磺酸氨氯地平片(成都雄飞利通制药工业有限公司,批号:080101、080102、080103);乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯.2方法和结果2.1在铬条件下进行系统适用性试验色谱柱:LunaC2.2空白辅料溶液和对照溶液的制备对照品溶液的制备:精密称取苯磺酸氨氯地平适量,加流动相稀释成每1ml中含苯磺酸氨氯地平3µg的溶液,作为对照品溶液.供试品溶液、空白辅料溶液的制备:取本品10片,精密称定,研细,精密量取适量(约相当于苯磺酸氨氯地平15mg),置50ml量瓶中,加流动相约40ml溶解,超声处理30min,取出,放冷至室温,加流动相至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液.另取本品处方制剂的空白辅料适量,按上述方法制备成空白辅料溶液.对照溶液的制备:精密量取供试品溶液适量,加流动相稀释成每1ml中含苯磺酸氨氯地平3µg的溶液,作为对照溶液.2.3供试品溶液色谱图检测取对照溶液10µl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分峰高约为满量程的10-20%;再取供试品溶液、对照溶液各10µl分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍.供试品溶液色谱图中如显示杂质峰,单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(1.0%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍(1.5%).2.4关于专属性研究2.4.1空白辅料及流动相峰取空白辅料溶液10µl注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍.在4.5min之前出现空白辅料及流动相峰,但其峰面积占对照溶液主峰面积比例很小,不予以扣除,一并按照杂质计.2.4.2降解物的检测为了考察该方法能否有效检测出本品在生产及贮存过程中可能产生的降解产物,根据药物结构特点、制剂处方工艺及贮存条件等,进行了适度的强制降解试验(加速破坏试验),以验证分析方法对相关降解产物检查的专属性.酸解实验取本品(批号:080101)10片,研细,精密称取适量(约相当于苯磺酸氨氯地平15mg),加20ml0.1mol/L盐酸溶解,室温放置2h后,用0.1mol/L氢氧化钠中和至中性,滤过,照2.3项下实验,结果在1.632、4.185、5.065min等处出现新的杂质峰,在1.928、4.632min处的杂质有明显增加.碱解实验取本品(批号:080101)10片,研细,精密称取适量(约相当于苯磺酸氨氯地平15mg),加20ml0.1mol/L氢氧化钠溶解,室温放置2h后,用0.1mol/L盐酸中和至中性,照2.3项下实验,结果在1.957、5.515、4.003处出现新的杂质峰,结果在1.638min处的杂质有明显增加.高温实验取本品(批号:080101)10片,研细,精密称取适量(约相当于苯磺酸氨氯地平15mg),在80°C时加热120分钟,照2.3项下实验,结果在3.363、5.932min等处出现新的杂质峰,在1.167、1.695min处的杂质有所增加.高湿实验取本品(批号:080101)10片,研细,精密称取适量(约相当于苯磺酸氨氯地平15mg),RH75%的湿度下放置5天,照2.3项下实验,结果在1.930、3.880、5.368min处出现新的杂质峰,在1.638min处的杂质有明显增加.强光实验取本品(批号:080101)10片,研细,精密称取适量(约相当于苯磺酸氨氯地平15mg),在强光(照射度为4500±500LX)下,照射3天,照2.3项下实验,结果在1.637、4.288、6.008min处出现新的杂质峰.结果该方法能有效检测出各破坏性试验产生的降解物,且各杂质峰间及杂质峰与主峰间均能达到基线分离,所建方法专属性较好,色谱图见图1.2.5测定每相层中含苯磺酸氨氯地平0.3.5.5%.对照溶液进样精密度取苯磺酸氨氯地平对照品溶液,分别重复进样6次,照2.3项下进行测定,以对照品溶液的主峰面积考察进样精密度,结果RSD=2.3%.日内精密度取本品(批号:080101)10片,精密称定,制成每1ml中含苯磺酸氨氯地平0.3mg的供试品溶液6份,按2.3项下方法,以供试品溶液中杂质含量考察方法精密度.结果见表1.中间精密度取本品(批号:080101)10片,精密称定,制成每1ml中含苯磺酸氨氯地平0.3mg的供试品溶液5份.在不同日期由不同分析人员按2.3项下方法试验,以供试品溶液中杂质含量考察中间精密度.结果见表1.2.6试验检测限制2.7色谱柱的选择取本品(批号:080101)10片,精密称定,研细,分别精密称取适量,使用不同品牌的色谱柱Shim-packVP-ODScolumn(5µm,150mm×4.6mmi.d.)和HypersilC3相关材料的测定用所建立的方法,对三批苯磺酸氨氯地平片进行有关物质检查,结果见表2.4胺浓度0.7%本研究对流动相的组成、流动相的PH值、流动相的盐浓度以及三乙胺浓度均进行了考察,结果表明,流动相强度对杂质检出影响较大,当流动相强度为0.7%三乙胺溶液(磷酸调pH4.0±0.1)-乙腈(70:30)时,能检测到较多的杂质峰且主峰与相邻杂质峰的分离较好;三乙胺的浓度影响峰保留时间、峰形及分离度,三乙胺浓度低时,保留时间延后,峰展宽,故本试验选择流动相的三乙胺浓度为0.7%,此时峰形较好,主峰保留时间较为合适且与主峰与相邻杂质峰能达到完全分离;盐浓度和pH对本品的保留时间及峰形影响不大.因此,最终确定:0.010mol/L磷酸氢二钾溶液(含0.7%三乙胺、磷酸调pH4.0±0.1)-乙腈(70:30)为本品有关物质检查的流动相.本研究也对测定波长进行了选择.取本品适量,用流动相溶解制成每1ml中含苯磺酸氨氯地平5µg的溶液,进行紫外扫描(200~400nm).苯磺酸氨氯地平在237nm波长处有最大吸收,空白辅料无干扰,故选用237nm进行有关物质检测的波长.本研究对样品的进样浓度、色谱图记录时间进行了选择,精密称取自制小样(按处方筛选制备)适量,照2.3项下方法,用流动相配制成分别制成0.06、0.12、0.3、0.48、0.60mg/ml,进行HPLC分析,结果当进样浓度至0.3mg/ml后,增加进样浓度不再出现新的杂质峰,故可将