EHS-M-W-0020生活饮用水中大肠菌群检测细则(多管发酵法)

适用范围及标准适用于生活饮用水、水源水、游泳池水中大肠菌群的测定。技术标准GB/T 5749-2023《生活饮用水卫生标准》GB/T 5750.12-2023DB 31/890-2023《公共游泳场所卫生治理标准》检测原理总大肠菌群指一群在37℃、24h培育能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。44.5℃仍能生长且发酵乳糖产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠埃希氏菌是指一群能生长发酵乳糖产酸、产气且在含有荧光底物的培育基上44.5℃培育24h产生β-外光下产生特征性荧光的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。仪器和设备高压蒸汽灭菌器3.2 冰箱：2℃—8℃3.3 恒温培育箱：36℃±1℃天平PH试纸3.6 恒温水槽：44.5℃生物安全柜紫外光灯：6W、波长366nm平皿：直径为9cm试管刻度吸管小倒管金属接种环培育基和试剂20min〔注：双料乳糖蛋白胨〕15ml。4℃冰箱保存，待用。革兰氏染色液〔染色方法见试剂使用说明书〕 PH6.9±0.2，分装到带有10ml)，12120min，备用。10%〔m/m〕硫代硫酸钠溶液：12120min。乳糖胆盐发酵培育管：称取乳糖胆盐，加热溶解，调PH7.4，分装到带有倒管15min〔注：双料乳糖胆盐发酵管即蒸馏〕EC-MUG管：称取本培育基干粉，加热溶解，在366nm紫外光下检查无自发荧光后分装于试管中，11520minPH6.9±0.2。操作步骤总大肠菌群1ml水样参加9ml101出厂自来水，需常常检验或每天检验一次的，可直接接种五管双料培育基，每管接种10ml水样。515管。接种1ml101ml接种。36℃±124h。变黄且有气体产生则为试验阳性，需做进一步的证明试验。36℃±118～24h，观看菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。作业指导书·检测细则生活饮用水/游泳池水中大肠菌群检测细则

编号：EHS-M-W-0020次修订37页36℃±124h。肠菌群阳性。登记试验的阳性管数，查表得出100ml水样中总大肠菌群的MPN值。15全部乳糖发酵管阴性，则报告总大肠菌群未检出。耐热大肠菌群〔产酸产气1~2接种环菌液〔水浴箱的水面〕44.524±2h。酵试验时按《水中总大肠菌群检测细则〔多管发酵法》5.2.15.2..2接种乳糖蛋白44.5℃±0.5℃18~24h5.2.1。则为试验阳性，需做进一步的证明试验。平板分别：自试验阳性管中取一接种环培育液，接种到伊红美兰琼脂平板上，置44.518～24h，观看菌落形态。44.524h。44.5℃仍能发酵乳糖产酸、产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢100ml水样中耐热大肠菌群的〔MPN〕数值。大肠埃希氏菌接种：从测总大肠菌群多管发酵初发酵试验中产酸或产气的试管中无菌取1~2EC-MUG管中，或者是按总大肠菌群多管发酵初发酵试验方法将1~2EC-MUG管中。轻摇〔水浴箱的水面应高于试管中培育基的液面〕44.524±2h。培育：将已接种的EC-MUG管轻摇试管，使液体充分混匀，接种后30min内置恒温水浴箱中〔水浴箱的水面应高于试管中培育基的液面〕44.5℃培育 24±2h。EC-MUG366nm6W的紫外灯照耀，如有蓝色荧光产生则表示水样中含有大肠埃希氏菌。结果报告：计算EC-MUG阳性管数，查对应的最可能数〔MPN〕表得出大肠埃希氏菌的最可能数，结果以MPN/100mL报告。留意事项本试验要在二级生物安全试验室中进展。试验室成员应知晓潜在危害，生疏试验室安全操作规程和技术。试验室人员要防止针/锐器损伤，使用锐器容器勿断裂、弯折或者重套上或重复使用注射器、针头；制止用手接触裂开的玻璃器皿，尽量使用塑料器皿。工作完毕后消毒工作台面。相关记录M-W-00201-2023《生活饮用水中大肠菌群原始记录〕附表1 总大肠菌群〔MPN〕检索表〔15管法〕〕接种量/mL 总大肠菌群/接种量/mL 总大肠菌群/1010.1 〔MPN/100mL〕1010.1〔MPN/100mL000<21002001210140024102600351038004710410005910512010211040114111601261128013711310014911412015111151402041206021612180227122100239123120241112415025131251703061308031713110032913212作业指导书·检测细则生活饮用水/游泳池水中大肠菌群检测细则

编号：EHS-M-W-0020次修订57页〕〕033111331503413134170351513519040814011041914113042111421504313143170441514419045171452205091501305111151150521315217053151531905417154220551915524附表1 总大肠菌群〔MPN〕检索表〔15管法〕续接种量/mL 总大肠菌群/接种量/mL 总大肠菌群/1010.1 〔MPN/100mL〕1010.1〔MPN/100mL20053008201730111202930213203123031620414304202051630523210731011211931114212123121721314313202141731423215193152722093201422112321172221432220223173232422419324272252232531230123301723114331212321733224233203332823422334322352533536240153402124117341242422034228243233433224425344362452834540250173502525120351292522335232253263533725429354412553235545附表1 总大肠菌群〔MPN〕检索表〔15管法〕续接种量/mL 总大肠菌群/接种量/mL 总大肠菌群/1010.1 〔MPN/100mL〕1010.1〔MPN/100mL40013500234011750131402215024340325503584043050476405365059541017510334112151146412265126341331513844143651411041542515130420225204942126521704223252294423385231204244452415042550525180430275307943133531110432395321404334553318043452534210〕〕作业指导书·检测细则生活饮用水/游泳池水中大肠菌群检测细则

编号：EHS-M-W-0020次修订77页435595352504403454013044140541170442475422204435454328044462544350445695454304504155024045148551350452565525404536455392045472554160045581555>1600附表2 总大肠菌群〔MPN〕检索表〔5管法〕510ml管中