医院检验科微生物检验实验室生化和血清学试验标准操作规程

医院检验科微生物检验实验室生化和血清学试验标准操作规程微生物检验实验室触酶试验标准操作规程……………97微生物检验实验室氧化酶试验标准操作规程…………98微生物检验实验室凝固酶试验标准操作规程…………99微生物检验实验室DNA酶试验标准操作规程………100微生物检验实验室CAMP试验标准操作规程………101微生物检验实验室Optochin试验标准操作规程……102微生物检验实验室七叶苷试验标准操作规程…………103微生物检验实验室卫星试验标准操作规程……………104微生物检验实验室糖（醇、苷）类发酵试验标准操作规程…………105微生物检验实验室三糖铁试验标准操作规程…………106微生物检验实验室葡萄糖o/f试验标准操作规程……108微生物检验实验室甲基红试验标准操作规程…………109微生物检验实验室VP试验标准操作规程……………110微生物检验实验室吲哚试验标准操作规程……………111微生物检验实验室硝酸盐还原试验标准操作规程……112微生物检验实验室脲酶试验标准操作规程……………113微生物检验实验室赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程…………………114微生物检验实验室鸟氨酸脱羧酶试验标准操作规程…………………115微生物检验实验室精氨酸脱羧酶试验标准操作规程…………………116微生物检验实验室苯丙氨酸脱氨酶试验标准操作规程………………117微生物检验实验室枸橼酸盐利用标准操作规程………118微生物检验实验室丙二酸盐利用试验标准操作规程…………………119微生物检验实验室硫化氢试验标准操作规程…………120微生物检验实验室ONPG试验标准操作规程………  121微生物检验实验室沙门菌血清学检测标准操作规程…………………122微生物检验实验室志贺菌血清学检测标准操作规程…………………123致病性大肠埃希菌血清学检测标准操作规程…………124微生物检验实验室霍乱弧菌血清学检测标准操作规程………………125微生物检验实验室血清牙管形成试验标准操作规程…………………126微生物检验实验室解脲脲原体试验标准操作规程……127微生物检验实验室G试验标准操作规程………………128微生物检验实验室GM试验标准操作规程……………130微生物检验实验室隐球菌抗原检测试验标准操作规程………………132微生物检验实验室T-SPOT.TB试验标准操作规程……134XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书触酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0528版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范触酶试验标准操作规程。2．原理具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧，出现气泡。3．试剂3%过氧化氢溶液。4．质控金黄色葡萄球菌ATCC25923阳性，肺炎链球菌ATCC49619阴性。5.操作步骤取3%过氧化氢溶液0.5ml，滴加于不含血液的细菌琼脂培养物上，或取1～3ml滴加入盐水菌落悬液中。6.结果判断培养物出现气泡者为阳性。7.注意事项7.1细菌要求新鲜。7.2不宜用血琼脂平板上的菌落作触酶试验，因红细胞内含有触酶，可能出现假阳性。7.3需用已知阳性菌和阴性菌作对照。8.临床意义在革兰阳性球菌中，链球菌触酶试验阴性，葡萄球菌及微球菌均阳性，因此可用于革兰阳性球菌的初步分群。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书氧化酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0529版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范氧化酶试验标准操作规程。2．原理氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素酶呼吸系统的酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的琨类化合物。3．试剂盐酸二甲基对苯二胺（或四甲基对苯二胺）0.1g加蒸馏水10ml，置棕色瓶内可用一周。冰箱保存，或分装于棕色瓶内密封。4．质控铜绿假单胞菌ATCC27853阳性，大肠埃希菌ATCC25922阴性。5.操作步骤取洁净的滤纸一小块，蘸取菌苔少许，加1滴10g∕L盐酸二甲基对苯二胺溶液于菌落上，观察颜色变化。6.结果判断立即呈粉红色并迅速转为紫红色者为阳性。。7.注意事项7.1试剂在空气中易氧化，故应经常更换新试剂，或配制时试剂内加入0.1%维生素C以减少自身氧化。7.2不宜采用含葡萄糖培养基上的菌落（葡萄糖发酵可抑制氧化酶活性）。7.3实验时应避开含铁的培养基等含铁物质，因本试验过程中，遇铁时会出现假阳性。8.临床意义8.1用于奈瑟氏菌、非发酵菌等细菌的鉴定。8.2所有的革兰阴性菌均应进行氧化酶试验，如果肠杆菌科不进行本试验，则可能将氧化酶阳性的嗜水气单胞菌错误地鉴定为大肠埃希菌或沙雷菌。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书凝固酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0530版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范凝固酶试验标准操作规程。2．原理金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可用玻片测出。另一种是菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶，能使凝固酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝固。3．试剂新鲜人或兔血浆，生理盐水。4．质控金黄色葡萄球菌ATCC25923阳性，表皮葡萄球菌ATCC57625阴性。5.操作步骤5.1玻片法取兔或混合人血浆和盐水各一滴分别置清洁载玻片上，挑取待检菌菌落分别与血浆及盐水混合。如血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。5.2试管法取试管2支，分别加入0.5ml的血浆（经生理盐水1：4稀释），挑取菌落数个加入测定管中充分研磨混匀，用已知阳性菌株加入对照管，37℃水浴3～4小时。血浆凝固为阳性。6.结果判断玻片法：如血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。试管法：血浆凝固为阳性。7.注意事项若被检细菌为陈旧的肉汤培养物（>18～24小时）或生长不良、凝固酶活性低的菌株往往出现假阴性。8.临床意义金黄色葡萄球菌凝固酶试验为阳性，而表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌凝固酶试验为阴性，故此试验对鉴别葡萄球菌有重要价值。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书DNA酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0531版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范DNA酶试验标准操作规程。2．原理某些细菌可产生细胞外DNA酶。DNA酶可水解DNA长链，形成数个单核甘酸组成的寡核苷酸链。长链DNA可被酸沉淀，而水解后形成的寡核苷酸则可溶于酸，当在菌落平板上加入酸后，若在菌落周围出现透明环，表示该菌具有DNA酶。3．试剂3.1DNA琼脂成分DNA（脱氧核苷酸）2.0g胰蛋白胨15gD大豆胨5.0g氯化钠5.0g琼脂20g蒸馏水1000mlpH7.2～7.43.2制备将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解，校正pH，分装三角烧瓶，经115℃灭菌15分钟。倾注于灭菌平皿，冷藏备用。4．质控粘质沙雷菌ATCC14041阳性，大肠埃希菌ATCC25922阴性。5.操作步骤将待检菌点状接种于DNA琼脂平板上，35℃培养18～24小时，在细菌生长物上加一层1mol/L盐酸（使菌落浸没）。6.结果判断菌落周围出现透明环为阳性，无透明环为阴性。7.注意事项培养基表面凝固水需烘干，以免细菌呈蔓延状生长。也可在营养琼脂的基础上增加0.2%DNA。8.临床意义肠杆菌科中的沙雷菌和变形杆菌可产生DNA酶，革兰阳性球菌中只有经黄色葡萄球菌产生DNA酶，因此可用于鉴定。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书CAMP试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0532版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范CAMP试验标准操作规程。2．原理B群链球菌具有“CAMP”因子，能促进葡萄球菌β溶血素的活性，使两种细菌在划线处呈现箭头形透明溶血区。3．试剂血琼脂平板，金黄色葡萄球菌ATCC25923.4．质控无乳链球菌ATCC13813阳性，化脓链球菌ATCC19615阴性。5.操作步骤先用产溶血素的金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上划一横线，再取待检的链球菌与前一划线作垂直划线接种，两者相距0.5～1cm。置35℃孵育18～24小时，观察结果。6.结果判断在两种细菌划线的交界处，出现箭头形透明溶血区为阳性。7.注意事项被检菌与金黄色葡萄球菌划线之间留出0.5～1cm距离，不得相接。8.临床意义主要用于鉴定B群链球菌（阳性），其他链球菌本试验阴性。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书Optochin试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0533版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范Optochin试验标准操作规程。2．原理Optochin(ethylhydrocupreine,乙基氢化去甲奎宁的商品名)可干扰肺炎链球菌叶酸的生物合成，抑制该菌的生长，故肺炎链球菌对其敏感，而其他链球菌对其耐药。3．试剂血琼脂平板，Optochin纸片（含药5ug）.4．质控肺炎链球菌ATCC49619阳性，粪链球菌ATCC9790阴性。5.操作步骤将待检的a溶血的链球菌均匀地涂布在血琼脂平板上，贴放Optochin纸片（含药5ug），35℃孵育18～24小时，观察抑菌圈的大小。6.结果判断抑菌圈>10mm为肺炎链球菌。7.注意事项7.1做Optochin敏感试验的平板不能在CO2环境下培养，因其可使抑菌圈缩小。7.2同一血琼脂平板可同时测定几株菌株，但不要超过4株被测菌。7.3Optochin纸片可保存于冰箱中，一般可保存9个月。但如用已知敏感的肺炎链球菌检测为耐药时，纸片应弃用。8.临床意义用于肺炎链球菌与其他链球菌之间的鉴别。肺炎链球菌对Optochin敏感，而其他链球菌则耐药。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银陈险峰）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书七叶苷试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0534版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范七叶苷试验标准操作规程。2．原理粪肠球菌能分解七叶苷，其代谢产物与铁离子结合产生黑色沉淀，使培养基变黑。3．试剂3.1七叶苷琼脂成分蛋白胨5g磷酸氢二钾1g牛肉膏3g七叶苷1g枸橼酸铁0.5g蒸馏水1000mlpH7.23.1制备上述各成分混合溶解后，调pH至7.2，分装试管，高压灭菌，冷藏备用，4．质控粪肠球菌ATCC29219阳性，肺炎链球菌ATCC49619阴性。5.操作步骤将试验菌接种于七叶苷琼脂斜面上，经35℃孵育18～24小时后取出，观察结果。6.结果判断培养基变黑色，为阳性。7.注意事项7.1若接种七叶苷液体培养基，阳性者经过经35℃孵育3～6小时，培养基即可变黑。7.2其他链球菌亦能在此培养基上生长，但不变黑；肺炎链球菌不生长。8.临床意义主要用于鉴别D群链球菌与其他非D群链球菌。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书卫星试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0535版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范卫星试验标准操作规程。2．原理金黄色葡萄球菌会产生一种扩散蛋白CAMP因子（合成脱氢酶），并渗入培养基中，刺激流感嗜血杆菌生长。3．试剂血琼脂平板，金黄色葡萄球菌4．质控流感嗜血杆菌ATCC10211阳性，卡他莫拉菌ATCC49226阴性。5.操作步骤挑取可疑菌落，接种于血琼脂平板上，作浓密连续划线后，再将金黄色葡萄球菌点种其上（2～4处），于37℃培养24小时后观察结果。6.结果判断如见葡萄球菌菌落邻近处的菌落较大，而远离金黄色葡萄球菌菌落处的菌落小，即为“卫星现象”阳性。可初步鉴定为流感嗜血杆菌。7.注意事项若产生大的新月形或箭头形溶血，则为CAMP阳性，即B型链球菌，而小区溶血及不溶血为阴性反应。8.临床意义用于流感嗜血杆菌与其他细菌的鉴别。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书糖（醇、苷）类发酵试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0536版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范糖（醇、苷）类发酵试验标准操作规程。2．原理不同细菌含有发酵不同糖类的酶，分解糖的能力各不相同，产生的代谢产物也随细菌种类而异。观察细菌能分解各类单糖（葡萄糖等）、双糖（乳糖等）、多糖（淀粉等）和醇类（甘露醇）、糖苷（水杨苷等），是否产酸或产气。3．试剂3.1成分蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g溴甲酚紫指示剂10ml蒸馏水1000ml3.2制备将上述成分混合后，加热使其溶解。校正pH至7.1～7.2，用滤纸过滤；根据需要，分别加需要的糖和醇；分装于试管，每管内3ml，置高压灭菌器内，经115℃灭菌10分钟。置4℃左右冰箱备用。4．质控大肠埃希菌ATCC25922阳性（加葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖），奥斯陆莫拉菌ATCC25829阴性。5.操作步骤将纯培养的细菌接种至各种糖培养管中，置一定条件下孵育后取出，观察结果。6.结果判断若细菌能分解此种糖类产酸，则指示剂呈酸性变化；不能分解此种糖类，则培养基无变化。产气可使液体培养基中倒置的小管内出现气泡，或在半固体培养基内出现气泡或裂隙。7.注意事项糖发酵的基础培养基内必须不含有任何糖类何硝酸盐，以免出现假阳性反应。因有些细菌可使硝酸盐还原产生气体，而影响发酵糖类产气结果的观察。8.临床意义糖发酵试验是鉴定细菌的生化反应试验中最主要的试验，不同细菌可发酵不同的糖类。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书三糖铁试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0537版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范三糖铁试验标准操作规程。2．原理能发酵葡萄糖和乳糖的细菌产酸产气，使三糖铁的斜面和底层均呈黄色，并有气泡产生；只能发酵葡萄糖，不发酵乳糖的细菌，使斜面呈红色，而底层呈黄色；有些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，生成硫化氢,硫化氢遇铅或铁离子形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀；分解尿素，呈红色。3．试剂3.1三糖铁琼脂成分上层：乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g硫酸亚铁0.2g蛋白胨20g琼脂20g硫代硫酸钠0.2g氯化钠5g0.2%酚红12.5ml蒸馏水1000ml下层：牛肉膏1.8g酸性磷酸钾1.2g0.2%酚红1.8ml蛋白胨6g琼脂3g氯化钠3g尿素12g蒸馏水600ml3.2制备上层制备：成分混合后，加热溶解，校正pH至7.6，分装三角烧瓶内，115℃灭菌15分钟。下层制备：下层成分（除尿素外）混合后，加热溶解，校正pH至7.2，然后加入尿素分装每管约1.5ml，115℃灭菌15～20分钟。再取葡萄糖0.5g、0.1%酚红溶液10ml混入已溶解的琼脂中。充分摇匀，使其溶解，分装于试管中，每管约1.5ml，置高压灭菌器内，经115℃灭菌10分钟。取出后，待其直立凝固。下层凝固后，用无菌手续，将上层培养基成热装于下层培养基上面。凝固后将其置于37℃培养箱中，培养18～24小时，如无杂菌污染，可存于冰箱中备用。4．质控大肠埃希菌ATCC25922，三糖铁琼脂上、下层均为黄色，福氏志贺菌CMCC51573，三糖铁琼脂上层不变，下层为黄色。5.操作步骤挑取纯菌落接种于三糖铁琼脂上，35℃孵育18～24小时。6.结果判断出现黑色沉淀物为硫化氢阴性。7.注意事项三糖铁琼脂上下层配制时，高压灭菌时掌握好温度和时间，以免培养基中的糖被分解。8.临床意义三糖铁琼脂用于观察细菌对糖的发酵能力，以及是否产生硫化氢，可初步鉴定细菌的种属。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999（周庭银）编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书葡萄糖O∕F试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0538版本：20140601生效日期：20140615共1页1.目的规范O∕F试验标准操作规程。2.原理又称氧化∕发酵（O∕F）试验，观察细菌对葡萄糖分解过程中是利用分子氧（氧化型），还是无氧酵解（发酵型），或不分解葡萄糖（产碱型）。3.试剂3.1O∕F基础培养基成分葡萄糖10g溴甲酚紫（1.6%水溶液）1.0ml蛋白胨20g琼脂3g磷酸氢二钾0.2g氯化钠5g蒸馏水1000ml3.2制备上述成分除指示剂外加热溶解后校正pH至7.1，加入指示剂并分装13×100mm的试管，每管2～3ml，置高压灭菌器内，经115℃15分钟的灭菌，即为O∕F基础培养基。最终糖浓度为1%。4.质控铜绿假单胞菌ATCC27853开放管为黄色，封闭管为紫色；大肠埃希菌ATCC25922开放管、封闭管均为黄色。5.操作步骤从平板上或斜面培养基上挑取少量细菌，同时穿刺接种于2支O∕F试验管，其中1支用滴加溶化的无菌凡士林（或液体石蜡）覆盖培养基液面0.3～0.5cm高度。经37℃培养48小时后，观察结果。6.结果判断仅开放管产酸为氧化反应，两管都产酸为发酵反应，两管均不变为产碱型。7.注意事项有些细菌不能在O∕F培养基上生长，若出现此类情况，应在培养基中加入2%血清或0.1%酵母浸膏，重做O∕F试验。8.临床意义葡萄糖O∕F试验可用于葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型细菌，后者为氧化型细菌。更重要的是用于革兰阴性杆菌的鉴别，肠杆菌科的所有细菌为发酵型细菌，而绝大多数的非发酵菌则为氧化型或产碱型细菌。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书甲基红试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0539版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范规范甲基红试验标准操作规程。2．原理某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步代谢分解为乳酸、甲酸、乙酸，使培养基的ph下降到4.5以下，加入甲基红指示剂即显红色（甲基红变红的范围为ph4.4～6.0）；某些细菌虽能分解葡萄糖，但产糖量少，培养基的ph在6.2以上，加入甲基红指示剂呈黄色。3．试剂3.1葡萄糖蛋白胨水培养基成分多价蛋白胨7g葡萄糖5g磷酸氢二钾5g蒸馏水1000mlPH7.23.2制备将上述成分混合溶解后，分装小试管，高压120℃灭菌15分钟。3.3试剂甲基红0.1g95％乙醇300ml蒸馏水200ml4．质控大肠埃希菌ACTT25922为红色，阴沟肠杆菌ACTT13047为黄色。5.操作步骤将待检菌接种至葡萄糖蛋白胨水培养基中，35℃孵育1～2日，加入甲基红试剂2滴，立即观察结果。6.结果判断红色者为阳性，黄色者为阴性。7.注意事项7.1培养基中的蛋白胨水可影响甲基红试验结果，在使用每批蛋白胨水之前用已知甲基红阳性菌和阴性菌做质量检测。7.2甲基红反应并不因增加葡萄糖的浓度而加快。7.3孵育时间不得少于48小时，若过早地判断结果，往往可造成假阴性。8.临床意义主要应用于鉴别大肠杆菌和产气杆菌。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书VP试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0540版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范规范VP试验标准操作规程。2．原理某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步代谢分解为乙酰甲基甲醇，后者在碱性环境下被空气中的氧氧化成为二乙酰，进而与培养基中的精氨酸等所含的胍基结合，形成红色的化合物，即VP试验阳性。3．试剂3.1葡萄糖蛋白胨水培养基成分多价蛋白胨7g葡萄糖5g磷酸氢二钾5g蒸馏水1000mlPH7.23.2制备将上述成分混合溶解后，分装小试管，高压120℃灭菌15分钟。3.3试剂甲液：6％ɑ萘酚酒精溶液；乙液：40％KOH溶液4．质控大肠埃希菌ACTT25922为无红色出现，肺炎克雷伯菌ACTT13883为红色。5.操作步骤5.1将待检菌接种至葡萄糖蛋白胨水培养基中，35℃孵育1～2日。5.2观察方法-贝氏（Barritt）法观察时按每2ml培养液加甲液1ml、乙液0.4ml混合，置35℃，15～30分钟出现红色为阳性。若无红色，应置37℃，4小时后再判定，本法较奥氏法敏感。6.结果判断呈红色者为阳性。7.注意事项7.1许多实验室工作人员有一个错误的印象，即VP试验阳性菌甲基红试验自然是阴性，或反之亦然。实际上，肠杆菌科的大多数细菌产生相反的反应（由于乙酰甲基甲醇形成碱性，导致甲基红试验阴性和VP试验阳性）。某些细菌如蜂房哈夫尼菌和奇异变形杆菌，35℃培养可产生甲基红试验和VP试验同时阳性反应，后者常延迟出现。7.2ɑ萘酚酒精溶液易失效，试剂放室温暗处可保存1个月。KOH溶液可长期保存。国内多采用贝氏法。8.临床意义本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者阳性的细菌，后者通常为阴性，反之亦然。如大肠埃希菌、沙门菌等甲基红呈阳性反应，而VP试验则为阴性；相反，如沙雷菌、阴沟杆菌等，VP试验阳性，而甲基红反应为阴性。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书吲哚试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0541版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范规范吲哚试验标准操作规程。2．原理某些细菌具有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚与试剂对二甲氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。3．试剂3.1葡萄糖蛋白胨水培养基成分蛋白胨（或胰蛋白胨）10g氯化钠5.0g蒸馏水1000mlPH7.23.2制备将上述成分溶于水中，校正PH至7.2，分装试管，每管2～3ml,置120℃灭菌15分钟备用。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为红色，肺炎克雷伯菌ACTT13883为无色。5.操作步骤将待检菌接种至葡萄糖蛋白胨水培养基中，35℃孵育1～2日，沿管壁慢慢加入柯凡可（Kovacs）试剂0.5ml，即刻观察结果。6.结果判断两液面交界处呈红色者为阳性，无红色者为阴性。7.注意事项蛋白胨中应含有丰富的色氨酸，否则不能应用。8.临床意义主要应用于鉴别肠杆菌。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书硝酸盐还原试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0542版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范规范硝酸盐还原试验标准操作规程。2．原理硝酸盐培养基中的硝酸盐可被某些细菌还原为亚硝酸盐，后者与乙酸作用生成亚硝酸。亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸，再与ɑ奈胺结合成红色的N-ɑ奈胺偶氮苯磺酸。3．试剂3.1硝酸盐培养基成分蛋白胨10g硝酸钾（AR）2g蒸馏水1000mlPH7.43.2制备将上述成分混合后，加热溶解，调PH至7.4，分装试管，每管约4ml,置120℃灭菌15分钟备用。3.3试剂配制甲液：对氨基苯磺酸0.8g5mol／L乙酸100ml乙液：ɑ奈胺0.5g5mol／L乙酸100ml4．质控大肠埃希菌ACTT25923为阳性，鲍曼不动杆菌ACTT19606为阴性。5.操作步骤将待检菌接种至硝酸盐培养基中，35℃孵育1～2日，加入试剂甲液和乙液各2滴，即刻观察结果。若加入硝酸盐试剂不出现红色，需检查硝酸盐是否被还原。可于原试管内再加入少许锌粉，如出现红色，证明产生芳基肼，表示硝酸盐仍然存在；若仍不产生红色，表示硝酸盐已被还原为氨和氮，也可在培养基内加1支小试管，若有气泡产生，表示有氮气生成，用以排除假阴性。6.结果判断呈红色者为阳性。若不呈红色，再加入少许锌粉，如仍不变为红色者为阳性，表示培养基中的硝酸盐已被细菌还原为亚硝酸盐。进而分解成氨和氮。加入锌粉后变为红色者为阴性，表示硝酸盐未被细菌还原，红色反应是由于锌粉的还原所致。7.注意事项本试验在判定结果时，必须在加入试剂之后立即判定结果，否则因颜色迅速退色而造成判定困难，如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等。8.临床意义本试验在细菌鉴定中广泛应用，肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐，部分假单胞菌产生氮气。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书脲酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0543版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范脲酶试验标准操作规程。2．原理某些细菌具有脲酶，能分解尿素生成氨，使培养基变碱，酚红指示剂随之变红色。3．试剂3.1尿素氮培养基成分蛋白胨1.0g氯化钠2.0g葡萄糖1.0g磷酸二氢钾2.0g0.4％酚红溶液3.0ml琼脂18～20g20％尿素溶液100ml蒸馏水1000mlPH7.03.2制备将上述成分(除酚红、尿素外)混合于蒸馏水中，加热溶解，校正PH，加入酚红溶液，分装每瓶100ml，置120℃灭菌15分钟备用。临用时，加热溶解，冷却至55℃左右，加入无菌的尿素溶液10ml，摇匀，无菌分装于灭菌试管，每支2ml，并置成斜面备用。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为阴性，奇异变形杆菌ACTT49005为阳性。5.操作步骤将待检菌接种至含尿素培养基中，35℃孵育1～4日。6.结果判断红色者为阳性。7.注意事项所有尿素培养基均依靠出现碱性来证实，故对脲酶不是特异性的。某些细菌如铜绿假单胞菌利用培养基的蛋白胨可分解为多量氨基酸，使PH升高呈碱性，造成假阳性。因此必须用无尿素的相同培养基作为对照。8.临床意义主要应用于肠杆菌科中的变形杆菌属细菌的鉴别。奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0544版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程。2．原理某些细菌能产生氨基酸脱羧酶，使该种氨基酸脱去羧基，生成胺（如赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺），从而使培养基变碱性，指示剂变色。3．试剂3.1基础液成分蛋白胨5g牛肉浸膏5g溴甲酚紫0.1g甲酚红0.005g吡躲醛（VB6）0.005g葡萄糖0.5g蒸馏水1000ml3.2制备基础液加热慢慢溶解，按1％浓度加入赖氨酸，调PH至6.0，呈深亮紫色。分装每支4ml，同时配对对照管（不加氨基酸），置120℃灭菌15分钟，冷却后冷藏备用。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为紫色，福氏志贺菌CMCC51573为黄色。5.操作步骤挑取纯菌种接种于含赖氨酸的培养基及不含氨基酸的对照培养基中，加无菌石蜡油覆盖，35℃孵育4日，每日观察结果。6.结果判断若仅发酵葡萄糖显黄色，为阴性；由黄色变为紫色，为阳性。对照管为黄色。7.注意事项7.1由于脱羧酶培养基含有蛋白胨，培养基表面的蛋白胨氧化和脱氨基作用可产生碱性反应，所以培养基应密封。隔绝空气，以消除假阳性反应。7.2不含氨基酸的空白对照管，孵育18～24小时后，仍保持黄色（发酵葡萄糖）。8.临床意义沙门菌属中除甲型沙门菌赖氨酸反应阳性，志贺菌属和枸橼酸杆菌属均为阴性。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书鸟氨酸脱羧酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0545版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范鸟氨酸脱羧酶试验标准操作规程。2．原理某些细菌能产生某种氨基酸脱羧酶，使该种氨基酸脱去羧基，生成胺（如赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺），从而使培养基变碱性，指示剂变色。3．试剂参见《赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程》。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为紫色，为阳性；福氏志贺菌CMCC51573变为黄色，为阴性。5.操作步骤挑取纯菌种接种于含鸟氨酸的培养基及不含氨基酸的对照培养基中，加无菌石蜡油覆盖，35℃孵育4日，每日观察结果。6.结果判断若仅发酵葡萄糖显黄色，为阴性；由黄色变为紫色为阳性。对照管（无氨基酸）为黄色。7.注意事项参见《赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程》8.临床意义沙门菌属中，除伤寒沙门菌和鸡沙门菌外，其余鸟氨酸脱羧反应均为阳性；克雷伯菌属鸟氨酸脱羧反应均为阴性。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书精氨酸双水解酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0546版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范精氨酸双水解酶试验标准操作规程。2．原理精氨酸经两次水解后，生成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在脱羧酶的作用下生成腐胺。氨及腐胺均为碱性物质，故可使培养基变色。3．试剂参见《赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程》。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为紫色，为阳性。普通变形菌CMCC49001显黄色，为阴性。5.操作步骤挑取纯菌种接种于含精氨酸的培养基及不含氨基酸的对照培养基中，加无菌石蜡油覆盖，35℃孵育1～4日，每日观察结果。6.结果判断若仅发酵葡萄糖显黄色，为阴性；由黄色变为紫色，为阳性。对照管（无氨基酸）为黄色。7.注意事项参见《赖氨酸脱羧酶试验标准操作规程》。8.临床意义主要应用于鉴别肠杆菌科及假单胞菌属。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书苯丙氨酸脱氨酶试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0547版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范苯丙氨酸脱氨酶试验标准操作规程。2．原理某些细菌能产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸，与三氯化铁作用形成绿色化合物。。3．试剂3.1苯丙氨酸琼脂成分DL-苯丙氨酸2g氯化钠5g酵母浸膏3g磷酸氢二钠1g琼脂12g蒸馏水1000mlPH7.33.2制备除琼脂外其他的成分加热溶解，调PH至7.3，再加入琼脂溶解后分装，每管约4ml,置120℃灭菌15分钟，置成斜面，凝固后冰箱保存，备用。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为黄色，阴性；普通变形杆菌CMCC49001为绿色，阳性。5.操作步骤将待检菌接种至苯丙氨酸琼脂斜面，35℃孵育18～24小时，在生长的菌苔上滴加三氯化铁试剂，即刻观察结果。6.结果判断斜面呈绿色者为阳性。7.注意事项7.1注意接种菌量要多，否则出现假阴性反应。7.2苯丙氨酸脱氨酶试验需在加入三氯化铁试剂后，立即观察，因为绿色易很快褪去，不管阳性或阴性结果，都必须在5分钟内作出判断。8.临床意义本试验特异性较高，主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌、普罗威登斯菌和摩根摩根菌均为阳性，肠杆菌科其他细菌则为阴性。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书枸盐酸盐利用试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0548版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范枸盐酸盐利用试验标准操作规程。2．原理在枸盐酸盐培养基中，细菌能利用的碳源只有枸盐酸盐。当某种细菌能利用枸盐酸盐时，可将其分解为碳酸钠，使培养基变碱性，PH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深蓝色。3．试剂3.1枸盐酸盐培养基成分硫酸镁0.2g磷酸二氢铵1g磷酸二氢钾1g枸盐酸纳2g氯化钠5g琼脂15g2g/L溴麝香草酚蓝溶液4ml蒸馏水1000ml3.2制备加热溶解，校正PH至7.0，分装试管，每管3ml,置115℃灭菌15分钟，冰箱中备用。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为绿色，阴性；肺炎克雷伯菌ACTT13883为蓝色，阳性。5.操作步骤将待检菌接种至枸盐酸盐培养基斜面，35℃孵育1～7日。6.结果判断培养基由淡绿色变为深蓝色为阳性。7.注意事项接种时菌量应适宜，过少可发生假阴性，接种时过量可导致假阳性。8.临床意义有助于于鉴别肠杆菌科细菌。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书丙二酸盐利用试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0549版本：20140601生效日期：20130801共1页1．目的规范丙二酸盐利用试验标准操作规程。2．原理在丙二酸盐培养基中，细菌能利用的碳源只有丙二酸盐。当某种细菌能利用丙二酸盐时，可将其分解为碳酸钠，使培养基变碱性，使指示剂由绿色变为蓝色。3．试剂3.1枸盐酸盐培养基成分硫酸胺2g酵母浸膏1g磷酸二氢钾0.4g磷酸氢二钾0.6g氯化钠2g丙二酸盐3g溴麝香草酚蓝0.025g蒸馏水1000ml3.2制备将上诉溶液混合，校正PH至7.1左右。用滤纸过滤，分装试管每管约3ml,置115℃灭菌15分钟，冰箱中备用。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为绿色，阴性；肺炎克雷伯菌ACTT13883为蓝色，阳性。5.操作步骤将待检菌接种至丙二酸盐培养基上，35℃孵育1～2日，观察结果。6.结果判断培养基由绿色变为蓝色为阳性。7.注意事项某些利用丙二酸盐的细菌产碱量少，造成判断困难。可将其与未接种的培养基进行对比。培养48小时后，有蓝色反应为阳性，阴性结果必须在培养48小时后才能作出判断。8.临床意义肠杆菌科中亚利桑那菌和克雷伯菌属为阳性，枸盐酸盐杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属有不同生物型反应，其他各菌属均为阴性。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书硫化氢试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0550版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范硫化氢试验标准操作规程。2．原理细菌分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸）生产硫化氢，硫化氢遇铅或铁离子生成黑色硫化物。3．试剂3.1醋酸铅培养基成分蛋白胨10g硫酸钠0.1g蒸馏水1000ml胱氨酸0.1g3.2制备将上述成分加热溶解，调PH至7.0～7.4，分装试管，每管液体高度为4～5cm,置120℃灭菌20分钟备用。4．质控普通变形杆菌CMCC49001阳性，为黑色；肺炎克雷伯菌ATCC13883阴性，为黄色。。5.操作步骤将培养物接种于醋酸铅培养基或克氏铁琼脂等培养基，35℃孵育1～2日，观察结果。6.结果判断呈黑色为阳性。7.注意事项如用克氏铁琼脂等培养基，则可有硫代硫酸钠、硫酸钠或亚硫酸钠还原产生硫化氢，阳性时可与二价铁生成黑色的硫化氢，阴性不产生黑色沉淀。8.临床意义肠杆菌科中沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸盐酸杆菌属和变形杆菌属细菌绝大多数硫化氢试验阳性。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书ONPG试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0551版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范ONPG试验标准操作规程。2．原理ONPG试验又称半乳糖苷酶试验。某些细菌具有半乳糖苷酶，可分解邻-硝基酚--D-半乳糖，生成黄色的邻-硝基酚。3．试剂3.1成分试剂甲：0.01mol/LPH7.0磷酸氢二钠缓冲液100ml试剂乙：蛋白胨3.0g氯化钠1.5g蒸馏水300mlPH7.03.2制备将甲、乙液分别置121℃灭菌15分钟，冷却至40～50℃，乙液加入ONPG0.6g，置56℃水浴中加热溶解，无菌过滤，将滤液与甲液合并分装试管，每管2ml，作无菌试验后备用。4．质控大肠埃希菌ACTT25922为黄色，奇异变形杆菌ACTT49005为无色。5.操作步骤将纯菌落用无菌盐水制成浓的菌悬液，加入ONPG溶液0.25ml，35℃水浴，于20分钟和3小时观察结果。6.结果判断通常在20～30分钟内显色。出现黄色为阳性反应。7.注意事项7.1ONPG溶液不稳定，培养基呈黄色即不可使用。7.2ONPG试验结果不一定与分解乳糖相一致。8.临床意义用于测定不发酵或迟缓发酵乳糖的细菌是否产生此酶，亦可用于迟发酵乳糖细菌的快测鉴定。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书沙门菌血清学检测标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0552版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范沙门菌的血清学检测标准操作规程。2．原理用已知的沙门菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为沙门菌。3．试剂沙门菌诊断血清，生理盐水。4．质控伤寒沙门菌ATCC50096阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。5.操作步骤5.1首先用可疑菌与沙门菌O多价血清(A-F)进行凝集，若呈明显凝集，提示被检菌株可能属于A-F6个O群范围之内，再用H因子血清第一相（特异相）定型，最后用H因子第二相（非特异相）辅助定型。5.2若生化反应符合沙门菌，但A-F多价血清不凝集，首先考虑是否存在表面抗原（Vi抗原），因为Vi抗原能阻断O抗原与相应抗体发生凝集，加热可将其破坏。应将细菌制成菌悬液，放入沸水中加热15～30分钟，冷却后再次做凝集试验。若去除Vi抗原后仍不凝集，此时应考虑是否为A-F以外菌群，应送专业实验室进行鉴定。6.结果判断阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。自凝：试验一侧及对照一侧凝集。7.注意事项伤寒沙门菌菌体表面常有一层Vi抗原。它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。此时应将菌悬液于100℃中煮沸1小时，以破坏Vi抗原，然后再做试验。8.临床意义主要用于沙门菌属的鉴定。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书志贺菌血清学检测标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0553版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范志贺菌的血清学检测标准操作规程。2．原理用已知的志贺菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为志贺菌。3．试剂志贺菌诊断血清，生理盐水。4．质控福氏志贺ATCC12022阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。5.操作步骤5.1首先用志贺菌属4种多价血清作玻片凝集，如凝集再进一步作血清定型（用福氏志贺菌1-6型、痢疾志贺菌1-2型、鲍氏志贺菌1-6型及宋氏志贺菌鉴定到种、型）。一般先用福氏志贺菌血清凝集，因我国以B群最为多见，若出现生化反应符合志贺菌，而与4种多价血清不凝集的菌株，应考虑为K抗原存在，将菌液加热到100℃15-30分钟后再进行凝集。5.2与各型志贺菌血清不发生凝集，菌落特征与生化反应似痢疾志贺菌，可考虑非典型痢疾血清型，应送专业实验室进行鉴定。6.结果判断阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。自凝：试验一侧及对照一侧凝集。7.注意事项志贺菌菌体表面常有一层K抗原。它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集，从而导致假阴性结果。此时应将菌悬液于100℃中煮沸15-30分钟，以破坏K抗原，然后再做试验。8.临床意义主要用于志贺菌属的鉴定。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书致病性大肠埃希菌血清学检测标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0554版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范致病性大肠埃希菌的血清学检测标准操作规程。2．原理在确定大肠杆菌后，用已知的致病性大肠埃希菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为致病性大肠埃希菌。3．试剂致病性大肠埃希菌诊断血清，生理盐水。4．质控致病性大肠埃希菌阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。5.操作步骤5.1先以生化反应确定为大肠埃希菌，再以抗原分析定型。5.2用接种环挑取大肠埃希菌依次于数组多价OK抗血清作玻片凝集试验（其分组血清型见试剂盒说明书），若与某一单价血清呈凝集反应，可初步确定为相应血清型，再用菌液与OK抗血清确定亚型。5.3若不凝集或凝集微弱，可视为阴性。再挑取另一个菌落，如上法试验，如此检查5-10个菌落，可最终判定为阴性。6.结果判断阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。自凝：试验一侧及对照一侧凝集。7.注意事项大肠埃希菌各血清型间的抗原关系十分密切，特别是O抗原玻片凝集反应仅作为阴性标本筛选，确定试验须作定量凝集试验。8.临床意义主要用于致病性大肠埃希菌的血清学鉴定。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书霍乱弧菌血清学检测标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0555版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范霍乱弧菌的血清学检测标准操作规程。2．原理用已知的霍乱弧菌诊断血清在载玻片上直接与细菌培养物或菌悬液混合，若出现肉眼可见的特异性凝集块，表示该菌即为霍乱弧菌。3．试剂霍乱弧菌诊断血清，生理盐水。4．质控霍乱弧菌ATCC14035阳性；大肠埃希菌ATCC25922阴性。5.操作步骤5.1先用接种环取1环生理盐水于玻片上，以接种针挑取少许菌落与盐水混匀，再取稀释血清1环与之混合，立即出现凝集者为阳性。5.2若有自凝现象改用生理盐水稀释的血清再做凝集。与O1群霍乱弧菌血清凝集者即可定为霍乱弧菌，然后再进一步对霍乱弧菌分型。6.结果判断阴性：试验一侧及对照一侧均为混浊。阳性：对照一侧均为混浊，试验一侧明显凝集。自凝：试验一侧及对照一侧凝集。7.注意事项试验时应同时用生理盐水作对照，以防止出现假阳性。8.临床意义主要用于霍乱弧菌的鉴定。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]王钦升，周正明，高屹主编.实用医学培养基手册.北京：人民军医出版社，1999编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书血清牙管形成试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0556版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范血清牙管形成试验标准操作规程。2．原理白念珠菌在血清中能形成牙管，借此可鉴定酵母样真菌。3．试剂血清，生理盐水。4．质控白念珠菌ATCC14053阳性；光滑念珠菌ATCC710阴性。5.操作步骤用无菌试管加血清0.2-0.5ml，接种少量真菌，经充分震荡混合数分钟后，在37℃恒温箱培养。每隔1小时用接种环取1滴含菌血清，于玻片上镜检。6.结果判断白念珠菌的牙管形状是从孢子生出一个芽，其长为细胞的3-4倍，末端的宽为细胞的二分之一。7.注意事项牙管形成试验要在37℃3小时内完成，同时做阴阳性对照。8.临床意义主要用于白念珠菌的鉴定。参考文献[1]周庭银编著.临床微生物诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007[2]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书解脲脲原体试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0557版本：20140601生效日期：20140615共1页1．目的规范解脲脲原体试验标准操作规程。2．原理解脲脲原体在合适其生长的培养基中分解培养基底物，使培养基的PH值上升，培养基由黄色变红。3．试剂解脲脲原体培养基。4．质控解脲脲原体ATCC27618阳性。5.操作步骤将取样后棉拭子插入培养基中充分荡洗，棉拭子在管壁上挤干水分后丢弃；液态标本取150-200ul直接加入培养基中摇匀，35℃培养18～24小时后，观察结果。6.结果判断培养基由橙色变成红色且清亮为阳性，表示有脲原体生长。培养基不变色为阴性。7.注意事项培养基接种到药敏板前腰充分摇匀。培养基变红但混浊，不能报阳性，或重做试验。8.临床意义解脲脲原体主要引起人体泌尿生殖系统的感染，如急性尿道综合症、非淋菌性尿道炎，也可引起肾盂肾炎、阴道炎和盆腔炎等。参考文献[1]叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006[2]解脲脲原体培养基说明书编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书G试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0558版本：20160415生效日期：20160415共2页1．目的规范G试验标准操作规程。操作授权人经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。用途：4．原理真菌（1，3）-β-D葡聚糖能特异性激活反应主剂中的G因子、凝固酶原等，发生凝固蛋白原转变的级联反应从而引起吸光度的变化，根据检测气吸光度的变化从而对真菌（1，3）-β-D葡聚糖浓度进行定量，试剂中添加的两性电解质甘氨酸、氨基糖苷类抗生素机表面活性剂可抑制脂多糖对B、C因子的激活，对革兰阴性脂多糖有特异性屏蔽作用。5．样本要求5.1血清的制备：用一次性无热源真空采血管采静脉血4ml，进行3000rpm/min离心10-15min分得血清2小时内检测。5.2血清保存：标本需冷藏于2-8℃下不超过24小时避免反复冻融。产品如果需要运输，则应该冷藏运输。5.3标本前处理：取上述血清0.1ml，加入0.9ml样品处理液中，混匀后70℃孵育10min，取出后立刻放入冷却槽中冷去5min，即为待测血清样品。。6．操作步骤：取待测血清0.2ml直接加入酶反应主剂中，溶解后使用微量加样器转移至9*65mm标准无热源平底试管中，然后再加入0.1ml反应主剂溶液，混匀后，插入MB-80微生物快速动态检测系统中进行反应，反应结束后检测系统自动计算出待测血清中真菌（1，3）-β-D葡聚糖含量。注：每批试剂盒由厂家提供参考标准曲线。定标使用真菌（1，3）-β-D葡聚糖纯品，纯度>98%。7.结果判断结果解释：参考值：正常血清真菌（1，3）-β-D葡聚糖值<60pg/ml。60pg/ml以下，无深部真菌感染（隐球菌、接合菌除外）：60-100pg/ml之间，为观察期，应连续检测。100pg/ml以上，怀疑为深部真菌将感染，建议临床结症状治疗。8.注意事项8.1、只能检测（1，3）-β-D葡聚糖含量，不能区分真菌种属，不能检测接合菌和隐球菌。8.2、实验操作应在无菌无热源的环境下，避免微生物细菌污染8.3、无菌无热源的采血管（建议采用BD血清管），保证试验数据的准确。8.4、干扰因素：①应用纤维素膜进行血液透析患者；②某些纱布或其他医疗物品中含有葡聚糖；③静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）含有葡聚糖；④某些细菌败血病患者（尤其是链球菌败血症）；⑤抗肿瘤药物（香菇多糖、裂殖菌多糖）；⑥磺胺类药物；⑦蘑菇类食物。参考文献[1]真菌（1，3）-β-D葡聚糖检测试剂盒配套说明书[2]中国合格评定国家认可委员会．CNAS-CL31：2007医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的应用说明.2007[3]中国合格评定国家认可委员会。CNAS-CL02：2008医学实验室质量和能力认可准则（ISO15189：2007）.2008编写人：AAA、BBB操作人：本室操作人员批准人：XXX医院检验科微生物检验实验室作业指导书GM试验标准操作规程文件编号：XXX-JY-CZ-WSW-0559版本：20140601生效日期：20140615共2页1．目的规范GM试验标准操作规程。2.操作授权人经过培训并通过考核的微生物实验室工作人员。3.用途：采用酶联免疫双抗体夹心一步法（ELISA）半定量检测人血清标本中半乳甘露聚糖抗原。4．原理采用双抗体夹心ELISA方法检测血