华支睾吸虫生活史的室内生态系统研究

华支睾吸虫生活史的室内生态系统研究

华支睾吸虫病是我国常见的食源性人兽疾病。华支睾吸虫的第一中间宿主为淡水螺类,第二中间宿主为淡水鱼、虾,人为其终宿主,主要保虫宿主有猫、犬、鼠、猪和狐狸等多种动物材料和方法1hs-pahs螺、cyprinus、鱼、罗非鱼和hylapo掌握药物本成年家猫,2.0~2.5kg,雌雄不限,购自珠江三角洲地区自由市场。纹沼螺和鱼类[麦穗鱼(Pseudorasboraparva)、鳑鮍鱼(Rhodeussericeusamarus)、草鱼(Ctenopharynodonidellus)、鲮鱼(Cirrhinusmolitorella)和鲤鱼(Cyprinuscarpio)、鳙鱼(Aristichthysnobilis)、鲫鱼(Carassiusauratusauratus)和罗非鱼(Tilapianilotica)]采自广东省阳山县郊区鱼塘,长角涵螺采自广东省梅州市郊区鱼塘,实验前镜检确认感染华支睾吸虫。雌性SD大鼠(SPF级),150~160g,购自中山大学北校区实验动物中心。2为船只和鱼类提供食物池的建设实验室内螺类、鱼类饲养池占地面积约22m3成虫培养与清洗液的制备主要参照文献[8]方法进行,解剖感染家猫取出肝脏,采用挤压法将成虫挤出,置含有生理盐水的培养皿内,37℃孵育24h。待成虫充分产卵,吸取培养皿底部的虫卵,离心,收集虫卵,备用。剪开肝胆管,生理盐水冲洗,收集清洗液,自然沉淀20min,弃上清;生理盐水反复清洗,至沉淀液清晰为止,收集沉淀的虫卵,备用。4尾逸出情况观察将螺放入培养皿内观察2周,未见尾蚴逸出,移入生态室的养殖缸内正常养殖。待螺长至0.5cm,将上述收集的华支睾吸虫卵放入养殖缸,自然感染螺类。为确定尾蚴逸出的准确时间,分别于螺类感染后第60天、80天进行尾蚴逸出实验。主要步骤为:随机取纹沼螺100只,长角涵螺50只,分别置培养皿(10cm×10cm)中,10只/皿,加入10ml水,白炽灯下静置24h,解剖镜观察逸出尾蚴情况。感染后60d和80d的两种螺分别连续观察20d,记录尾蚴开始逸出的确切时间。确定有尾蚴逸出后,随机取纹沼螺200只,长角涵螺50只,分别单独放入方皿(4cm×4cm)内,孵育24h,解剖镜下连续观察3d,将有尾蚴逸出的阳性螺放入养殖缸内,与鱼类共同饲养,感染鱼类。5华支睾丸吸虫感染试验当阳性螺与鱼类共同饲养1个月后,随机抽检养殖缸内的麦穗鱼、鳑鮍鱼、草鱼(苗)、鲮鱼(苗)和鲤鱼、鳙鱼、鲫鱼和罗非鱼华支睾吸虫的感染情况。取鱼肉压片检查,计算鱼肉内囊蚴的感染率。再经过6个月的养殖,捞取缸内的各种鱼,去鱼鳞后,取1g背部肌肉,捣碎后放入小烧杯内,加入30ml新配制的人工消化液(胃蛋白酶3g、盐酸7ml和生理盐水1000ml),搅匀后置37℃温箱,3~6h后取出,弃上液,生理盐水清洗3次,收集沉淀,置解剖镜下观察,记录每克鱼肉的囊蚴数6囊经口注入型4只家猫在动物养殖房饲养2周,期间进行3次粪检,证实未感染华支睾吸虫后,进行人工感染。用乙醚麻醉家猫,用灌注注射器将华支睾吸虫囊蚴经口直接注入食道下段或胃内,120个/猫。取SD大鼠12只,均分3组,乙醚麻醉后,用灌注注射器吸取华支睾吸虫囊蚴经口注入胃内。第1、2和3组每鼠分别感染20、40和80个囊蚴,感染46d后取其粪便,生理盐水直接涂片法检查。将检获成虫移入生理盐水内,37℃孵育24h,使其自然排空子宫内成熟虫卵,再将虫卵放入阴性螺类养殖缸内,以便再感染,从而建立实验室内华支睾吸虫生活史循环系统。结果1尾逸出和螺类养殖全年饲养缸的水温为7.8~37.2℃,1~2月最低为7.8~23.2℃,7~8月最高为25~37.2℃。水温在24.3~37.2℃时,螺类感染后第95天有尾蚴逸出。纹沼螺和长角涵螺的感染率分别为12.5%(25/200)和18%(9/50)。尾蚴逸出是间歇性的,每逸出4~5d即停止2~3d,然后再逸出。当水温降至20℃时,尾蚴停止逸出。每年4月下旬~6月中旬,及10月中旬~11月中旬,水温在20~25℃时,逸尾蚴螺类与各种鱼类共同饲养30d后,8种鱼均检到囊蚴,但尚未成熟,其囊壁不清晰且排泄囊内未见排泄物;共同饲养45d后,囊蚴的囊壁清晰透亮,且排泄囊内充满黑色排泄物。鱼类反复感染尾蚴6个月后,发现麦穗鱼、草鱼、鳑鮍鱼、鳙鱼、鲮鱼、鲫鱼、鲤鱼和罗非鱼每克鱼肉平均寄生囊蚴的数量分别为1792、16、8、6、5、4、4和2个。2检获率和检获率家猫和大鼠感染华支睾吸虫囊蚴46d后,粪检到华支睾吸虫卵。50d后剖检家猫,共检获成虫402条(分别为94、97、102和109条),检获率为83.8%(402/480);3组12只大鼠共检获成虫476条,其中第1组63条(11、16、17和19条),第2组131条(30、32、34和35条),第3组282条(65、67、71和79条),检获率为85.0%(476/560)。华支睾丸吸虫感染螺、沼螺、长角涵螺等5种鱼类的感染途径在闭合式水循环生态系统中,养殖的纹沼螺、长角涵螺和上述各种淡水鱼,均能正常生长发育、繁殖。螺类感染虫卵后,经胞蚴和雷蚴发育阶段,第95天尾蚴即可发育成熟逸出,并能直接感染养殖缸内的各种鱼类。上述生