第10章-酶动力学课件

1903Henri

enzymesucrose+H2Oglucose+fructose一、底物浓度对酶促反应速度的影响

（单底物酶促反应）（一）中间复合物学说1903Henri中间复合物学说认为酶与底物先络合成一个中间产物，然后中间产物进一步分解成产物和游离的酶。中间复合物学说证据：p152S＋EESP＋E1903年，Henri以蔗糖酶研究底物浓度与反应速率的关系，提出了酶与底物作用的“中间复合物学说”。中间复合物学说认为酶与底物先络合成一个中间产物，然后中间产物（二）“稳态理论”Briggs和Haldane1925稳态理论的贡献在于：[ES]的动态平衡不仅与E+S

ES有关，还与ES

P+E有关。所谓“稳态”：ES的形成速度与分解速度相等、ES的浓度保持不变的反应状态稳态理论的贡献在于：[ES]的动态平衡不仅与E+S米氏常数：当Km及Vmax已知时，根据米氏方程可确定酶反应速度与底物浓度的关系。

米氏方程：（三）用稳态理论推导米氏方程米氏常数：当Km及Vmax已知时，根据米氏方程可确定酶反应速1.当[S]<<Km时:2.当[S]>>Km时:3.当[S]=Km时:根据米氏方程可以说明以下关系：1.当[S]<<Km时:2.当[S]>>Km时:3.当[1.当[S]<<Km时:2.当[S]>>Km时:3.当[S]=Km时:根据米氏方程可以说明以下关系：即Km是当酶反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度，单位：mol·L-1或mmol·L-1。复习

1.当[S]<<Km时:2.当[S]>>Km时:3.当[1、Km的物理意义当反应速度v=1/2Vmax时，Km=[S]，Km的物理意义是：当反应速度达到最大反应速度一半时的底物的浓度。单位：mol·L-1或mmol·L-1。Km是酶的特征常数之一，一般只与酶的种类、底物种类及反应条件有关，与酶的浓度无关。因此，在特定条件下测定酶的Km值，可以作为鉴别酶的一种手段。一些酶的Km值（见表10-1）。（四）

米氏方程中各参数的意义1、Km的物理意义（四）

米氏方程中各参数的意义有的酶可作用于几种底物，因而就有几个Km值，其中Km最小的底物称该酶的最适底物或天然底物。因为：Km愈小（达到Vmax一半所需的底物浓度愈小）,表示V对△[S]越灵敏。122、

Km可以判断酶专一性和天然底物V[S]1/2VmaxKm2Km1有的酶可作用于几种底物，因而就有几个Km值，其中Km最小的3、Km与底物亲和力Km是ES分解速度（K2+K3）与形成速度（K1）的比值。Km值近似表示酶与底物之间的亲和程度：Km值愈大，表示亲和程度愈小。第10章--酶动力学课件4、Km与米式方程的实际用途如当[S]＝3Km时（1）根据[S]求VV＝0.75Vmax如当[S]＝3Km时（1）根据[S]求VV＝0.75Vma（2）根据相对速度推测酶活性中心饱和度Y：当v=Vmax时，表明酶的活性部位已全部被底物占据，v与[S]无关，只和[E0]成正比。当v=1/2Vmax时，表示酶活性部位有一半被底物占据。（2）根据相对速度推测酶活性中心饱和度Y：当v=Vmax时，5、

Kcat的意义：催化常数或转换数Kcat是指当酶被底物充分饱和时，每秒钟每个酶分子转换底物的分子数（称为转换数或催化常数），表示酶的最大催化活力的量度。一些酶的转换数见表10-2。5、

Kcat的意义：催化常数或转换数一些酶的转换数见（五）

Km和Vmax的求解方法

Lineweaver-Burk

双倒数作图法（最常用）1/Vmax-1/Km1/[S]1/V斜率=Km/Vmax（五）

Km和Vmax的求解方法1/Vmax-1/Km1/[（一）酶的最适pH最适pH：使酶促反应速度达到最大时的pH称为该酶的最适pH。最适pH与底物种类、浓度及缓冲液成分有关。虽然大部分酶的pH—酶活曲线是钟罩形，但也有半钟形甚至直线形。二、pH对酶促反应速度的影响（一）酶的最适pH虽然大部分酶的pH—酶活曲线是钟罩形，但也（二）pH影响酶活力的原因过酸或过碱会影响酶蛋白构象，使酶活性丧失。影响酶和底物分子解离状态，尤其是酶活性中心的解离状态，最终影响ES形成。影响酶分子中一些基团解离，这些基团的离子化状态影响酶的专一性及活性中心构象。（二）pH影响酶活力的原因三、

温度对酶促反应速度的影响（一）最适温度及影响因素

最适温度：温度对酶促反应速度的影响有两个方面：

1.温度升高，加快反应速度。2.温度升高，酶变性失活。最适温度不是酶的特征常数，它与底物种类、作用时间、pH、离子强度等因素有关。温血动物酶的最适温度35℃—40℃；植物酶最适温度40℃—50℃；微生物差别大，如细菌TaqDNA聚合酶70℃。温度系数Q10：温度升高10℃，反应速度与原来的反应速度之比，大多数酶的Q10一般为1~2。三、

温度对酶促反应速度的影响（一）最适温度及影响因素第10章--酶动力学课件四、

激活剂对酶促反应速度的影响（一）无机离子的激活作用无机离子：1.金属离子：K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Fe2+、Ca2+等；2.无机阴离子：Cl－、Br－、

PO43－等；

特点：1.激活剂的选择性，即不同的离子激活不同的酶。2.不同离子之间有拮抗作用和可替代作用，如Na+与K+、Mg2＋与Ca2＋之间常常拮抗，但Mg2＋与Zn2+常可替代。3.激活剂的浓度要适中，过高往往有抑制作用，1~50mM激活剂：凡是能提高酶活性的物质，都称为激活剂。包括无机离子或简单有机化合物。许多金属离子是酶的辅助因子，是酶的组成成分，参与催化反应中的电子传递。有些金属离子可与酶分子肽链上侧链基团结合，稳定酶分子的活性构象。有的金属离子通过生成螯合物，在酶与底物结合中起桥梁作用。四、

激活剂对酶促反应速度的影响（一）无机离子的激活作用（二）小分子有机物的激活作用

1.某些激活剂（如Cys、GSH）能还原巯基酶中的某些二硫键使成-SH，-SH是巯基酶起催化作用所需的基团，提高了酶活性。

2.金属螯合剂，如EDTA(乙二胺四乙酸)，可络合一些重金属离子，解除它们对酶的抑制，从而使酶活升高。

（二）小分子有机物的激活作用五、

抑制剂对酶促反应速度的影响失活(inactivation)：凡是酶活力的降低或丧失都称为酶的失活。抑制(inhibition)：使酶活力下降或丧失但并不引起酶蛋白变性，它主要改变酶活性中心的化学性质。抑制剂（inhibitor）：引起酶的抑制作用的物质称为酶的抑制剂。五、

抑制剂对酶促反应速度的影响失活(inactivat研究抑制剂对酶的作用有重大的意义：（1）药物作用机理和抑制剂型药物的设计与开发；抗癌药（2）了解生物体的代谢途径，进行人为调控或代谢控制发酵；（3）通过抑制剂试验研究酶活性中心的构象及其化学功能基团，不仅可以设计药物，而且也是酶工程和化学修饰酶、酶工业的基础。研究抑制剂对酶的作用有重大的意义：（一）抑制程度的两种表示方法1、相对活力2、抑制分数（一）抑制程度的两种表示方法（二）抑制作用的类型1、不可逆的抑制作用:抑制剂与酶的必需基团共价结合，使酶的活性丧失，无法用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。S+EESE+P+I↓EI（二）抑制作用的类型抑制剂与酶的必需基团共价结合，2、可逆的抑制作用:抑制剂与酶以非共价键结合引起酶活力降低或丧失，可以用透折、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。根据可逆抑制剂与底物的关系分为：（1）竞争性抑制（2）非竞争性抑制（3）反竞争性抑制抑制程度是由酶与抑制剂之间的亲和力大小、抑制剂的浓度以及底物的浓度决定。抑制剂与酶以非共价键结合引起酶活力降低或丧失，可以（1）竞争性抑制（Competitiveinhibition）

酶活性部位是不能同时结合底物与抑制剂的。抑制剂具有与底物相似的化学结构，竞争酶的活性中心，并与酶形成可逆的EI复合物，阻止底物与酶结合；可以通过增加底物浓度(即提高底物的竞争能力）而解除此种抑制。第10章--酶动力学课件例如，丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。琥珀酸丙二酸例如，丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。琥珀酸丙二酸（2）非竞争性抑制（noncompetitiveinhibition）底物和抑制剂可以同时与酶结合，但是，中间的三元复合物ESI不能进一步分解为产物，因此，酶的活性降低；抑制剂与酶活性中心以外的基团结合，其结构与底物无共同之处；不能用增加底物浓度的办法来消除非竞争性抑制作用。例如；某些重金属离子（Cu2+、Hg2+、Pb2+）对酶的抑制属于非竞争性抑制。第10章--酶动力学课件酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合。E+S→ES+I→ESI

常见于多底物的酶促反应中。（3）反竞争性抑制（uncompetitiveinhibition）（3）反竞争性抑制（uncompetitiveinhib（三）可逆抑制作用与不可逆抑制作用的鉴别1、看通过透析、超滤、凝胶过滤等方法能否除去抑制剂；2、通过v—[E]动力学曲线区分。213[E]v不可逆与可逆曲线1：无抑制剂曲线2：不可逆抑制剂曲线3：可逆抑制剂（三）可逆抑制作用与不可逆抑制作用的鉴别213[E]v不可（四）可逆抑制作用的动力学推出三种抑制方程：（1）竞争性抑制（2）非竞争性抑制（3）反竞争性抑制（四）可逆抑制作用的动力学★Vmax不变；Km变大，而且随[I]浓度的增大而增大动力学方程：（Ki为EI的解离常数）

1、竞争性抑制：交于y轴★Vmax不变；Km变大，而且随[I]浓度的增大而增大动力学2、

非竞争性抑制动力学方程：★交于x轴★Km不变，Vmax降至Vmax/（1+[I]/Ki）动力学方程：★交于x轴★Km不变，Vmax降至Vmax/（13、

反竞争性抑制★★Km及Vmax都变小动力学方程：一组平行直线★★Km及Vmax都变小动力学方程：一组平行直线有无抑制剂时酶促反应的最大速度与Km值的比较类型方程式

VmaxKm反竞争性抑制非竞争性抑制竞争性抑制无抑制剂VmaxKm不变

增加减小

不变减小

减小总结有无抑制剂时酶促反应的最大速度与Km值的比较类型（五）一些重要的抑制剂（五）一些重要的抑制剂1、不可逆抑制剂①有机磷化合物有机磷化合物的化学结构式PYOXR’ROY为氧或硫。含氧的为磷酸酯类，含硫的为硫代磷酸基类。目前含硫的硫代磷酸酯类农药由于属剧毒类，现多已停止生产。市场上农药多为磷酸酯类。PYOXR’ROY为氧或硫。含氧的为磷酸酯类，含硫的为硫代磷有机磷农药呈油状或结晶状，淡黄至棕色，稍有挥发性。较易通过皮肤和黏膜、呼吸道及消化道吸收。在中毒死亡者中，因服有机磷农药中毒致死者占83.6%。

第10章--酶动力学课件病因

使用性中毒生活性中毒生产性中毒病因使用性中毒生活性中毒生产性中毒有机磷化合物能与乙酰胆碱酯酶的活性部位的Ser—OH形成磷酯键，强烈地抑制酶的活力，使乙酰胆碱不能够被分解而过分积累，导致神经系统过于兴奋，引起神经系统功能失调而中毒致死。乙酰胆碱酯酶磷酰化胆碱酯酶有机磷杀虫药中毒机制：有机磷农