高效液相试验报告

液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。液相色谱与气相色谱相比，最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质，这类物质在已知化合物中占有相当大的比例，这也确定了高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于分析中、高分子量、高沸吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。贮液装置用于存贮足够量、符合hplc要求的流动相。高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高将待测的样品引入到色谱柱的装置。液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。商品化的hplc微粒填料，如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）等的粒度通常在由于柱效内、外多种因素的影响，因此为使色谱柱达到其应有的效率hplc检测器分为通用型检测器和专用型检测器两类。通用型检测器可连续测量色谱柱流出物（包括流动相和样品组分）的全部特性变化。这类检测仪器包括示差折光检测器、介电常数检测器、电导检测器和磁光旋转检测器。这类检测器适用范围广，但是对于流流动相流速和组成变化的影响，检测灵敏度低，不能用于梯度洗脱的分离模式。专用型检测器对样品中有些软件可以实现部分仪器的控制功能。前者即一般的色谱工1六、高效液相色谱的使用中的注意事项1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5%甲醇7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；篇二：分析实验报告高效液相色谱学号：专业：年级班级：课程名称：仪器分析实验实验项目：液相色谱分析混合样品中高效液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。它是在经典液相色谱实验基础上，引入气相色谱的理论，在技术上采用高压输液泵，高效固定相和高灵敏的检测器，而发展起来的快速当两相做相对运动时，这些组分在此两相中分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。三、［仪器和试剂:］2、.选择合适的流动相配比，优化色谱条件析）（面积。绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线5、苯和甲苯混合待测溶液根据得到的苯和甲苯混合待测溶液的液相色谱图上显示的峰面积值，从绘制的标准曲线上查分析：本次实验分别选择了甲醇：水=60%40%70%30%80%20%勺溶剂配比，通过比较不同溶剂配比5.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.0-0.5分析：在同一色谱操作条件和进样量下，分别测定试样溶液中苯和甲苯组分及已知苯和甲苯严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果。若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于实验操作、计算复杂，不能快速分析，故实(1)尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增(2)避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶4.影响分离的因素与提高柱效的途径1).液体的黏度比气体大一百倍，密度为气大两个数量级，使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流(4)由于流动相的化学成分可进行广泛选择，并可配置成二元或多元体系，满足梯度洗脱的需要，因而提高了高效液相色谱的分辨率(柱效能)；(5)高效液相色谱采用5701m细颗粒固定相，使流体相在色谱柱上渗透性大大缩篇三：高效液相实验报告化学与环境化学科学学院分析化学骆洪伟20144015016高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附一解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信高效液相色谱仪主要包括高压输送系统、进样系统、分离系统、检测系统、数据处理系统及高压输液系统由贮液器、高压泵、过滤器和梯度洗脱装置组成，其核心部件是高压泵，要求洗脱装置的作用是在分离过程中，按一定程序连续改变流动相中多种不同性质溶剂的配比，以改变流动相的极性、离子强度或酸度等，从而提高试样的分离效率，缩短分析时间，使色谱峰形得到改善，提高测定的灵敏度和定量的准确度。此外，还附有加热脱气、超声波脱气等装置，以排除溶解在流动相或试液相色谱柱一般采用内壁抛光的优质不锈钢管或厚壁玻璃管。为使工作压力不致过高，柱长换树脂等，因遇到溶剂会膨胀，所以必须采用匀浆湿法填充。为防止颗粒大的填料先沉降而产生分层现象，可采用等密度溶剂(四氯乙烷和四氯乙烯混合物)配成匀浆。用高压高效液相色谱检测器要求具有灵敏度高、噪声低、线性范围宽、响应快、死体积小等特点，且对温度和流量的变化不敏感。目前，液相色谱常用检测器有紫外光度检测器、示差折光检测器、荧光检测器和电(5)有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针(7)设计走样方法。点击file,选取select?users?and?methods,可以选取现有的各种走样方法。若需建立(8)进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤完后，点击postrun,可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余(10)登记。四、注意事项1.泵的使用和维护注意事项为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作：①防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸②流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水将泵充③泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产④输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否⑤流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵①没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量(如5ml/min)下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个②压力和流量不稳。原因可能是气泡，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂③压力过高的原因是管路被堵塞，需要清除和清洗。压力在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨