超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱快速测定食品中的双胍三辛烷基苯磺酸盐、双炔酰菌胺、霉灵3种杀菌剂

超高效液相色谱-四极杆静电场轨道阱高分辨质谱快速测定食品中的双胍三辛烷基苯磺酸盐、双炔酰菌胺、霉灵3种杀菌剂

近年来，在农业、加工和保险的过程中，非法使用添加剂和添加剂，导致农业中残留颗粒的问题日益严重，并对人类的健康和生活环境构成威胁。我国新颁布的GB2763—2016食品中农药最大残留限量要求中新增了46种农药,增加了490种农药最大残留限量标准,其中双胍三辛烷基苯磺酸盐、双炔酰菌胺、噁霉灵3种杀菌剂都规定了最大残留临时限量目前杀菌剂检测方法多采用气相色谱法本研究采用改良QuEChERS前处理方法,高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱超高分辨质谱联用技术对具有很好的食用价值和药用价值的玛咖(Lepidiummeyenii)、沙棘(Hippophaerhamnoides)、菊花(Chrysanthemummorifolium)中的双胍三辛烷基苯磺酸盐、双炔酰菌胺、噁霉灵3种杀菌剂残留进行分析,方法简便、快速、准确,为有效监测食品中杀菌剂种类和含量提供了有力的技术支持。1材料和方法1.1高效液相色谱法玛咖(Lepidiummeyenii)、沙棘(Hippophaerhamnoides)、菊花(Chrysanthemummorifolium)样品:国家植物源性残留监控抽样。甲醇、乙腈:色谱纯,德国Merck公司;乙酸铵:色谱级,上海阿拉丁生化科技股份有限公司;冰醋酸、无水硫酸镁(使用前于450℃烘4h)、氯化钠:分析纯,西陇科学股份有限公司;实验用标准品双胍三辛烷基苯磺酸盐(Iminoctadinetrialbesilate)双炔酰菌胺(Mandipropamid)、噁霉灵(Hymexazol):德国Dr.Ehrenstorfer公司;实验用水:超纯水。1.2研究适用的保持因素Q-Exactive液相色谱-质谱联用系统、HypersilGOLDC18色谱柱(100mm×2.1nm,1.8µm):美国ThermoFisherScientific公司;3K15型高速冷冻离心机:德国Sigma公司;Milli-Q纯水系统:美国Millipore公司;涡旋振荡器:中国Wiggens公司;分析天平(0.01mg):瑞士Mettler公司。1.3乙腈用量的筛选精密称取10g试样(精确至0.001g,若为干样品称取1g加5mL水),置于50mL离心管中,加入乙腈(含0.1%乙酸)溶液30mL,涡旋混匀,超声提取10min,加入4.00g无水硫酸镁和1.00g氯化钠,涡旋混匀,以4000r/min离心5min,取上清液于45℃水浴下氮气吹干,分别加入0.5mL乙腈,0.5mL去离子水涡旋混匀,过0.22µm有机滤膜至进样瓶中供仪器检测。1.4设备操作参数1.4.1流动相a/l乙酸铵水溶液nm色谱柱:HypersilGOLDC18(100mm×2.1nm,1.8µm);流动相A:甲醇;B:10mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸);流速:0.3mL/min,柱温30℃;进样量:10µL;分析时间:20min;梯度洗脱程序见表1。1.4.2质量分析条件可加热电喷雾离子源(H-ESI);正离子扫描模式;FullMS-ddMS1.5标准储备液的配制分别准确称取双胍三辛烷基苯磺酸盐、双炔酰菌胺、噁霉灵标准品各10mg(精确至0.001mg)于10mL容量瓶中,以甲醇定容,配制成1.0g/L标准储备液,于冷藏条件下保存。实验中根据需要进行稀释。2结果与分析2.1色谱条件的优化本实验采用10mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)甲醇为流动相。分别考察了5、10、15mmol/L和30mmol/L乙酸铵与甲醇组成的流动相体系分离效果。发现不加酸时,3种化合物的色谱峰峰形较差;加入0.1%甲酸后峰形得到明显改善,其中10、15mmol/L和30mmol/L乙酸铵时质谱响应理想,分离效果好,综合考虑增大缓冲盐浓度容易导致色谱柱堵塞和质谱的污染,本实验采用10mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)-甲醇为流动相,通过优化实验条件采用梯度洗脱。2.2正、负离子模式下不同药剂的质谱响应在空白样品中添加3种化合物的标准溶液(0.05mg/L),分别在正、负离子模式下考察了3种杀菌剂的质谱响应。3种化合物均在正离子模式下有较强响应,因此选择在正离子模式下同时检测3种目标物质。2.3提取色谱图的建立根据3种杀菌剂的分子结构,采用正离子电喷雾模式ESI+进行检测。首先在70000分辨率下通过FullMS模式找到3种杀菌剂一级提取离子色谱图,样品基质中的3种杀菌剂提取色谱图清晰完整,可以进行准确的定性。为避免因基质复杂而导致假阳性的情况发生,同时添加了ddMS2.4标准曲线及检出限以标准品峰面积为纵坐标,对应工作溶液浓度(µg/L)为横坐标,在优化条件下考察了3种杀菌剂的线性范围和相关系数,实验结果显示3种杀菌剂在(5~500)µg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999。对混合标准溶液进行逐级稀释,以3倍信噪比计算检出限(LOD),10倍信噪比计算定量下限(LOQ),结果见表3。GB2763—2016规定了双胍三辛烷基苯磺酸盐、双炔酰菌胺、噁霉灵在各种植物源食品中的MRL,其中双胍三辛烷基苯磺酸盐在西瓜中的MRL值最小,为20µg/kg;双炔酰菌胺在马铃薯中的MRL值最小,为10µg/kg;噁霉灵在糙米中的MRL值最小,为100µg/kg,本方法均可满足其检测分析的需求。2.5回收率、精密度分别在玛咖、沙棘、菊花的空白样品中添加3种杀菌剂混合标准溶液进行加标回收实验,双炔酰菌胺、噁霉灵分别在5、10、50µg/kg3个水平做添加回收,双胍三辛烷基苯磺酸盐在25、100、500µg/kg3个水平做添加回收,每个水平平行测定6次,方法的回收率在73%~106%之间,相对标准偏差在2.1%~5.9%之间,符合农药残留测定允许范围,说明该方法的准确度和精密度符合检测要求。2.6种双临床最优制剂的检测结果分别对国家植物源性残留监控抽样提供的玛咖、沙棘、菊花样品各50个,使用本方法对其中的双胍三辛烷基苯磺酸盐、双炔酰菌胺、噁霉灵3种杀菌剂进行监测,监测结果均为未检出。方法具有较高的灵敏度和较好的重现性,可以满足市场样品监测的需求。3快速定性定量无定分法本研究建立了药