3923605505一氧化氮合酶的组织化学定位初步研究

221199918(2199918(2)东亚三角头涡虫一氧化氮合酶的组织化学定位初步研究王晓安蒋小满刘新海烟台师范学院生物系264025摘要采用一氧化氮合酶(NOS)组织化学定位方法研究了三角涡虫的NOS的分布。结果表明,三角涡虫的咽部具有NOS分布，在神经系统中未发现NOS分布。推测咽部NOS可能与其摄食有关。关键词扁形动物三角涡虫一氧化氮合酶组织化学近年来,人们发现一氧化氮在许多生理过程中起着十分重要的作用。在哺乳动物中枢神经系统中它是一种重要的神经递质。它还存在于血管内皮细胞、巨噬细胞等［1,2,3］。在一些非哺乳类动物也发现有一氧化氮的生物合成潘家祜,伍嘉宁中枢神经系统中一个新的重要信使物质生理科学进展,1993;24(4):2932974赵慧卿一氧化1氮合酶的作用机制生命的化学,11998;18(1):22242。一氧化氮的分布可以通过依赖黄素辅酶(NADPH-D)的组织化学方法进行定位［1］。至今关于一氧化氮在低等无脊椎动物的分布情况还很少有研究YudaM,MakotoH,KenMetal.cDNAcloningexpressionandcharacterizationofnitricoxidesynthasefromthesalivary2glandsoftheblood-suckinginsectRhodniusprolixus.EuropeanJournalofBiochemistry,1996;2429(3):8078126王晓安,蒋小满平角涡虫脑神经节的显微结构神经解剖学杂。三角涡虫(Dugesiajaponica)属于扁形动物门涡虫纲常见种类,分布于山间溪流中潘家祜,伍嘉宁中枢神经系统中一个新的重要信使物质生理科学进展,1993;24(4):2932974赵慧卿一氧化1氮合酶的作用机制生命的化学,11998;18(1):22242YudaM,MakotoH,KenMetal.cDNAcloningexpressionandcharacterizationofnitricoxidesynthasefromthesalivary2glandsoftheblood-suckinginsectRhodniusprolixus.EuropeanJournalofBiochemistry,1996;2429(3):8078126王晓安,蒋小满平角涡虫脑神经节的显微结构神经解剖学杂实验用三角涡虫采自山东省文登市昆嵛山，经实验室长期养殖而成。实验中选用体长2—3cm,健壮无伤的个体。材料经4%多聚甲醛(0lmol/L,pH74磷酸盐缓冲液配制)4°C固定24h,然后移入20%蔗糖溶液(0lmol/L,pH741111磷酸盐缓冲液配制)4C至材料下沉，冰冻切片8—10Mm,分别作横切和水平切。NADPH-d反应液(0lmg/mlNBT,1mg/mlNADPH,含03%Triton-X100,005mol/LpH74PBS配制)37C反应051h,切片经梯度酒精脱水，二121112甲苯透明,中性树胶封片,镜检,拍照记录结果。2结果与讨论观察经NOS成色的切片,NOS阳性反应出现在咽部:咽部的外表面表皮具有较强的阳性反应，紧靠表皮下有一层呈中等强弱的阳性反应,在咽部的腔面上,内表面的表皮具有很强的阳性反应(见图)。在涡虫的脑神经节以及通向后部的神经索中未发现明显的阳性反应存在。皮下神经丛中也未发现NOS阳性反应存在。山东省自然科学基金资助项目，课题编号Y95D0851。E根据上述结果可以看出,在扁形动物中，已经具有了NOS酶活性，但是其分布范围还很小,仅存在于咽部，而在神经系统的主要结构中未表现出NOS阳性反应，当然在扁形动物的其他组织中的散在神经元还很多,咽部也不例外，它也具有运动和感觉神经元卩］。本实验结果中咽部内外表皮层的NOS阳性反应很可能属于上皮性NOS,而位于咽部外侧表皮下的阳性反应可能应属于神经性NOS反应。有人在吸血性昆虫的唾液腺中证实有NO/NOS存在［5］，三角涡虫虽无唾液腺,但其咽部十分发达,可伸出咽鞘摄取食物,取食时咽部可分泌消化液在体外对食物进行初步消化,然后吸入消化道。三角涡虫与吸血性昆虫这种相似的取食方式以及它们的取食结构都具有NOS的分布，这其中是否有某种联系还有待深入的研究。3参考文献1陈晋文,孙长凯,黄远桂一氧化氮合酶的若干研1究进展生物化学与生物物理进展,1996;23(4):2932972王仁刚,朱兴族一氧化氮在神经系统中的121作用生理科学进展,1994;25(1):737511志,1998;14(1):353827BagunaJ,BallesterR.Thenervoussysteminplanarians:peripheralandgastrodermalplexuses,pharynxinnervationandtherelationshipbetweencentralnervoussystemstruc251©1995-2004TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.四川动物SichuanJournalofZoology199918(2)tureandtheacoelomateorganization.JMorph,1978;155:1998-06-15收稿237-252HISTOCHEMISTRYLOCALIZATIONOFNOSINDUGESIAJAPONICAWangXiaoanJiangXiaomanLiuXinhaiYantaiTeachersUniversity,Yantai264025ABSTRACTThelocalizationofnitric-oxidesynthase(NOS)inDugesiajaponicahasbeenstudiedwithNADPH-dhistochemistrymethod.TheresultindicatedthattheNOSwaslocalizedinpharynxonlyandnotfoundincentralnervoussystem.TheanthorssuggestedthattheNOSdistributedinpharynxmayberelatedwithitsingestion.KeyWordsPlatyhelminthesDugesiajaponicaNitricoxidesynthaseHistochemistry1.丽;I■?'UI'LEASjfSSSS■机盯】・血上|图版说明A咽部水平切，示咽腔内表皮NOS阳性反应（门。B咽部水平切，示咽部外表皮NOS阳性反应（门°C咽部横切，示咽肠交界处咽腔内表皮NOS阳性反应（门°D图C中部分