电针上巨虚穴对慢性应激刺激大鼠内脏高敏性大鼠和正常大鼠结肠内p物质及其血管活性肽表达的影响

电针上巨虚穴对慢性应激刺激大鼠内脏高敏性大鼠和正常大鼠结肠内p物质及其血管活性肽表达的影响

肠压综合征（ibs）是一种慢性或反复出现的腹痛，伴有腹泻、排便习惯和大便异常，以及肠结构和生化异常的综合征。针刺治疗内脏性疾患具有确切的疗效1材料和方法1.1实验动物雄性3周龄SD大鼠100只(北京维通利华实验动物技术有限公司提供),清洁级.1.2主试剂兔抗鼠SP、VIP抗体,武汉博士德生物工程有限公司提供.1.3结构的制作球囊扩张器选用安全套头端3cm,用4号手术丝线与加工后的一次性输液器采液端导管扎紧(气囊长度25mm,直径2.0mm).距球囊头端6cm处扎丝线作为插入时的深度标记.其外侧开口端接一输液用三通管(规格:CONNECTAPLUS3White瑞典BD公司),分别与10mL注射器和XJ11D台式血压计相连.2实验方法2.1动物组将100只SD大鼠随机分为五组:空白组、模型组、多次电针组、单次电针组、单次针刺组,每组20只.2.2降结肠球囊的制备选用AL-Chaer内脏敏感动物模型为基础,稍改进.使用自制的刺激球囊,蘸少许医用石蜡油,自大鼠肛门轻柔插入4~5cm,大致达到大鼠的降结肠部位.每次气囊打气,维持肠道压力60mmHg,保留lmin,然后撤气.每次刺激之前,检查球囊的密闭性;给予扩张刺激前,可预先刺激大鼠肛门部,使其排尽大便,以减少粪团对扩张程度的影响.一天内给予操作一次,总共持续刺激2周.正常对照组大鼠不作任何处理.2.3治疗方法2.3.1单次针刺组大鼠穴位采集标本单次电导率电针时取大鼠双侧“上巨虚(ST37)”,通过G6805-1A型电针治疗仪,采用疏密波,密波100Hz/3s,疏波4Hz/3s交替,刺激强度1mA,以大鼠后肢轻轻抖动但不产生嘶叫为度,持续30min.单次针刺组大鼠给予同样操作,毫针刺入穴位但不进行通电刺激.次日采集标本.2.3.2第二天发送多次电针电针方法同上,隔日给予一次,持续给予4次,治疗结束次日采集标本.2.4麻醉前准备处理标本采集前大鼠禁食不禁水12h.大鼠给予腹腔注射20%乌拉坦0.35mL/100g麻醉,动物深昏迷状态下打开腹腔,取距肛门6cm处结肠1~2cm,矢状剖开,盐水清洗,平铺于滤纸上,10%甲醛固定,冰箱4℃保存.2.5肠粉、vip免疫组染色按SABC(stretavidin-biotincomplex)法进行.2.6肠sp、vip和免疫组化染色图像分析应用BI-2000图像分析系统,进行灰度值分析.2.7统计处理数据均以平均值±标准差3结果3.1p表达增强免疫组化染色图像分析表明:与多次电针组相比,模型组大鼠SP表达有明显增强(P<0.01);单次电针组、单次针刺组大鼠SP表达明显增多(P<0.01).单次电针较单次针刺组大鼠SP表达无显著性差异(P>0.05).见表1.3.2hpv表达降低免疫组化染色图像分析表明:与多次电针组相比,模型组大鼠VIP表达明显降低(P<0.01);单次电针组、单次针刺组大鼠VIP表达明显降低(P<0.01).单次电针较单次针刺组大鼠VIP表达无显著性差异(P>0.05).4电针上巨虚穴对肠道其他肠道激素和神经递质的影响SP作为一种重要的胃肠肽广泛地分布于肠神经系统和整个胃肠道本实验中,我们还观察到多次电针能显著增加结肠中的VIP免疫反应阳性产物含量,且表现多次电针效果优于单次电针、单次针刺.VIP是ENS中具代表性和研究较深入的神经肽,也是重要的肽类神经递质之一,许多研究已证明VIP在胃肠运动调节中主要起抑制效应.故此,上述结果表明电针上巨虚穴还可能通过增加VIP对胃肠道的抑制作用,降低胃肠运动综上所述,本实验结果表明电针上巨虚穴减轻内脏痛敏的作用与