云南沃森生物技术有限公司风险评价专题

#附件二：云南沃森生物技术有限公司风险评价专题1云南沃森生物技术有限公司的生产概况1.1企业概况云南沃森生物技术公司于2001年1月成立，三年多来以疫苗制品的研究开发为自己的中心任务，取得了较好的进展，现有三个疫苗制品申报了临床研究，其中2个项目已获得临床研究批件，即：（1）b型流感嗜血杆菌结合疫苗（简称Hib结合疫苗），（2）精制甲型肝炎病毒灭活疫苗（Vero细胞），公司独立开发，自有的项目；另2个项目已申报临床研究并得到国家SFDA评审中心的受理。即（1）流行性感冒病毒裂解疫苗，是接受大连高新生物制药公司的委托，代为合作开发的项目；（2）脑膜炎球菌A+C群多糖结合疫苗。尚有脑膜炎球菌A+C+Y+W135群四价多糖疫苗将在2004年底以前申报临床研究。基于这样的基础情况，公司拟定此项目进行产业化，以推进云南省疫苗产业的发展。云南沃森生物技术公司拟在玉溪市高新技术开发区东侧建厂，占地64亩，建设云南省疫苗产业园，进行有关疫苗的生产。1・2产品方案及生产规模拟建项目的生产品种、规格和数量见表1。表1云南沃森生物技术公司疫苗生产方案序号产品名称规格生产规模剂量抗原含量单位数量1b型流感嗜血杆菌结合疫苗0.5ml/支三10ug万支5002脑膜炎球菌A+C群多糖结合疫苗0.5ml/支各三30ug万支5003脑膜炎球菌a+C+Y+WI35四价多糖疫苗0.5ml/支各三50ug万支5001・3产品质量按国家SFDA批准的生产检定规程和企业注册标准执行。1.4建设方案总占地面积：42000M2一期总建筑面积：6650M2其中：细菌疫苗车间：2600M2TT车间600M2

质量控制中心:1000M2辅助用房:2450M2辅助用房包括：实验动物房:500M2库房1000M2、质量控制中心:1000M2辅助用房:2450M2辅助用房包括：实验动物房:500M2库房1000M2、锅炉房600M2危险品库房50M2污水处理300M2配变电等约300M2注(食堂和宿舍未考虑在一期建设中)1.5技术特点及主要技术指标、疫苗是生物制品，用来预防传染性疾病发生。主要使用对象是健康儿童,以及健康成人。它比一般新药的研发和生产要求更高，必须保证其功效和质量，必须每批生产都要符合国家审批的规程要求，并要和国际上通用的质量技术标准接轨,方能得到世界卫生组织的认可。、该公司的细菌疫苗的菌种和病毒疫苗的毒种均是经国家药品生物制品检定所检定，符合要求并得到认可。、该公司研制的新的疫苗均制定了生产检定规程和企业注册标准，已报国家FSDA审批。2生产过程中的风险因素种类识别根据项目生产特点，该项目生产过程中的主要风险因素为各种生产菌种和病毒对外环境可能造成的影响，该项目主要涉及以下几种：、b型流感嗜血杆菌、脑膜炎球菌、甲型肝炎病毒3风险因素的种类、传播情况3.1b型流感嗜血杆菌嗜血性流感杆菌，革兰氏染色阴性，严重的感染通常是由这些细菌的荚膜多糖所引起。有6种荚股抗原型(a、b、c、d、e、f),几乎90%以上的严重感染者都是由b型菌（Hib）引起。这种多糖是致病的毒力因子，也具有抗原性，是制造疫苗的主要抗原成分。在没有免疫过的人群中，有15%以上儿童在其鼻咽部贮存有Hib，Hib是通过呼吸道的飞沫传播。b型流感嗜血杆菌每年至少引起300万年幼儿童遭受感染，引起严重疾患，约40〜70万人死亡。发病年龄高峰为4-〜18月龄幼儿。发达国家和发展中国家均如此。5岁以下儿童患病者也不少，而6岁以上儿童和成年人发病者较少。Hib可引起脑、心、肺、关节等系统器官的感染，主要造成的临床疾患有脑膜炎、肺炎、心包炎、骨髓炎、菌血症和脓毒性关节炎。临床记载更多的是脑膜炎和肺炎，而且常常会留下神经性后遗症。被世界卫生组织（WHO）的专家委员会将Hib引起的疾病危害认定为全世界性的严重公共卫生问题。2001年4月23日，在中国的武夷山召开了“安万特•巴士德健康论坛”上，来自卫生部预防医科院、国家药品监督管理局和国内卫生防疫和临床医学专家们提供的数据表明：b型流感嗜血杆菌在中国总的感染率每年可能为40/10万，儿童化脓性脑膜炎由b型流感嗜血杆菌引起者占51.7%,婴幼儿肺炎占34.3%，其中脑膜炎治疗后存活者中10.40%留有神经系统后遗症，主要是听力丧失或智力障碍。加之该病菌对抗生素的耐药性日益增加，使开发研制有效疫苗，进行主动免疫来预防这一疾病对儿童带来的伤害成了世界关注的问题。3.2脑膜炎球菌脑膜炎球菌属奈瑟菌属是流行性脑脊髓膜炎的主要病原菌。一百多年来，该病一直在世界各地流行或散在发生，是人类的主要急性呼吸道传染病之一。根据脑膜炎球菌英膜抗原的化学结构，已确定为A、B、C、D、H、I、K、L、X、Y、Z、29E、W135等13个血清群。其中A、B、C群占流行菌群的90%，近年来美国有Y群流行，在沙特阿拉伯，次亚撒哈拉非洲，特别是布基亚法索有W135群流行。WHO提示要世界各国关注。脑膜炎易感人群主要为儿童，以暴发型病死率最咼，可达40%〜60%。当今世界各大洲发病率在1/10万〜10/10万，总病死率在50~100。世界卫生组织报告，全世界每年有500，000人发病，50000人死亡。我国曾出现过五次全国性大流行，在1938、1959、1967及1977年，约每8~10年出现一次流行高峰。2001年冬至2002年春，我国大陆多处有脑膜炎的流行。1990~2000年的统计我国的发病率在1/10万以下，病死率5%〜7.7%。脑膜炎球菌的致病毒力因子有脂多糖（LPS）、英膜多糖（CPS）、菌毛（Pill）、外胰蛋白（OMP）、调节性铁蛋白（RIP）等。其中荚股多糖是多年来用于疫苗研制的主要抗原物质。3・3甲型肝炎病毒甲型肝炎是由甲型肝炎病毒（HAV）引起的一种急性肝的自限性疾病。甲型肝炎病毒是通过人——人传播，主要是粪口途径。甲型肝炎的发病率与社会经济发展的程度密切相关。甲型肝炎在全世界传播，多数感染者可不出现病症，但每年发生的甲肝病例约150万人。患病者的典型症状包括发热、不适、厌食、恶习、呕吐，随之出现黑色尿和黄胆。疾病的严重程度和死亡率随年龄而增长。甲型肝炎的并发症包括复发性肝炎、胆囊受阻性肝炎和暴发性肝炎等。暴发性肝炎的发生率约为临床发病者的0.01%，它的特点是肝功能快速恶化，极易死亡。甲型肝炎不存在慢性感染，也没有特效的抗病毒治疗药可用。血清流行病学分析可作为病毒在社会上传播的标志，世界不同地区，有抗HAV抗体的人数比例不同。北欧最低，约占5%,澳大利亚、日本和美国的成人中有抗HAV抗体者占40〜70%。而发展中国家更高。中国属于病毒性肝炎高发地区，在急性肝炎病例中甲肝居首位，约占45%。据全国卫生统计年报资料，1997年甲肝总发病率为18.8/10万，病死率为0.075%；1998年发病率16/10万，病死率为0.067%。4建设项目的防治措施评述4・1建设的生物安全性评估4・1・1生物安全的分级标准根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级。（1）危害等级I（低个体危害，低群体危害）不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。（2）危害等级II（中等个体危害，有限群体危害）能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。（3）危害等级III（高个体危害，低群体危害）能引起人类或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能使用抗生素、抗寄生虫药治疗的病原体。危害等级W(高个体危害，高群体危害)能引起人类或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接或间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物间传播的病原体。4.1.2建设项目的生物安全水平根据建设项目的生产特点，由于项目主要的生产各种疫苗，在培养种的病毒、菌种时，虽然能引起人或动物发病，但有具备有效治疗和预防措施，因此可评定为危害等级II。4・2实验室的生物安全评价4・1・1评价标准每类生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度各分为四级。各级实验室的生物安全防护要求依次为：一级最低，四级最高。一般生物安全防护实验室实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。二级生物安全防护实验室实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。三级生物安全防护实验室实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗。艾滋病病毒的研究(血清学实验除外)应在三级生物安全防护实验室中进行。四级生物安全防护实验室实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度的危险性,通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。与上述情况类似的不明微生物，也必须在四级生物安全防护实验室中进行。待有充分数据后再决定此种微生物或毒素应在四级还是在较低级别的实验室中处理。4.2.2建设项目的要求等级根据项目的生产过程中所涉及在培养种的病毒、菌种的种类、传播方式，确定的项目涉及的实验室为二级生物安全防护实验室以上。4・3建设项目的生物安全措施评价4・3・1项目拟采用的生物安全措施项目拟投资1261万元，按国家有关技术要求标准建设菌苗车间及生物实验室。应用生物反应器代替了常规的大罐细菌培养，应用新的杀菌剂代替了常规疫苗生产使用的福尔马林来灭活细菌，在多糖提取，活化及与蛋白载体结合工艺方面都有自己的实验成果包含在内。车间的菌苗生产工艺采用Hib活菌体进行生产，为防止灭活前的菌体可能对环境造成的危害，对这部分均采用密闭设备及管道进行生产，同时对使用过的设备、容器、管道进行高温灭活，发酵罐废气经过滤后排放，以防活菌体散发。疫苗制品的废渣处理：生产过程丢弃的破碎玻璃器材；一次性口罩、鞋帽工作服、纸张；废弃离心沉渣、酶标板、过滤膜、反应柱、层析柱、包装纸箱；实验用的处死小动物、动物饲料、动物粪便等。处理原则：废渣的产量不是很多，每天清除后用清洁的纸袋或布袋包装，送废品库保管，集中一定量后送到当地的废物处理中心焚烧处理。废气处理方面：菌苗生产车间生产过程中发酵废气及二次蒸汽用除菌过滤器过滤后排放；各个净化系统均设置气体消毒排风系统。各系统消毒时，关闭该系统的新、排风电动阀及排风机，在空调器送风或房间内放入消毒气体发生器，进行消毒。消毒完毕后，开启相应系统新风电动阀、消毒排风机及其排风电动阀，排除室内残存的消毒剂。废水处理：凡有病毒或细菌污染的废培养液，必须先经蒸汽高压(121°Cl小时)消毒后再排放；凡有病毒或细菌污染的容器和实验用品必须先经蒸汽高压(121Cl小时)消毒后再进行洗涤，排放洗涤用水。全厂建立污水处理站，并采用“生物接触氧化十消毒”处理达标后排放。4.3.2建设项目的防护措施的风险性评价按GB19489—2004《实验室生物安全通用要求》及中华人民共和国卫生行业标准(WS233-2002)《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》的有关要求，建设规范的生物实验室及菌苗车间后，其生物安全防护措施安全、可行的。其风险性影响可得到较好的控制。目前对菌种的多采用高温灭活方式，可行性研究中方案是对用蒸汽高压（121°C1小时）进行处理，其消毒时间已能达到有关要求，其方法是可行的，能有效地避免风险性的影响发生。（3）项目对废气、废水进行消毒处理的工艺是必要的。只有对废气进行消毒处理后，可防止病毒、菌种通过空气向厂址周围扩散；通过对废水的消毒处理，彻底消除病毒、菌种通过水体向厂外扩散。（4）可行性研究报告中拟将“生产过程细胞碎片经严格灭活处理，用于无公害可降解的生物废料，浅埋土层中进行自然降解。”为了彻底消除病毒、菌种通过固体废物向厂外扩散，建议将生产过程中产生的固体废作为医疗废物送焚烧厂直接焚烧。项目生产的疫苗制品的废渣处理也同时作为医疗废物送焚烧厂直接焚烧。总之，由于项目生产中产品是用于人体直接注射的疫苗，每批产品都要进行严格的检验，并且全厂要按GMP要求进行有关技术认证，因此，该项目生产的风险影响可完全可得到控制的。4.3.3该公司现有的生产可靠性分析该公司研发的b型流感嗜血杆菌结合疫苗已经完成连续3批的中试生产，除自检合格外，均已报送国家药品生物制品检定所检定合格。并于2003年12月份报国家SFDA审批，于今年10月份获得了临床研究批件，2004年1月25日正式启动临床研究，预计2005年底获得新药证书。研发的脑膜炎A+C群多糖结合疫苗已经完成了三批中试生产，已通过国家药品生物制品的检定，于今年十月申报了林穿研究，并得到了国家SFDA受理。研发的精制甲型肝炎病毒灭活疫苗已完成连续三批中试生产，报国家药检所检定合格，同时于2003年11月报国家FSDA审批，现已获得临床研究批件。这些研发进展情况，证明所建立的中试生产工艺安全可靠，所制备的产品其产量和质量都能符合要求。同时证明首批进行产业化的疫苗制品可以完成每种制品每年生产100万支以上疫苗的能力。在完成生产车间建设，新的设备运转及工作人员技术培训后，可以达到每种疫苗制品年产500万支以上的生产能力。5避免风险发生的措施及要求5.1防护措施为了防止生产实验及生产过程中风险因素有发生，项目必须按GMP的有关要求进行建设及生产，一定要遵守GB19489—2004《实验室生物安全通用要求》中华人民共和国卫生行业标准（WS233-2002）《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》及WHO《实验室生物安全手册》［（修订版）2003］的有关要求，其中部份要求见下：5・1・1实验室及生产车间的技术要求5.1.1.1布局（1）生产区和实验区应在建筑物中自成隔离区（有出入控制）或为独立建筑物。必要时，与其它之间应设缓冲区。（2）污染区与半污染区之间、半污染区和清洁区之间应设置传递窗，传递窗双门不能同时处于开启状态，传递窗内应设物理消毒装置。5.1.1.2围护结构（1）实验室围护结构内表面应光滑、耐腐蚀、防水，以易于消毒清洁；所有缝隙应可靠密封，防震、防火。（2）围护结构外围墙体应有适当的抗震和防火能力。（3）天花板、地板、墙间的交角均为圆弧形且可靠密封。（4）地面应防渗漏、无接缝、光洁、防滑。（6）实验室内所有的门应可自动关闭；实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。（7）外围结构不应有窗户；内设窗户应防破碎、防漏气及安全。（8）所有出入口处应采用防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。5.1.1.3送排风系统（1）应安装独立的送排风系统以控制实验室气流方向和压力梯度。应确保在使用实验室时气流由清洁区流出，同时确保实验室空气只能通过高效过滤后经专用排风管道排出。（2）送风口和排风口的布置应该是对面分布，上送下排，应使气流死角和涡流降至最小程度。（4）送排风系统应为直排式，不得采用回风系统。（5）由生物安全柜排出的经内部高效过滤的空气可通过系统的排风管直接排出。应确保生物安全柜与排风系统的压力平衡。（6）实验室的送风应经初、中、高三级过滤，保证污染区的静态洁净度达到7级到8级。（7）实验室的排风应经高效过滤后向空中排放。外部排风口应远离送风口并设置在主导风的下风向，应至少高出所在建筑2m,应有防雨、防鼠、防虫设计，但不应影响气体直接向上空排放。（8）高效空气过滤器应安装在送风管道的末端和排风管道的前端。（9）通风系统、高效空气过滤器的安装应牢固，符合气密性要求。高效过滤器在更换前应消毒，或采用可在气密袋中进行更换的过滤器，更换后应立即进行消毒或焚烧。每台高效过滤器安装、更换、维护后都应按照经确认的方法进行检测，运行后每年至少进行一次检测以确保其性能。（10）在送风和排风总管处应安装气密型密闭阀，必要时可完全关闭以进行室内化学熏蒸消毒。（11）应安装风机和生物安全柜启动自动联锁装置，确保实验室内不出现正压和确保生物安全柜内气流不倒流。排风机一备一用。5.1.1.4特殊设备装置除设有一般实验室的要求外，应有符合安全和工作要求的II级或III级生物安全柜进进行相关有技术实验，有关特殊设备的设置要求具有以下条件：（1）其安装位置应离开污染区入口和频繁走动区域。（2）低温高速离心机或其他可能产生气溶胶的设备应置于负压罩或其他排风装置（通风橱、排气罩等）之中，应将其可能产生的气溶胶经高效过滤后排出。（3）污染区内应设置不排蒸汽的高压蒸汽灭菌器或其他消毒装置。（4）应在实验室入口处的显著位置设置带报警功能的室内压力显示装置，显示污染区、半污染区的负压状况。还应设置高效过滤器气流阻力的显示。（5）应有备用电源以确保实验室工作期间有不间断的电力供应。（6）应在污染区和半污染区出口处设洗手装置。洗手装置的供水应为非手动开关。供水管应安装防回流装置。不得在实验室内安设地漏。下水道应与建筑物的下水管线完全隔离，且有明显标识。下水应直接通往独立的液体消毒系统集中收集，经有效消毒后处置。5・2避免风险的安全防拟措施5.2.1化学品安全管理在实验室中，对化学品的存放、处理、使用及处置的规定和程序均应符合良好化学实验室行为标准；应按照相关标准在每个储存容器上标明每个产品的危害性质和风险性，还应在“使用中”材料的容器上清楚标明；对化学、物理及火灾危害应有足够可行的控制措施；应定期对这些措施进行监督以确保其有效可用。应保存监督结果记录；应要求所有人员按安全操作规程工作，包括使用被认为适用于所从事工作的安全装备或装置；对实验室内所用的每种化学制品的废弃和安全处置应有明确的书面程序；其应包括对相关法规的充分及详细说明，以保证完全符合其要求，使这些物质安全及合法地脱离实验室控制。5.2.2样本的运送管理实验室负责人应负责为所有向实验室提交样本的地点准备适当的指南和指示；所有样本应以防止污染工作人员、患者或环境的方式运送到实验室；样本应置于被承认的、本质安全、防漏的容器中运输；样本在机构所属建筑物内运送应遵守该机构的安全运输规定；样本运送到机构外部应遵守现行的有关运输可传染性和其它生物源性材料的法规；样本、培养物和其他生物材料在实验室间或其他机构间的运送方式应符合相应的安全规定；