马立克氏病病毒在体内的复制情况

马立克氏病病毒在体内的复制情况

马齐克病（md）是由马齐克病病毒（mdv）引起的一种淋巴氏病。该病每年给全世界养禽业造成的损失多达十几亿美元,特别是在当今的规模化养殖场中,损失更加严重。虽然现已有可用的疫苗来控制马立克氏病的暴发,但疫苗的使用也带来了极其危险的后果。自从MD疫苗出现之后,MDV在免疫选择压的作用下不断进化,产生了许多特超强毒株(如:RK-1、648A等)。在这些特超强毒株面前,即使免疫了最好的疫苗也不能避免MD的发生1细胞增殖机理在当今商业养殖环境中,自然感染是MDV的最主要的感染方式。在自然感染的情况下,MDV首先在肺脏的易感细胞(如巨噬细胞等)上定植,经历短暂的初始复制后随着易感细胞进入其它器官或组织进行增殖。大致的感染路径及致病机理见图1。虽然MDV在宿主体内的感染路径及致病机理已经大致清晰,但由于技术等多方面的限制,对其在宿主体内具体的复制动力学研究尚不够深入,相关的研究也相对滞后。1.1mdv初始复制增殖的检测肺脏是鸡在自然感染MDV中第一个被感染的器官。肺脏拥有大量的上皮细胞和巨噬细胞,MDV经呼吸道进入肺脏后,MDV首先在这些巨噬细胞、上皮细胞中进行初始的复制与增殖,随后跟随巨噬细胞进入其他组织和器官。经呼吸道感染的鸡,约12h左右即可以在肺脏中检测到MDV初始的复制与增殖。经历了初始的复制与增殖后,MDV在肺脏中进行溶细胞感染与复制,病毒载量及病毒基因的转录量得到了大量提升。在感染后(DPI)21d左右,肺脏的病毒载量达到高峰。肺脏感染MDV后,虽然能产生良好的免疫应答(多种抗感染因子的转录活性也得到明显提升),但这些免疫应答似乎没有能阻止MDV的进一步复制与增殖1.2mdv的复制特性淋巴细胞是非常重要的免疫细胞,具有免疫防御、免疫监视等多方面生物学功能,一旦其受到损害,宿主将面临非常严重的后果。MDV是嗜淋巴细胞性病毒,其对淋巴细胞具有很强的组织嗜性。如果宿主的淋巴细胞感染了MDV,淋巴细胞原来的生物学功能将发生重大改变(如:免疫功能受到损害、丧失,细胞发生肿瘤性转化等),宿主的免疫力下降,容易受到其他病原微生物的并发侵害。可以说,MDV在淋巴细胞的复制情况直接决定了宿主的命运。研究表明:MDV在感染鸡24~36h后,MDV随巨噬细胞等经血液进入外周淋巴器官,并感染其中的B淋巴细胞。在3~6DPI期间,MDV主要在B淋巴细胞以及部分T淋巴细胞中发生溶细胞感染,之后感染主要发生在T淋巴细胞。总体来看:外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)中的MDV载量在1~15DPI呈上升趋势,并于15DPI达到平台期1.3mdv在脏器组织中的增殖动态脾脏在家禽免疫系统中具有非常重要的地位,它不仅可以激活单核细胞、多核白细胞、巨噬细胞等免疫细胞,提高它们的免疫保护功能,引发强烈的细胞免疫保护反应,还可以产生多种免疫因子来辅助和清除体内的病毒。脾脏是家禽细胞免疫、体液免疫的中心器官,已知脾脏的感染状态与马立克氏病的发病情况存在着密切的关系疫苗株CVI988感染脾脏后,其在脾脏中的复制会停留在潜伏期感染状态,潜伏期的保持也许是疫苗株CVI988免疫效果产生的一个重要因素;而MDV野毒株则不同,它在感染脾脏后的3~7d内发生第一次溶细胞感染(MDV载量快速上升、gB等基因也得到大量的表达),并在此期间达到病毒载量的高峰。经历了第一次溶细胞感染后,MDV进入感染的潜伏期,病毒载量下降至较低水平。不同毒力的MDV与不同品种的鸡组合,潜伏期出现和维持的时间会稍有不同随着感染时间的推移,MDV野毒株会从潜伏期再次激活,进而转入感染的第二次溶细胞期或者直接进入肿瘤转化期(这取决于宿主与病毒的相互作用),MDV在脾脏中的病毒载量重新上升至较高水平。此时,感染MDV的鸡开始表现出马立克氏病的临床症状。目前有关MDV在胸腺及法氏囊的复制动力学的报道较少,据Baigent等1.4mdv在羽囊的复制动力学羽囊是鸡体内唯一一个能产生完整MDV的场所,也是MDV在自然情况下水平传播的唯一途径,所以MDV在羽囊中的复制动力学直接影响到对MD防控措施的制定和实施。研究表明:最早可以在4DPI的羽囊中检测到MDV综上所述,可以看出MDV在不同的组织会有不同的复制变化情况。这可能与宿主的组织免疫特性、MDV的生物特性等多方面因素有关。2hvt疫苗的复制效果MDV野毒株在侵入了疫苗免疫的鸡后,MDV野毒株与疫苗毒株处于一种混合感染的状态,疫苗并不能阻止野毒的入侵和感染。在一定程度上,疫苗的复制情况越好,其对宿主保护的效果也就越好现已证明HVT疫苗能抑制血清Ⅰ型MDV在鸡体内的复制另一常用的马立克氏病疫苗是CVI988/Rispens毒株。由于CVI988毒株属于血清Ⅰ型MDV,在进行定量研究的时候难以区分疫苗毒株和野毒株,所以有关疫苗对MDV复制动力学影响的研究大部分集中在HVT疫苗株上。直到最近,Baigent等3对mdv的遗传抗性研究由于没有有效的药物来控制马立克氏病,所以目前普遍使用疫苗免疫的措施来控制马立克氏病。但这样通常会导致MDV野毒在免疫选择压的作用下,毒力不断提升。目前已经出现了不少超强毒株(如:RK-1、648A等),人们开始担心有一天MDV的毒力会上升至疫苗不能控制的水平。在这一担心的驱动下,研究人员已经选育出了一些针对MD的遗传抗性鸡(如:美国N系鸡等)。鸡的MD抗性机制比较复制,涉及较多的基因,研究也较困难和费时。目前本研究所的研究人员已经对MD抗性的遗传因素进行了相关研究Abdul-Careem等4经过mav基因修饰后的复制动力学研究4.1病毒编码编码虽然对MDV复制动力学的研究取得了一些进展,但研究大都集中在完整的病毒粒子研究上,在MDV基因层面上对MDV复制动力学的研究尚少。随着反向遗传技术的不断发展,在MDV基因层面的复制动力学研究也得到了飞速发展。现已鉴定出了不少MDV在复制、感染和水平传播中必不可少的基因。UL49.5基因编码的蛋白能直接引起细胞MHC-1的表达下调,从而有利于MDV的免疫逃避。研究表明,MDV缺失了UL49.5蛋白胞质尾区的序列后,对其在体内的复制没有明显的影响另外,Jarosinski等MDV感染细胞后,MDV的基因组首先在细胞核中进行复制。随后组装前核衣壳,借助前核衣壳通过细胞核内外膜到达细胞质。在细胞质中,通过蛋白酶的作用脱去前核衣壳进行第二次核衣壳的组装,最后在细胞质中组装成感染性病毒颗粒。研究表明,MDVUS3基因编码的蛋白激酶在这一过程中起着非常重要的作用。通过电子显微镜的观察可以发现缺失US3基因的MDV大部分聚积在细胞核内外膜中的核周隙无法进入细胞质,这就阻碍了MDV在细胞质中的第二次组装和复制,最终导致MDV的复制、增殖、感染等受到了严重损害此外,能影响MDV复制动力学基因的还有MDV的vIL-8基因4.2病毒序列插入对mdv的复制特性的影响由于饲养管理不善,经常会出现多种病毒与MDV混合感染的情况,其中对MDV复制影响较深远的有网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)等与MDV的混合感染。REV和ALV属于逆转录病毒,它们的一些DNA片段可以插入到MDV的基因组中,造成MDV基因组的遗传性变异。周祥等据Sun等5mdv与病毒复制动力学比较影响病毒毒力的因素有很多,其中两个非常重要的因素是病毒的复制率和侵袭力(病毒的侵袭力主要表现在病毒的侵入和扩散上)。就MDV来说,这两者是紧密联系在一起的。Yunis等6mdv复制动力学研究从1907年JozefMarek首次报道MD到现在,已有百年的历史。在此期间,人们试图通过MDV的复制动力学来研究其