维生素C的提取及含量测定

一、试验目标学习维生素C主要性质掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C原理和方法维生素C的提取及含量测定第1页二、试验原理维生素C结构与性质维生素定量测定维生素C的提取及含量测定第2页结构与性质维生素C/L-抗坏血酸(ascorbicacid)多羟基，内酯；酸性；易被氧化：中、碱性，热，光，重金属破坏

维生素C的提取及含量测定第3页L-抗坏血酸脱氢抗坏血酸*若脱氢维生素C深入氧化，则失去活性维生素C的提取及含量测定第4页

维生素C功效维生素C是主要供氢体促进胶原合成—坏血病

维生素C的提取及含量测定第5页起源

新鲜水果及蔬菜:橙类、番茄、辣椒维生素C的提取及含量测定第6页富含维生素C量高食物（毫克/100克食物)

酸枣——830-1170

猕猴桃——568

枣——549

辣椒——185

山楂——89

柿子椒——89

菜花——88

金花菜——85

苦瓜——84

雪里红——83

豌豆苗——53

油菜——51

橙——49

柚——41

柠檬——40

柑橘——34

水萝卜——34

大白菜——19

西红柿——12芥菜头——80

青蒜——77

维生素C的提取及含量测定第7页

2,6-二氯酚靛酚

——氧化还原指示剂维生素C的提取及含量测定第8页三、试验内容样品处理：2.0g猕猴桃5～10ml2%草酸研磨成浆状50ml容量瓶定容过滤维生素C的提取及含量测定第9页标准液滴定：5ml1％草酸+5ml0.001mol／L维生素C(176.13)2,6-D滴定到浅红色，30s；3次（10x2,6-D)计算1ml2,6-D相当于维生素Cmg数——TC：抗坏血酸浓度（mg/ml）V1：抗坏血酸量（ml）V2：消耗染料溶液量（ml）维生素C的提取及含量测定第10页样品滴定：50ml锥形瓶：滤液5ml（移液管）2,6-D滴定到浅红色，30s；3次空白滴定：50ml锥形瓶：5mll％草酸2,6-D滴定到浅红色，30s；3次维生素C的提取及含量测定第11页计算结果100g样品含维生素Cmg数=Bx(A-E)xTx100/CxDA——滴定样品所消耗2,6-二氯酚靛酚钠平均毫升数；E——滴定空白所消耗2,6-二氯酚靛酚钠平均毫升数；B——样品提取液总体积（50ml）；C——每次滴定所用提取液毫升数（5ml）；D——提取所用样品重量（2g）；T——1ml2,6-D相当于维生素Cmg数。

维生素C的提取及含量测定第12页四、操作关键点定容维生素C的提取及含量测定第13页过滤维生素C的提取及含量测定第14页移液管使用维生素C的提取及含量测定第15页滴定管使用维生素C的提取及含量测定第16页滴定维生素C的提取及含量测定第17页思索题为何维生素C标准溶液要用新鲜配制？为准确测得维生素C含量，试验时要注意那些操作步骤？维生素C的提取及含量测定第18页多酚氧化酶制备和性质研究维生素C的提取及含量测定第19页一、试验目标了解植物组织褐变和多酚氧化酶关系。学习多酚氧化酶提取和活力测定方法了解影响酶促反应速度各种原因维生素C的提取及含量测定第20页二、试验原理酶分离纯化：材料选择（新鲜、目标蛋白含量高）分离过程中防止一切可能引发变性条件蛋白质纯化普通在低温下进行（4oC）细胞破碎：机械破碎分离目标蛋白：盐析法维生素C的提取及含量测定第21页维生素C的提取及含量测定第22页多酚氧化酶催化反应邻苯二酚邻苯醌维生素C的提取及含量测定第23页三、试验内容多酚氧化酶制备：50g小块土豆+50ml氟化钠（600g/班）捣碎机中研磨30s3-5层纱布过滤（40-45ml滤液/组）等体积饱和硫酸铵，4℃，30min离心4℃，4000r/min，20min沉淀+15ml柠檬酸缓冲液离心4℃，4000r/min，15min上清→多酚氧化酶粗制品

维生素C的提取及含量测定第24页多酚氧化酶性质多酚氧化酶作用：催化反应多酚氧化酶化学性质：稳定性底物专一性（邻苯二酚，对苯二酚，间苯二酚）底物浓度酶浓度氢离子浓度（移液管）维生素C的提取及含量测定第25页四、操作关键点公用试剂使用、玻璃器皿清洁、定量、定时维生素C的提取及含量测定第26页离心机及其使用

离心机是利用离心力对混合液（含有固形物）进行分离和沉淀一个专用仪器。

普通（非冷冻）离心机：转速小于4000rpm(RotatePerMinute)，台式高速离心机最大转速可18000rpm。低速冷冻离心机：转速普通不超出4000rpm高速冷冻离心机：转速可达0rpm，搜集微生物、细胞碎片、细胞、大细胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等。超速离心机：转速可达50000rpm，能使亚细胞器分级分离，并用于蛋白质、核酸分子量测定等。维生素C的提取及含量测定第27页维生素C的提取及含量测定第28页转头50TiRotorJA20.1Rotor

JA-18RotorJA17Rotor维生素C的提取及含量测定第29页维生素C的提取及含量测定第30页离心管维生素C的提取及含量测定第31页开启离心机控制电闸维生素C的提取及含量测定第32页打开离心机电源开关维生素C的提取及含量测定第33页选择转头维生素C的提取及含量测定第34页将转头放入离心机内预冷维生素C的提取及含量测定第35页平衡离心管维生素C的提取及含量测定第36页离心管放入转头、拧紧转头盖维生素C的提取及含量测定