芳香胺类药物的分析

芳香胺类药物的分析芳香胺类药物的分析第1页第一节芳胺类药品分析对氨基苯甲酸酯类药品基础结构酰胺类药品基础结构芳香胺类药物的分析第2页基础结构与化学性质对氨基苯甲酸酯类药品芳伯氨基——有重氮化-偶合反应酯键——易水解侧链烃胺——具碱性

第一节芳胺类药品芳香胺类药物的分析第3页代表性药品盐酸普鲁卡因Procainehydrochloride苯佐卡因benzocaine盐酸丁卡因Tetracainehydrochloride芳香胺类药物的分析第4页盐酸普鲁卡因胺芳香胺类药物的分析第5页酰胺类药品酰胺基——水解后芳伯氨基特征酚羟基——与FeCl3显色侧链烃胺——具弱碱性，可与生物碱沉淀剂与重金属离子反应，形成有色配位化合物水解产物反应

芳香胺类药物的分析第6页代表性药品对乙酰氨基酚paraceteamol盐酸利多卡因Lidocainehydrochloride醋氨苯砜acedapsone盐酸布比卡因bupivacainehydrochloride芳香胺类药物的分析第7页盐酸普鲁卡因苯佐卡因重氮化-偶合反应直接反应判别试验芳香胺类药物的分析第8页橙黄色-猩红色

-萘酚重氮盐芳香胺类药物的分析第9页对乙酰氨基酚（稀HCl水解）须先水解，然后再进行重氮化偶合反应醋氨苯砜（硫酸水解）芳香胺类药物的分析第10页乳白色盐酸丁卡因N-亚硝基化合物无重氮化反应芳香胺类药物的分析第11页盐酸利多卡因，盐酸布比卡因在酰氨基邻位有两个甲基，因空间位阻影响，较难水解，故重氮化-偶合反应较难。芳香胺类药物的分析第12页

直接：盐酸普鲁卡因、对氨基水杨酸钠、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺芳香胺类药物的分析第13页盐酸普鲁卡因ChP（）[判别]（1）本品显芳香第一胺类判别反应（附录Ⅲ）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴，视供试品不一样，生成由橙黄到猩红色沉淀。

芳香胺类药物的分析第14页

间接：对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、贝诺酯

芳香胺类药物的分析第15页对乙酰氨基酚ChP（）[判别]（2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性β-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。芳香胺类药物的分析第16页芳香胺类药物的分析第17页FeCl3反应对乙酰氨基酚结构中含有酚羟基，可与FeCl3反应，显蓝紫色。芳香胺类药物的分析第18页与Cu2+，Co2+，Hg2+反应盐酸利多卡因在碳酸钠溶液中与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物，转溶入氯仿，显黄色。盐酸利多卡因在酸性溶液中与氯化钴反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。盐酸利多卡因在硝酸性溶液中与硝酸汞反应，显黄色。与重金属离子反应芳香胺类药物的分析第19页2芳香胺类药物的分析第20页在一样条件下，盐酸普鲁卡因、丁卡因、苯佐卡因等不显Cu2+反应。对氨基苯甲酸酯类药品在一样条件下与Hg2+反应显红色或橙黄色（盐酸利多卡因显黄色）。与其它相关药品区分芳香胺类药物的分析第21页羟肟酸铁盐酸普鲁卡因胺具芳酰胺结构，可被H2O2氧化，生成羟肟酸，再与FeCl3反应生成羟肟酸铁而显紫红色→暗棕色至棕黑色。羟肟酸铁盐反应++3+3HCl

芳香胺类药物的分析第22页含有酯键结构药品易在碱性溶液中水解，可利用其水解产物进行判别。水解产物反应黄色苯佐卡因芳香胺类药物的分析第23页盐酸普鲁卡因白色二乙氨基乙醇白色沉淀溶解石蕊试纸石蕊试纸PABA芳香胺类药物的分析第24页(1).盐酸普鲁卡因ChP（）[判别]（2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生蒸气，能使湿润红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。

芳香胺类药物的分析第25页芳香胺类药物的分析第26页(2).苯佐卡因ChP（）[判别]（2）取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5m1，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿臭气。芳香胺类药物的分析第27页5.其它判别试验方法实例内容与现象测定衍生物mp三硝基苯酚衍生物；硫氰酸盐衍生物盐酸利多卡因228-232

C，盐酸布比卡因194

C；盐酸丁卡因131

C。紫外吸收特征对乙酰氨基酚；苯佐卡因；盐酸丁卡因;盐酸普鲁卡因胺;醋氨苯砜碱性溶液，

257，E=715；氯仿，278，与对照品一致；磷酸缓冲液,310,与对照品一致水,max=280nm;无水乙醇,max=256,284nm红外吸收特征盐酸普鲁卡因;盐酸普鲁卡因胺

C=O1692,C-O1200,N+-H2585;

N+-H2645,N-H1550,C-N1280,

酰胺I带,酰胺II带二者区分芳香胺类药物的分析第28页

盐酸利多卡因ChP（）[判别]取本品0.2g，加水20ml溶解。（1）取溶液10ml，加三硝基苯酚试液10ml，即生成沉淀；滤过，沉淀用水洗涤后，干燥，依法测定（附录ⅥC），熔点为228～232℃，熔融时同时分解。盐酸布比卡因ChP（）制备衍生物测熔点芳香胺类药物的分析第29页

盐酸丁卡因ChP（）[判别]（1）取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水洗涤，在80℃干燥，依法测定（附录ⅥC），熔点约为131℃。制备衍生物测熔点芳香胺类药物的分析第30页

盐酸布比卡因ChP（）[判别]（2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg溶液，照分光光度法（附录ⅣA）测定，在263nm与271nm波优点有最大吸收；其吸收度分别为0.53～0.58与0.43～0.48。UV

芳香胺类药物的分析第31页

盐酸布比卡因ChP（）[判别]（3）本品红外光吸收图谱与对照图谱（光谱集324图）一致。IR

芳香胺类药物的分析第32页

特殊杂质对乙酰氨基酚中杂质检验相关物质本品以对硝基氯苯为原料，可能引入对氯苯乙酰胺等中间体、副产物、分解物，药典采取TLC法检验，以对氯苯乙酰胺为对照。芳香胺类药物的分析第33页

方法

样品处理：1g细粉，加5ml乙醚提取，取上清液200l点样对照品浓度：50g/ml，取40l点样固定相：硅胶GF254薄板展开剂：氯仿-丙酮-甲苯（13：5：2）检测方法：紫外光254nm下观察荧光要求：供试品中杂斑点不得较对照主斑点深、大。限量？限量=1/51062005040×100%=0.5%L=（V

C）/W

100%芳香胺类药物的分析第34页

该杂质为制备过程中乙酰化不完全或贮存不妥发生水解所致。药典采取比色法测定，在碱性条件下，对氨基酚与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，而对乙酰氨基酚无此反应。对氨基酚检验芳香胺类药物的分析第35页方法样品液：本品1.0g，加甲醇溶液20mL，溶解。对照液：对乙酰氨基酚对照品1.0g+对氨基酚

50ug，加甲醇溶液20mL，溶解。显色：取样品液和对照液，分别加碱性亚硝基铁氰化钠试液，摇匀，30分钟后比色。要求：样品液所显颜色不得较对照液深。限量限量=0.005%芳香胺类药物的分析第36页检验方法

对照法

取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50

g用同一方法制成对照液比较，不得更深（0.005％）。

芳香胺类药物的分析第37页在注射剂制备和贮存过程中受到pH、温度、光线、时间、金属离子等原因影响，发生水解、脱羧、氧化反应，使注射剂颜色变黄、疗效下降、毒性增加。盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸检验芳香胺类药物的分析第38页

中国药典采取TLC法控制该杂质

方法供试品溶液：2.5mg/ml,对照品溶液：30g/ml对氨基苯甲酸溶液薄层板：硅胶H展开剂：苯-丙醋酸-丙酮-甲醇（14:1:1:4）点样：各取10

l显色:对二甲氨基苯甲醛溶液喷雾要求:样品所显杂斑点不得较对照品主斑点更深限量:30/(2.5mg×1000)×100%=1.2%检测限:0.01g芳香胺类药物的分析第39页芳香胺类药物的分析第40页

NaNO2+HCl→HNO2+NaClHNO2+HCl→NOCl+H2OAr-NH2+NOClAr-NH-OH（慢）

Ar-N=N-OH（快）

Ar-N2Cl（快）含量测定亚硝酸钠滴定法原理：Ar-NH2+NaNO2+2HCl→Ar-N2Cl芳香胺类药物的分析第41页

具游离芳伯氨基药品可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基药品，如具酰胺基药品（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测定。

芳香胺类药物的分析第42页芳香胺类药物的分析第43页加入适量KBr——以加速反应KBr+HCl→HBr+KClHNO2+HBr→NOBr+H2O（1）HNO2+HCl→NOCl+H2O（2）测定主要条件因（1）式平衡常数比（2）式约大300倍，生成NOBr量多，使溶液中NO+浓度大大增加，从而加速反应进行。芳香胺类药物的分析第44页酸种类及其浓度在不一样酸中重氮化反应速度为：HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3芳香胺类药物的分析第45页加过量盐酸胺类药品在盐酸中溶解度大，反应速度也快，其实际用量较理论量多，普通胺：酸百分比以1：2.5～6为宜。这是因为过量酸有利于：①重氮化反应加紧；②重氮盐在酸中稳定；③可预防生成偶氮氨基化合物。芳香胺类药物的分析第46页滴定温度

将滴定管尖端插入液面下，一次将大个别滴定液在搅拌下加入，然后将滴定管尖端提出液面，缓缓滴定至终点。温高反应快，但重氮盐易分解；温低反应慢，故室温10～30

C为宜。滴定方法与滴定速度芳香胺类药物的分析第47页指示终点方法阳极阴极永停滴定法ChP（）、BP（）电极：两个相同铂电极（需活化，用加有1-2滴FeCl3试液硝酸温热浸泡）终点时：电位法USP（24）芳香胺类药物的分析第48页

原理：

NaNO2+KI+HCl→NO+I2I2+淀粉→蓝色影响原因：溶液体积屡次外试，供试品损失指示剂需新配外指示剂法——碘化钾-淀粉糊剂芳香胺类药物的分析第49页内指示剂法

常见有：中性红橙黄IV

–亚甲蓝等芳香胺类药物的分析第50页

盐酸普鲁卡因ChP（）

取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法（附录ⅦA），在15～25℃，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.28mgC13H20N2O2·HCl芳香胺类药物的分析第51页非水滴定法盐酸丁卡因、盐酸利多卡因、苯乙胺类药品含有烃胺，可用非水滴定法测定含量。溶剂：冰醋酸指示剂：结晶紫滴定剂：高氯酸（0.1mol/L)

注意盐酸丁卡因、盐酸利多卡因含有盐酸，滴定前需加醋酸汞处理，以消除盐酸干扰。芳香胺类药物的分析第52页比色法利用本类药品结构中酚羟基或芳伯氨基含有三氯化铁反应或重氮化偶合反应，采取比色法测定含量。芳香胺类药物的分析第53页紫外分光光度法对乙酰氨基酚含量测定（ChP法）：本品约40mg，加0.4%NaOH溶液至250ml，摇匀，取5ml稀释至100ml，于257nm处，以溶剂为空白，测定供试液吸收度，按吸收系数E1%1cm=715计算。

A=E1%1cm·C·L，

C%=A/（715·L），L=1（C%×F×1000）/40=样品%

（F为稀释倍数=250×100/5=5000）芳香胺类药物的分析第54页USP法本品约120mg，加甲醇-水混合溶剂至500ml，摇匀，取5ml稀释至100ml。另取对乙酰氨基酚对照品适量，用一样溶剂稀释至12ug/ml

溶液，于244nm处以水为空白，测定两溶液吸收度，按10C（Au/As）计算含量（mg）。10=（500×100）/（5×1000）C=12ug/ml%=[10×12×（Au/As）/120]×100%(Au和As分别为样品液和对照液吸收度)芳香胺类药物的分析第55页荧光法——荧光探针技术

使荧光衍生化试剂与本身无荧光或荧光效率低化合物反应，其产物含有强荧光，从而使检测灵敏度大大提升。λex400nm（激发波长）、λem485nm（发射波长）处测定荧光强度，标准曲线法定量。芳香胺类药物的分析第56页HPLC法

盐酸普鲁卡因注射液ChP（）

可同时测定盐酸普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸离子抑制色谱法内标法定量芳香胺类药物的分析第57页1．盐酸普鲁卡因胺常见判别反应有A.重氮化—偶合反应B.羟肟酸铁盐反应C.氧化反应D.磺化反应E.碘化反应

芳香胺类药物的分析第58页2．采取亚硝酸钠法测定含量药品有A.苯巴比妥B.盐酸丁卡因C.苯佐卡因D.醋氨苯砜E.盐酸去氧肾上腺素

芳香胺类药物的分析第59页3．以下药品中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者A.乙酰水杨酸B.对氨基水杨酸钠C.对乙酰氨基酚D.普鲁卡因E.苯佐卡因

芳香胺类药物的分析第60页4.亚硝酸钠滴定法中，加KBr作用是A.添加Br

B.生成NO+·Br

C．生成HBrD.生成Br2E.抑制反应进行

芳香胺类药物的分析第61页5．中国药典（年版）所收载亚硝酸钠滴定法中指示终点方法为A.电位法B.永停法C.外指示剂法D.内指示剂法E.本身指示剂法

芳香胺类药物的分析第62页6．亚硝酸钠滴定法中，可用于指示终点方法有A.本身指示剂法B.内指示剂法C.永停法D.外指示剂法E.电位法

芳香胺类药物的分析第63页例1.ChP（）亚硝酸钠滴定法测定对氨基水杨酸钠含量时，指示滴定终点方法为A.本身指示终点法B.电位法指示终点C.永停滴定法D.氧化还原指示剂法E.酸碱指示剂法

芳香胺类药物的分析第64页例2.以下那种药品中应检验对氨基苯甲酸A.盐酸普鲁卡因B.盐酸普鲁卡因胺C.注射用盐酸普鲁卡因D.盐酸普鲁卡因胺片E.盐酸普鲁卡因注射液

芳香胺类药物的分析第65页例3.盐酸普鲁卡因采取亚硝酸钠滴定法测定含量时反应条件是A.强酸B.加入适量溴化钾C.室温（10～30℃）下滴定D.滴定管尖端深入液面E.永停法指示终点

芳香胺类药物的分析第66页第二节苯乙胺类药品为儿茶酚胺类药品,结构特点1.具邻苯二酚或酚——易被氧化2.侧链烃胺——具碱性3.手性碳——有光学活性*芳香胺类药物的分析第67页代表性药品肾上腺素盐酸去氧肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素盐酸异丙肾上腺素盐酸苯乙双胍盐酸麻黄碱芳香胺类药物的分析第68页药物H2O2/I2FeCl3甲醛-硫酸肾上腺素血红色翠绿色红色异丙肾上腺素红棕或紫色深绿色棕-暗紫色重酒石酸去甲肾上腺素无色或淡紫色翠绿色淡红色盐酸去氧肾上腺素/紫色玫瑰红-橙红-深红色判别试验芳香胺类药物的分析第69页双缩脲反应——盐酸麻黄碱侧链含有氨基醇结构,可显双缩脲反应：芳香胺类药物的分析第70页与亚硝基铁氰化钠反应（Rimini反应）脂肪族伯胺专属反应芳香胺类药物的分析第71页特殊杂质310酮体样品利用酮体在紫外310nm处有最大吸收，而药品本身在此波长几乎没有吸收，测定一定浓度下样品溶液在310nm处吸收度来控制酮体限量。酮体检验肾上腺素、去甲肾上腺素等是经对应酮体氢化还原而得，若氢化不完全，可能引进酮体杂质，药典采取紫外法检验。芳香胺类药物的分析第72页例肾上腺素中酮体检验：样品溶液2.0mg/mL，310nm处吸收度不得大于0.05，已知酮体吸收系数E=453，限量是多少？依据：A=E×C×LC==0.05/453=0.0001204（C/100）×1000/2×100%=0.06%相关物质检验（TLC法）盐酸苯乙双胍中相关双胍检验(纸层析)E×LA芳香胺类药物的分析第73页非水碱量法（原料药）药品取样冰HAc量HgAc2量指示剂终点肾上腺素0.15g10ml/结晶紫蓝绿重酒石酸去甲肾上腺素0.2g10ml/结晶紫蓝绿盐酸多巴胺0.15g25ml5ml结晶紫蓝绿盐酸异丙肾上腺素0.15g30ml5ml结晶紫蓝色盐酸芬氟拉明0.2g20ml结晶紫蓝色盐酸氯丙那林0.2g20ml3ml结晶紫蓝绿盐酸甲氧明0.2g10ml5ml萘酚苯甲醇黄绿硫酸沙丁胺醇0.4g10ml醋酐15ml结晶紫蓝绿盐酸克仑特罗0.25g20ml5ml电位法盐酸苯乙双胍0.1g30ml5ml电位法为何有要加HgAc2？什么情况下采取电位法？硫酸沙丁胺醇滴定度T怎样计算？含量测定

芳香胺类药物的分析第74页溴量法

重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及其注射液采取溴量法测定含量。芳香胺类药物的分析第75页计算：中国药典要求，1个原子溴为1个mol，故依据反应式，1molBr相当于1/6mol去氧肾上腺素，即滴定当量E=M/6=203.67/6T=E×mol/L=M/6×0.1=3.395(mg)(V0-V)×C/0.1×3.395W（mg）

×100%芳香胺类药物的分析第76页提取酸碱滴定法有机碱盐+碱化试剂

有机溶剂提取蒸干+中性醇溶解

酸滴定加过量标准酸

蒸去有机溶剂

碱回滴碱化提取滴定硫酸苯丙胺及其片剂、注射剂含量测定均采取此法。利用本类药品盐酸盐或硫酸盐易溶于水，而游离碱不溶于水可以溶于有机溶剂性质，采取提取酸碱滴定法测定含量。芳香胺类药物的分析第77页比色法

盐酸克仑特罗栓具芳伯氨基，可发生重氮化—偶合反应对照法定量

偶合剂N-（1-萘基）-乙二胺遇亚硝酸也能显色，干扰比色测定，所以在重氮化后，应加氨基磺酸铵将剩下亚硝酸分解除去，再加偶合试剂N-（1-萘基）-乙二胺。

芳香胺类药物的分析第78页荧光分光光度法

λex410nm、λem520nm处测定荧光强度，对照法定量。芳香胺类药物的分析第79页HPLC法

重酒石酸去甲肾上腺素注射液

离子对反相高效液相色谱法内标法定量调整溶液pH为3.8，加入离子对试剂十二烷基磺酸钠芳香胺类药物的分析第80页例1.能和重酒石酸去甲肾上腺素发生颜色反应试液为A.浓硫酸B.甲醛试液C.氨试液D.甲醛—硫酸试液E.茚三酮试液

芳香胺类药物的分析第81页例2.盐酸异丙肾上腺素检验项目是A.相关物质B.二苯酮C.盐酸D.醛E.酮体

芳香胺类药物的分析第82页第三节芳氧丙醇胺类药品药品结构与主要理化学性质氧烯洛尔盐酸卡替洛尔棕色沉淀

K2MnO4乙醇液硫氰酸铬铵淡红色沉淀

芳香胺类药物的分析第83页

氧烯洛尔化学名为

1-邻烯丙氧基苯氧基-3-异丙氨基-2-丙醇.本品为白色结晶粉末,乙醇、丙酮中易溶；异密、氯仿中略溶；水中微溶。

盐酸卡替洛尔化学名为5-[3-[1,1-二甲基乙基)氨基-2-羟丙氧基］-3,4-二氢-2(1H)-喹诺酮盐酸盐。本品为白色结晶粉末,水中溶解，甲醇中略溶，乙醇中极微溶解，乙醚中几乎不溶；在冰醋酸中极微极微溶解。芳香胺类药物的分析第84页

(一)化学判别反应

1.沉淀反应利用其碱性与生物碱沉淀剂生成沉淀盐酸卡替洛尔＋硫氰酸铬铵试液淡红色

2.氧化反应利用侧链不饱和双键可被高锰酸钾氧化氧烯洛尔＋KMnO4MnO2(棕色沉淀)

(二)紫外分光谱判别法盐酸卡替洛尔：8μg/ml,λmax=215nm;252nm

氧烯洛尔：40μg/ml,λmax=275nm判别试验芳香胺类药物的分析第85页盐酸卡替洛尔中相关物质检验本品采取TLC法中高低浓度对照法芳香胺类药物的分析第86页含量测定

（一）非水溶液定法

盐酸卡替洛尔，氧烯洛尔原料可采取此法盐酸卡替洛尔［B]HCl+HClO4[B]HClO4+HCl

用电位法指示终点,HCl不干扰，无需加醋酸汞处理。芳香胺类药物的分析第87页

（二）紫外分光光度法

本法主要用于制剂分析。比如盐酸卡替洛尔注射液采取本法。采取对照品比较法：

CX=AX/AR×CR

标示量％＝CX×D/V取ml×规格ml/标示量×100％芳香胺类药物的分析第88页

（三）HPLC法应用示例：人血浆中样烯络尔及其异构体测定

色谱条件：预柱为十八烷基硅胶柱；分析柱为手性OD－R柱(C18固定相上涂渍3,5-二甲本氨基甲酸酯纤维素，作为手性剂);

流动相为NaClO4(0.4mol/L)-乙腈(70:30)磷酸缓冲液；检测器：237nm

样品预处理：血浆样品用醋酸纤维素膜透析，预柱纯化和富集，然后经过RP－手性HPLC法分析。回收率：可达80％以上；线性范围：0.05μg/ml～2.50μg/ml

日内和日间精密度RSD≤14%.返回芳香胺类药物的分析第89页练习与思索[A型题]1．盐酸普鲁卡因注射液中检验特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.水杨酸D.对氨基苯甲酸E.氨基酚2．对乙酰氨基酚中检验特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.对氨基酚D.苯甲酸E.苯酚3．肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检验特殊杂质是A.水杨醛B.间氨基酚C.对氨基