马立克氏病在鸡生产中的应用

马立克氏病在鸡生产中的应用

马立克病（md）是一种严重的危及养鸡业的疾病。病鸡因感染马立克氏病毒(MDV)后,其淋巴组织细胞恶性增生,发生多发性神经炎或内脏器官恶性肿瘤。鸡马立克氏病肿瘤病变的临床症状和病理变化与由反转录病毒引起的禽白血病(ALV)和禽网织内皮组织增生症(REV)基本相似:病鸡逐渐消瘦、死亡;病鸡的肝、脾、肺、肾、腺胃、生殖腺等部位出现乳白色肿瘤节结,肿瘤密布或零星存在于脏器中,小至肉眼难辨,大至整个脏器形成一个肿瘤。近年来,由于马立克氏病毒变异、活体排毒、免疫程序不当、卫生管理不到位等多种问题的影响,鸡群中马立克氏病免疫失败以及马立克氏病与其它疾病混合感染的现象时有发生,马立克氏病对于养鸡业的威胁正在逐步增加。1病毒的基因特征马立克氏病毒又名禽疱疹病毒2型,病毒分子结构和基因组成与单纯疱疹病毒非常相似。马立克氏病毒也具有不同于其它α疱疹病毒的特征。一是马立克氏病毒有两种存在形式,即无囊膜的裸体病毒粒子和有囊膜的完全病毒粒子。内脏肿瘤组织中的病毒是无囊膜的不完全病毒,是严格的细胞结合性病毒,在外界的存活力很低,离开活体组织和活细胞就很快死亡。羽毛囊上皮细胞中的病毒是有囊膜的完全病毒,是非细胞结合性病毒,可脱离细胞而存活,能在外界环境中存活较长时间,在传播本病方面有极重要作用。二是马立克氏病毒基因组含有肿瘤基因,可在淋巴细胞中形成潜伏感染,引起淋巴瘤。马立克氏病毒分为3个血清性:即血清型Ⅰ型、血清型Ⅱ型和血清型Ⅲ型。这3个血清型病毒存在一定的关系,病毒具有相同的结构特征和遗传特征,病毒间的血清学反应也具有交叉性,具有共性抗原蛋白,具有交叉保护作用。这3个血清型病毒也存在差异,主要是病毒的来源、基因组成和其他生物学特性存在差异。同型抗原和血清之间的反应性要高于异型抗原和血清之间的反应性2马立克氏病毒的发病情况马立克氏病毒野毒株一直在不断地进行变异。在Marek于1907年首次报道马立克氏病后的10多年间,马立克氏病主要表现为由“经典MD毒株”引起的多发性神经炎,发病率和死亡率均较低。1922年美国报道发生马立克氏病,死亡率达20%,这一时期的马立克氏病毒开始表现为内脏器官出现淋巴肿瘤。自1950年起,“急性MD毒株”对于养鸡业的危害已经比较严重,马立克氏病开始出现暴发,不仅仅是神经病变,内脏淋巴肿瘤性病变也较多,死亡率超过30%。全球自1970年开始推广使用疫苗,马立克氏病得到了控制。1980年,出现马立克氏病毒变异株。Witter等分离到的几株马立克氏病毒变异株可以突破HVT疫苗免疫的鸡群,引起较高的发病率IsabelM.Gimeno认为导致病毒变异的原因至少有三种目前认为,马立克氏病毒毒力变异不可能源自抗原漂移,主要来自病毒与宿主的相互选择中发生突变,所以尽管马立克氏病毒的毒力发生了变异,但致病株的血清型并未发生变化3马立克氏病疫苗的制备自1970年开始,人们便寻求利用疫苗来控制马立克氏病,抗马立克氏病疫苗也随着马立克氏病防疫的要求不断发展。所开发的疫苗株有三种血清型:一种是血清型Ⅰ型马立克氏病毒的弱化疫苗株,代表株有HPRS-16att、CVI988/Rispens、814株等,血清型Ⅰ型马立克氏病毒疫苗株要求细胞结合性,其生产、保存、运输、储存的造价相对较高。CVI988/Rispens使用的早期曾有致肿瘤风险的疑虑,没有被广泛使用,以后通过病毒的细胞传代,降低了这一风险,开始大量应用。第二种是血清型Ⅱ型马立克氏病毒,该病毒因对于鸡无致瘤性,被用于疫苗,其代表株有SB-1、Z4株等。血清型Ⅱ型马立克氏病毒疫苗株免疫效果较血清Ⅰ型马立克氏病毒疫苗株效果相对较低,较少单独使用,主要用于制备多价苗。第三种是血清型Ⅲ型马立克氏病毒,即HVT,HVT是一种对于鸡无致病性的病毒,商品名为FCl26株,对于免疫鸡具有较好的免疫保护效果,HVT无细胞结合性,其生产、保存、运输、储存的造价相对较低,使用过程中不存在致肿瘤的风险。HPRS-16att株是第一个广泛用于抗马立克氏病的有效疫苗,主要用于1970年初期,能提供一定保护力,但效果不理想,其后就被其它疫苗所取代。美国于1970年采用HVT疫苗取代HPRS-16att株,其效果要优于HPRS-16att株。1980年美国发生HVT疫苗免疫失败的马立克氏病,主要由vvMDV型马立克氏病毒变异引起株。为控制变异株的感染,采用HVT与SB1二价苗给鸡群免疫,比单一使用其中任何一种防护力都高。在欧洲,Rispens等于1971年开发出CVI988/Rispens,首先在荷兰使用,自1972年起被普遍用到许多欧洲国家及亚洲国家,该毒株对于强毒株具有较好的抵抗作用。在1990年以前,在使用CVI988/Rispens疫苗免疫的鸡群中未发生过马立克氏病。在1990年,由于病毒变异,野毒株的毒力进一步增强,在采用二价苗(美国)和采用CVI988/Rispens(欧洲、澳洲、南美洲、亚洲)免疫的鸡群中,均发生了由vv+MDV变异株引起的马立克氏病。美国从那时起采用CVI988/Rispens控制了疫情,而对于已经使用了CVI988/Rispens疫苗的国家,则采用三价苗加强免疫,控制了vv+MDV引起的疾病。目前,用这些疫苗株开发的马立克氏病疫苗商用产品有单价苗,有二价苗和三价苗。单价苗有由HVT或CVI988/Rispens制备的疫苗,二价疫苗有SB1+HVT、301B/1+HVT、CVI988/Rispens+HVT、Z4+HVT;三价疫苗有CVI988/Rispens+SB1+HVT、814+SB1+HVT等。利用基因工程研制马立克氏病疫苗也取得一些重要进展。Nazerian等用禽痘病毒为载体构建了能表达马立克氏病毒gB基因的重组体FPV-gB,将重组体FPV-gB接种至SPF鸡群可使之获得抗强毒株的攻击,但对有母源抗体的商品鸡保护力低4马立克氏病毒的检测马立克氏病引起鸡发生肿瘤病变的临床症状和病理变化与禽白血病和禽网织内皮组织增生症基本相似,这几种肿瘤性疾病目前在临床均有发生。马立克氏病毒可能是单独感染鸡引起发病,也可能是与禽白血病或禽网织内皮组织增生症病毒混合感染鸡引起发病。仅通过临床症状和病理变化难以将这三种疾病加以区别。实验室鉴别诊断方法依赖于病毒分离、特异性抗体的检测和肿瘤组织的病理学检查。从感染鸡组织中分离到马立克氏病毒,可证明鸡群感染了本病。分离病毒用的材料可以是从肝素抗凝血样中分离的白细胞,也可以用淋巴瘤细胞或脾细胞悬液。田间分离毒株在送检过程中需低温保存,因为马立克氏病毒具有高度细胞结合性,所以这些悬液中的细胞必须是活的细胞。也可以用羽尖作为马立克氏病毒分离材料,但这种方法不常用于诊断,因为免疫过马立克氏病疫苗的健康鸡存在羽髓排毒的可能。应用特异性荧光抗体可以鉴定从病鸡分离的马立克氏病毒,单克隆抗体可用于血清型的鉴别。聚合酶链反应(PCR)可以用于鉴别一些致瘤性和非致瘤性马立克氏病毒,也可以用于鉴定2型和3型疫苗株。PCR也可用来对组织中的马立克氏病毒进行定量,区分血液或羽囊中的马立克氏病毒或HVT。PCR检测方法一方面克服了鉴别诊断的困难,另一方面使多重病毒感染的检测成为可能,所以是一种诊断禽肿瘤病毒的首选方法。定量实时PCR现被用于区分3种马立克氏病毒血清型和确定不同器官的病毒含量。检测抗体最常用的方法是琼脂免疫扩散试验(AGID),还有荧光抗体试验和ELISA方法。这些方法具有型特异性,但会受到交叉抗原的干扰,荧光抗体试验和ELISA方法比AGID试验更敏感。病毒中和试验用来检测血清中和病毒、病毒蚀斑的抗体活性,这种方法适用于科学研究工作,很少用做常规性诊断。由于马立克氏病毒无处不在,抗体检测方法在诊断上的重要性是有限的,但用于鉴别反转录病毒感染还是一种有效方法。肿瘤的病理组织学检查对诊断有一定帮助,但有时细胞浸润特征呈多样性、不具有病征学特点,结果判定较难。马立克氏病肿瘤细胞浸润呈多形性,含有从小到大的淋巴细胞混合群。典型的马立克氏病神经病变有两种类型,一是脱髓鞘作用和神经鞘瘤细胞增生,二是轻度到中度的浆细胞和小淋巴细胞弥散性增生。禽白血病和禽网织内皮组织增生症所致的肿瘤,浸润细胞为形态均一的淋巴母细胞,分别为T或B淋巴细胞。禽网织内皮组织增生症和禽白血病感染在组织学上无法区别。5建立生物安全体系,防止早期暴露安全防范马立克氏病,应当通过免疫、卫生管理、抗病育种等来实现。免疫接种是防治马立克氏病的重要措施,要选择优质、高效、具有足够病毒含量、并无其它病原体污染的马立克氏病疫苗。尽早免疫接种,所有鸡均在出壳后尽早接种疫苗,因免疫接种与雏鸡接触野毒的时间间隔越长,免疫效果越好。近年来国外有人对孵化鸡胚进行免疫接种,使鸡一出壳就具有对马立克氏病的抵抗力,效果令人满意卫生管理也是防治马立克氏病的重要措施。在养禽业密集地区,鸡场羽毛屑、饲养器具、工作服、用过的垫料、运料车、人员进出、运鸡设备等,都可能是潜在马立克氏病传播媒介,使雏鸡很早就暴露于环境中的马立克氏病原体中,甚至多重感染白血病、鸡传染性贫血、鸡新城疫等免疫抑制性疾病。因此加强饲养管理,实行全进全出制,建立生物安全防治体系,严格消毒,防止早期暴露,将传染源杜绝于鸡场之外,可以降低疾病的暴发。抗病育种是防治马立克氏病的另外一条途径。不同遗传品系的鸡对马立克氏病的易感性是不同的,因此,人们期待着培育出抗病的优质商品鸡品系,用于生产。选育抗病品系的方法以前多用后裔测定、攻毒幸存者的繁殖或两者结合的方法6免疫有待于进一步改进马立克氏病一直在世界各国养鸡地区流行,之所以难以防控,原因复杂。病毒在环境中的广泛存在是一个主要原因,目前所用的各种疫苗和各种免疫方法尽管对于鸡群起到了明显的免疫保护效果,但这样的免疫效果均只能保护免疫鸡不发生临床疾病,不能保护免疫鸡免受感染,感染病毒仍可在免疫鸡体内和羽毛囊内复制,并终生向外界排毒;商品肉鸡缺乏马立克氏病免疫也导致病原增加,因为许多商品肉鸡出栏时间较短,生产商为节约成本,既没有接种马立克氏病疫苗,也没有防范马立克氏病传染的措施,这样的肉鸡尽管发生马立克氏病的病例不多,但却是马立克氏病的传染源和散播病毒的载体。此外,存在于羽毛囊及脱落的皮屑中的成熟的马立克氏病毒粒子在自然环境中可以存活较长时间,使病毒通过环境感染鸡群的危险性进一步增加。马立克氏病的免疫有待于进一步改进。马立克氏病毒在环境中的广泛存在增加了鸡群感染的机会,感染免疫健康鸡的病毒可以在体内长久复制,在鸡体内复制的病毒长期承受着来自机体的免疫压力和环境的选择压力,于是,马立克氏病毒发生变异。变异的结果往往是产生毒力更强的毒株,可以突破既有的免疫方法和疫苗株,发生群体免疫失败,导致出现更大的经济损失。从已经出现的马立克氏病毒变异株的发生规律可以看出,当马立克氏病野毒株对于相应的免疫方法经过大约二十多年的适应后,可能变异成为毒力更强的毒株。根据这一现象推测,尽管现在采用的三价苗的多重优化免疫可以基本控制vv+MDV的野毒株引起的疾病,但再过二十多年以后,则有可能出现毒力超过vv+MDV的变异野毒株,可以突破目前采用的的三价苗多重优化免疫保护。为对付不断变异的毒株,马立克氏病疫苗也由单价苗逐步发展为三价苗,其变化的空间几乎已经达到饱和。而到目前为止,对付vv+MDV野毒株的最佳方法就是三价苗的多重优化免疫,超过此三价苗免疫效果的疫苗株还没有被发现。人们不仅担心:当下一步出现毒力超过vv+MDV野毒株的变异株、能突破现在看来最佳的三价苗免疫时,是否还有可供选择的其它免疫方法对其加以控制?马立克氏病的流行病学研究有待进一步加强。从临床病理变化判定肿瘤性疾病并不困难,但如果要与其它肿瘤疾病区分,进一步鉴定是否因马立克氏病感染引起的肿瘤疾病则并不容易,必须借助流行病学调查或实验室诊断。但目前的情况是,可供借鉴的资料和手段不多。当临床中出现肿瘤性