新型培美曲塞衍生物对a549细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响

新型培美曲塞衍生物对a549细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响

二羟色胺（dhfr）是硫酸代谢过程中不可或缺的酶。它可以通过转化二羟色胺而参与生物合成。DHFR抑制剂能选择性地与DHFR结合,阻止或抑制正常底物与酶的结合,阻碍叶酸代谢,最终导致细胞死亡,从而达到治疗肿瘤等目的1材料和方法1.1试剂和设备1.1.1p公司产品特点RPMI1640培养基为赛默飞世尔仪器有限公司产品;新生牛血清为浙江天杭生物科技股份有限公司产品;MTT为Biosharp公司产品;DMSO、甲醇(分析纯)为国药集团化学试剂有限公司产品;青链霉素混合液(100×)、胰蛋白酶-EDTA消化液、吉姆萨染液、AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒为Solarbio公司产品;氟尿嘧啶注射液(5-Fu)为上海旭东海普药业有限公司产品。1.1.2器材Transwell、96孔细胞培养板购自美国Costar公司;水套式CO1.2方法1.2.1rpmi1340的生物活性A549细胞培养于含有10%新生牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中,置于37℃、5%CO1.2.2mtt法检测化合物a1对5a49细胞的毒性取处于对数生长期的A549细胞,消化离心之后,调整细胞浓度至5×101.2.3mtt细胞形态观察根据MTT实验结果挑选出一种化合物,并进行不同作用时间(8、24、48、72h)MTT实验,各孔终浓度为8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μmol/L,在加入MTT溶液之前,将96孔板置于倒置显微镜下观察细胞形态1.2.4克里斯韦氏运动取对数生长期细胞消化计数,用无血清RPMI1640培养基调整浓度为5×101.2.5抗癫痫实验6孔细胞培养板在使用前,预先用水性笔在底部划5条平行直线作为位置标识。取对数生长期细胞,用新鲜培养基调整细胞密度为1×101.2.6流式细胞术分析细胞死亡的变化用新鲜培养基调整细胞密度为1×101.3ue0afs的表示所有实验重复3次,取平均值。数据用ue0af±s表示。借助SPSS22.0软件进行数据统计及显著性分析,采用Origin8.0软件计算IC2结果2.1mtt法检测细胞毒性化合物对A549细胞作用48h后,MTT法检测各个化合物的细胞毒性,结果表明化合物A1、A6、A7、PMX对A549细胞增殖无抑制作用(IC2.2mtt实验结果PMX衍生物A12进行不同作用时间(8、24、48、72h)MTT实验并拍照,结果如表2所示。A12对A549细胞增殖存在明显的抑制作用,且抑制作用存在浓度及作用时间依赖性:细胞存活率随着浓度的提高而降低,IC2.3小鼠细胞迁移抑制率化合物A12不同浓度作用8h后,对A549细胞迁移能力影响结果如图1及图2所示:阴性对照组细胞迁移数为(183.75±2.71)个,A121、0.5、0.25、0.125μmol/L组细胞迁移数分别为74.25±1.30、105.17±0.24、112.92±0.35、140.25±1.30个,迁移抑制率分别为59.59%、42.77%、38.55%、23.67%,阳性对照组(5-Fu1μmol/L)细胞迁移数83.42±0.12个,迁移抑制率为54.60%。随着作用药物浓度的提高,迁移至膜底部的细胞数逐渐减少,迁移抑制率逐渐提高,且相同作用浓度下,化合物A12抑制迁移结果优于5-Fu,此结果表明化合物A12能够有效抑制A549细胞的迁移,且抑制作用具有浓度依赖性。2.4不同浓度a2对a549细胞各组织中麻黄人工林各时间的单次给药后大鼠嘴唇嘴唇合作酶动力化合物A12对划痕后的A549细胞作用24h后,倒置显微镜拍照并观察划痕线附近A549细胞的愈合情况及生长状态,结果表明:阴性对照组在划痕24h后,与此组0h状态对比,划痕两侧细胞分别向对侧生长,划痕间距明显缩小,由(0.90±0.02)mm缩短至(0.21±0.02)mm;A12作用24h后,划痕间距由(0.83±0.02)mm缩短至(0.62±0.03)mm,抑制愈合率为74.10%,提示A12作用后,A549细胞的运动能力减弱,且同种作用浓度(1μmol/L)下,A12对A549细胞的抑制运动作用强于阳性对照组。结果如图3所示。2.5对a549细胞凋亡的影响化合物A12对A549细胞作用48h后,对细胞凋亡的影响见表3。与阴性对照组比较,A12能够显著提高A549细胞的早期凋亡率(P<0.05)、晚期凋亡坏死率(P<0.01)及总凋亡率(P<0.05),且相同作用浓度(1μmol/L)下,对A549细胞凋亡的影响优于阳性对照组。此结果表明:化合物A12能够诱导A549细胞凋亡,从而抑制其增殖。