实验一氨茶碱体外透皮吸收实验

实验一氨茶碱体外透皮吸收实验一、 实验目的1、 掌握透皮吸收的基本实验方法。2、 了解影响药物经皮吸收的因素。二、 实验原理皮肤用药常起保护皮肤与局部治疗的作用，但作为全身给药的途径己有很多研究，无论起局部治疗作用，还是通过皮肤吸收产生全身治疗作用，药物均需通过皮肤外层的屏障进入皮肤，因而研究药物通过皮肤的转运过程及其影响因素，有利于设计高效安全的皮肤给药制剂。药物透皮吸收途径：1、 透过角质层和表皮进入真皮，被毛细血管吸收进入血液循环；2、 通过皮肤的附属器，即通过毛囊、皮脂腺和汗腺。根据皮肤的结构，在透皮吸收中采用透皮吸收促进剂，促进药物分子扩散，改善药物透皮吸收，为药物非口服给药提供有效的吸收途径。三、 器材与试药器材：分光光度计，垂直式扩散池3个，磁力搅拌器1个，搅拌子3个;5m1注射器4个、注射器弯头3个，50m1烧杯10个，1000m1容量瓶1个，10ml容量瓶7个，剃刀1个，脱脂棉若干，小剪刀3把，移液管0.5m1,1m1,5m1各1个，格尺一把试药:氨茶碱注射液(125mg/ml)、生理盐水、氢氧化钠动物:小鼠3只，20±2g四、实验方法（一）溶液的配制：1、 0.1M氢氧化钠溶液的配制:取氢氧化钠4g，加蒸馏水溶解，并定容到1000ml容量瓶中。2、 氨茶碱系列标准溶液的配制:精密吸取氨茶碱注射液（125mg/mL）2ml，加0.1M氢氧化溶液定容至10ml容量瓶中，得浓度为25mg/ml的氨茶碱溶液。精密吸取0.2ml氨茶碱溶液（25mg/mL）,加0.1M氢氧化钠溶液定容至100ml容量瓶中，得浓度为0.05mg/ml的氨茶碱储备液。分别精密吸取氨茶碱储备液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0m1，加0.1M氢氧化钠溶液定容至lOml容量瓶中，得到浓度分别为2.5,5,7.5,10,12.5,15ug/ml的氨茶碱系列标准溶液。（二） 标准曲线的制备设置吸收波长为269nm，以0.1M的氢氧化钠溶液调空白测定各标准溶液的A269吸收值，将吸收度对溶液浓度作线性回归，得标准曲线方程，计算相关系数r，确定线性范围（2.5ug/m1—15ug/ml）。（三） 鼠皮的制备：1、 小鼠脱臼处死，将背部鼠皮剥下，平铺在一干净烧杯上，用剪刀小心剪去背部鼠毛，再用剃刀小心将毛剃千净。2、 用镊子撕下皮下筋膜，用醮有生理盐水的脱脂棉除去皮下脂肪，剪下适合面积进行透皮实验。（四）体外透皮实验：将搅拌子放入扩散池的下池，将完整皮肤固定在上下池之间，在下池加入生理盐水作为接受液，上池加入2m1茶碱注射液，或含有促进剂的茶碱注射液(1%SDS)。将扩散池上池用封口膜覆盖，扩散池放到水浴槽中(事先预热37°C)，将水浴槽放置在磁力搅拌器上。开动搅拌器，记录时间，分别于15、30,45,60,90min,用带弯头的注射器从下池中取样1.0ml，并立刻补充同体积的生理盐水。样品1.0ml加入2.0ml0.1M的氢氧化钠，置分光光度计测定。记录吸收度，计算溶液浓度。如果溶液浓度过高，则用0.1M的氢氧化钠成倍稀释，记录稀释倍数，以便换算。五、数据处理1、 标准曲线的绘制：以氨茶碱浓度横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，求算回归方程和相关系数。2、 计算不同时间的累积渗透量，根据得到的累积渗透量绘制累积渗透曲线。将测得的的吸光度代入标准曲线求出相应的药物浓度，按下式计算累积渗透量(Q)。[X史"xlCn为第n个取样点测得的药物浓度(ug/ml);Ci为第i个取样点测得的药物浓度(ug/ml);S为渗透面积(cm2);以累积渗透量Q对时间t1/2进行线性回归所得方程即为Higuchi方程，所得斜率K即为渗透系数J[ug(cm2•h)]。3、比较完整皮肤，以及在加入吸收促进剂的情况下的渗透量及表观透皮系数，并讨论影响透皮吸收的因素以及怎样通过改善条件增加透皮吸收量。六、 注意事项1、 剃鼠毛的时候一定注意不要弄破鼠皮！2、 下池加接受液及补充接受液的时候一定注意将扩散池横置以便将