实验使用测定方法

测定方法1铜离子浓度测定按照GB-437-80进行。a：试剂焦磷酸钠，碘化钾，冰醋酸，硫代硫酸钠，可溶性淀粉。b：取1mL样品，加入49mL蒸馏水。然后加入1g焦磷酸钠（磨碎），溶解。加入2〜4g碘化钾，加入10mL醋酸，混匀后，置阴暗处静置10mim。用0.1M硫代硫酸钠标准溶液滴定，滴到淡黄色时，加入3mL淀粉指示剂，滴至蓝色消失。用99.999%的铜配制成标准溶液，制作铜离子浓度的标准曲线。参照标准曲线，可以得到样品铜离子浓度。2铁离子浓度测定a试剂：重铭酸钾溶液1.755g/L，二苯胺磺酸钠溶液0.2%（W/W）;硫磷酸（浓硫酸：浓磷酸：水=1.5：1.5：7）b滴定：50mL三角瓶中，吸取0.1mL样品加水稀释至1mL。然后加入1mL硫磷酸、2〜3滴二苯胺磺酸钠溶液。用重铭酸钾溶液滴定至亮紫色即到滴定终点。C计算：每消耗1mL重铭酸钾溶液，相当于0.002g亚铁离子。亚铁氧化活性测定亚铁氧化活性测定方法如下：取菌株的液体培养物，用1/600mol/L的K2Cr2O7对其中的Fe2+进行滴定。每隔一段时间（一般为3〜4h）取0.5mL菌液，用蒸馏水（或1%稀硫酸）稀释10倍，再取其中的1mL滴定，每进行3次重复，取其中平均值作为滴定值。滴定用1：1的硫酸磷作为络合剂，用0.2%二苯胺磺酸钠作为指示剂，滴定至亮紫色即到滴定终点。5-璜基水杨酸法测定铁离子浓度的理论基础是：5-璜基水杨酸和三价铁的复合物在酸性下形成红色的复合物；当加入氨水后pH升高，5-璜基水杨酸和所有的铁离子形成黄色的复合物。三价铁的最大吸收波长为：500nm;总铁的最大吸收波长为：420nm，总铁的浓度二0.112A（总铁）。三价铁：取0.1mL样品和3mL10%的5-璜基水杨酸混合，然后加入97mL的去离子水在500nm处测量其吸光值，三价铁浓度=0.040A（三价铁）。总铁：在上述溶液中加入3mL25%的氨水然后在425nm处测量其吸光值。制作三价铁和总铁的标准曲线：准确称量硫酸亚铁和硫酸铁然后加入去离子水定容，总铁最终的浓度分别为：1、2、3、4、5、6、7、8、9g/L，然后按照测总铁的方法测量制作标准曲线，其相关系数应该大于0.995.三价铁的标准曲线如上所示。分光光度计使用方法：（1）通电仪器自检 预热20min；（2） 用＜MODE＞键设置测试方式：透射比（T），吸光度（A），已知标样浓度方式（CONC）和已知标样浓度斜率（C0）方式；（3） 波长选择：用波长调节旋钮设置所需的单色光波长；（4） 放样顺序：打开样品室盖，在广4号放置比色皿槽中，依次参比液，样品液1和样品液2和样品液3，盖上样品室盖。（5） 参比液校“0”％T，将拉杆抵入最里挡，使光线不能透过参比液，按“0%T”键调0.0； 将参比液拉入光路中，按“100%T”键调100%T，仪器自动校正，校正完毕后显示100后，表示校正完毕，可以进行样品测定。（6）样品测定：将两样品液分别拉入光路中，在“ABS”方式下，则显示测得的样品吸光度。扫描电子显微境观察离心收集菌体，并用2%的稀硫酸重复洗涤三次，以去除三价铁离子沉淀。然后，取适量菌体涂布在小块盖玻片上，自然干燥后，用导电胶布贴于圆形贴片上，喷金，观察并拍照。3透射电子显微境观察按上面的菌体收集方法收集菌体，然后用pH6.0的0.01mol/L乙酸钠溶液洗涤，取适量菌体滴在载膜铜网上，用PH7.0的2%磷钨酸染色1min，自然干燥后，在透射电子显微境下观察并拍照。4元素硫和细菌表面的傅里叶红外（FT-IR）光谱测定在适宜条件下，分别将在不同培养基生长的细菌经Whatman1号纸过滤去除杂质，滤液经8,000rpm离心10min，获得的细菌重新分散于pH为2的水中，反复润洗三次，最后此悬浮液经真空冷冻干燥以去除水分。经细菌作用后过滤在滤纸上的硫，重新分散于pH为2的水中，在离心机中6000rpm离心一分钟，收集硫沉淀，反复用pH为2的水冲洗三次（尽量减少细菌的干扰）后收集和经预处理的硫真空冷冻干燥以去除水分。采用KBr压片方法，在FT-IR光谱仪（Nexus670,Nicolet,USA）扫描和记录400〜4000cm-1段的红外吸收光谱值。万座菌A.manzaensis培养方法：基本培养基：(NH/'SOI1.5g；KHPO0.25g；MgSO-7HO0.25g；4^2 24 4 2CaCl2-2H2O0.01g；酵母提取物0.45g/L；活化：1L基本培养基分别加加35gFeSO4.7H2O，元素硫10g,黄铁矿30g，黄铜矿30g，在65°下转速180条件下进行活化、驯化培养。pyrite(Fe42.25,S48.34,Cu0.32)andchalcopyrite(Cu30.60,Fe22.64,S29.60)andmineralpowdersusedintheexperimentshadasizedistributionof95%passing7412m.疏水性测定：细胞样品悬浮在5ml基础培养基中，然后测量600nm处的吸光值；向混合液中加入等体积的正十六烷，振荡90s，然后静置30分钟后测量下层水相的吸光值，（OD"OD水相）/OD初始计算出疏水性。 成分 初始-(NH4LSO4 水相 初始 KClK2HPO4MgSO4・7H2OCa(NO3)2FeSO4-7H2OpH心-1)30.1 0.5 0.50.0144.72.0动电位（Zeta-potential）测定:动电位测定用DELSA440SIITypeelectrokineticinstrument进行测定。黄铜矿动电位测量：黄铜矿粉末浓度为The1g/L，离子强度用NaCl溶液维持为为0.01mol/L。黄铜矿和微生物作用后的动电位测量：用磁力搅拌器混合90min，细胞浓度为1x108cells/mL。细胞动电位测量：2x108cells/mL的细胞悬浮在0.001mol/L的NaCl中。测量的pH用盐酸或氢氧化钠调节。吸附试验：1g矿粉加到100mL浓度为0.01mol/L的NaCl溶液中，调节pH为1.5，微生物的初始浓度为1x108cell/L，用磁力搅拌器混匀90min，然后过滤得到细胞溶液在显微镜下用血球计数法计数，吸附量二初始细胞浓度-吸附后的细胞浓度有关硫酸根离子测定的具体步骤，包括试剂配制、标准曲线的制定步骤如下:稳定液的配制75g分析纯NaCl，溶于300ml水中，加入30ml分析纯浓HCl，50ml甘油和100ml95%乙醇，混匀。硫酸根标准储备液配制：准备称取1.814g无水硫酸钾（K2SO4分析纯，事先在105oC下干燥两小时），溶于少量纯水后，移入1000ml容量瓶中，用纯水定容至刻度。此溶液1.00ml含1.00mg硫酸盐（SO：-）。硫酸根标准溶液配制：准确吸取上述储备液10.00ml于100ml容量瓶中，用纯水稀释至刻度。此溶液1.00ml含100ug硫酸盐（SO：-）。标准曲线绘制方法：称取0.1gBaCl2晶体若干份备用，向一系列50ml烧杯中准确加入硫酸根标准使用液，0.00，0.30，0.50，1.00，1.25，1.50，2.00和2.50ml，加蒸馏水至最终体积为5.00ml，然后分别加入稳定剂1ml，将配置成标准系列的50ml烧杯逐个放在磁力搅拌器上，于搅拌中迅速加入0.1gBaCl2品体，计时搅拌1min，静置15min后，用2cm比色皿，在波长420nm处，

蒸馏水做对照，测得数据如下表：表3.2硫酸根标准浓度和相应的吸光度SO2-(mg・L-1)吸光度0.00.0096.00.06810.00.11420.00.22830.00.33440.00.4550.00.555比浊法（吸光度）测定：取0.1gBaCl2，稳定溶液1ml，吸取待测菌液的上清液250ul，加入50ml烧杯配成50ml体系：摇匀。以蒸馏水空白做对照，用紫外可见分光光度计于420nm波长处测定吸光度。计算：硫酸盐（mg・L-i）二相当于标准溶液中硫酸盐（mg）X1000：水样体积（ml）菌液中硫酸盐浓度的变化为：C’二C-C。；式中，C'是菌液中实际硫酸盐浓度，C是测得的硫酸盐的浓度；C0是菌液中硫酸盐的初始浓度，即刚接入菌种时，菌液中硫酸盐的浓度。以硫酸根浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制工作曲线并作回归分析如下：0 10 20 30 40 50 60硫酸根浓度(mg/L)图3.1标准曲线表3.3作曲线的线性回归分析ParameterValueErrorA0.00550.002020.011027.17244E-50.01102RSDN P0.99989 0.00325 7 <0.0001由上述对工作曲线的回归分析可知：硫酸根浓度在10-50mg-L-1内，硫酸根浓度与吸光度呈很好的线性关系，相关系数r>0.999,标准曲线为：y=0.0055+0.011x经反复试验，以每次取菌液250ul所得数据可以较好的用词曲线来求所含硫酸根离子的浓度。5电镜的锇酸问题锇酸(OsO4)――强氧化剂，与氮原子有较强的亲和力，对细胞结构中的蛋白质成分有良好的固定作用；与不饱和脂肪酸反应使脂肪得以固定。(此外还对脂蛋白、变性的DNA以及核蛋白有固定作用)锇酸有强烈的电子染色作用，样品图像的反差较好。缺点： ①渗透能力较弱(0.1~0.3mm/h)长时间固定在锇酸中会引起一些脂蛋白复合物的溶解和其他细胞成分的丢失；组织内部出现黑色小颗粒金属锇沉淀的人工假；使组织变脆而影响切片。易挥发，对皮肤、呼吸道粘膜、角膜有伤害。见光或受热易氧化，故应保存与避光和阴凉处。戊二醛(C5H8O2)――使用广泛对糖原、蛋