实验1 蛋白质及氨基酸的呈色反应_第1页
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实验一蛋白质及氨基酸的呈色反应一、实验目的1、了解构成蛋白质的基本结构单位及主要联接方式2、了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理3、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法二、实验原理1.双缩脲反应(biuretreaction)蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。2.茚三酮反应(ninhydrinreaction)蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。3.苯环的黄色反应+浓硝酸Tyr+浓硝酸黄色Trp黄色Phe+少量浓硫酸+浓硝酸黄色4.乙醛酸的反应：检测Trp或含Trp蛋白质的反应。当Trp与乙醛酸和浓硫酸在试管中滴加时，产生分层现象，界面出现紫色环。主要是由于蛋白质中的吲哚环作用。5.偶氮反应偶氮化合物都含有-N=N-这样结构，通常作为染料。6.醋酸铅反应三、实验步骤1.双缩脲反应(biuretreaction)取1支试管，加乳蛋白溶液（蛋清：水=1：9）约1ml和10%NaOH约2ml，摇匀，再加1%CuSO4溶液2滴，随加随摇。观察现象，记录。2.茚三酮反应(ninhydrinreaction)（1）取2支试管分别加入蛋白质溶液（蛋清：水=1：9）和甘氨酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮，混匀，沸水浴中加热1-2分钟，观察颜色是否由粉红色变紫红色再变蓝色。（2）在一块小滤纸上滴1滴0.5%的甘氨酸溶液，风干后再在原处滴1滴0.1%茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察是否有紫红色斑点的出现。3.苯环的黄色反应向6个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。鸡蛋清溶液（蛋清：水=1：9）管号123456材料鸡蛋清溶液指甲头发0.5%苯酚0.3%色氨酸0.3%酪氨酸（滴）4少许少许444浓硝酸（滴）22020444现象逐滴加10%NaOH后现象变化4.乙醛酸的反应：向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。蛋白质溶液（蛋清：水=1：20）管号123材料蛋白质5滴0.3%色氨酸1滴，水4滴水5滴冰醋酸（ml）222浓硫酸（ml）111现象记录5.偶氮反应向3个试管中按下表加试剂，观察现象并记录。鸡蛋清为纯蛋清。管号123材料0.3%组氨酸4滴0.3%酪氨酸4滴鸡蛋清4滴偶氮（滴）88820%NaOH（滴）222现象记录6.醋酸铅反应取1支试管，加入10%醋酸铅溶液1ml，再加入10%NaOH至产生的沉淀完全溶解为止，摇匀。加入被水稀释一倍的蛋白质溶液0.4ml.混匀,小心加热,至溶液变黑后,加入浓盐酸数滴,嗅气味,并将湿润的醋酸铅试纸置于管口,观察其颜色变化,记录。（蛋白质溶液为蛋清：水=1：1）四、注意事项1、实验内容繁多，请认真预习、操作。2、操作请按步骤进行五、问题讨论1、如果茚三酮反应呈阳

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