15种丙型肝炎elisa检测方法的质量评价

15种丙型肝炎elisa检测方法的质量评价

自1989年发现丙酸酯病毒（hcv）以来，许多研究促进了各种hcv检测方法的建立和发展。HCV酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)诊断试剂(HCVELISA)现已发展到第三代,广泛应用于血液筛查及临床诊断等领域。HCV胶体金法诊断试剂也因其快速、简便的优点,逐步在医学检验实验室中普及。由于HCVELISA和胶体金试剂在检测实验室的大量使用,对其进行质量评估具有一定意义。1材料与方法1.1验证血清盘包括:参比室基础血清盘、参比室干扰血清盘、商业阳转血清盘。参比室基础血清盘由国家艾滋病参比实验室提供,样品均来自于献血员,样品的抗-HCV反应性由两种进口抗-HCVELISA试剂和MPue617DiagnositicsHCVWesternBlotAssay3.0(MPHCV)或CHIRONue617RecombinantImmunoblotAssay3.0(RIBA)确定。商业阳转血清盘购自美国BBI公司,由4套阳转血清盘组成,编号分别为PHV906、PHV908、PHV910、PHV914,共33份样本,每套血清盘均由处于抗-HCV血清转换期的单个个体的一系列连续血浆样本组成,标准检测结果由BBI公司的说明书提供。参比室干扰血清盘由国家艾滋病参比实验室提供的献血员血浆样本组成,共40份样本,所有样本均为抗-HCV阴性,但每份样本至少为抗-HIV、HBsAg或梅毒抗体一项阳性。1.2试剂所评估试剂均由市场采购,包括15种丙肝ELISA试剂和8种丙肝胶体金试剂。ELISA试剂依次用字母A-O表示,其中N、O为进口试剂;胶体金试剂依次用罗马数字Ⅰ-Ⅷ表示。1.3仪器设备Fluido洗板机、安图酶标仪2010、Memmer恒温箱。1.4评估方法所有试剂操作及结果判读均严格按照厂家说明书执行。实验前将试剂和样品随机放置,以实现双盲操作。HCVELISA试剂的评估采用参比室基础血清盘、参比室干扰血清盘、商业阳转血清盘进行;HCV胶体金试剂的评估仅使用参比室基础血清盘和参比室干扰血清盘。根据不同验证血清盘的检测结果,分别评估试剂的阳性符合率、阴性符合率、分析灵敏度、分析特异性。1.5质量控制HCVELISA试剂评估使用的室内质控品由国家艾滋病参比实验室提供。试验过程中,每次操作均检测质控品和样本。此外,为保证实验室人员的操作水平,试剂评估前期,操作人员随机抽取HCVELISA试剂和胶体金试剂各两种,对20支美国病理学家协会(CAP)能力验证血清盘进行检测(阴性、阳性各10支)。2结果方法学评估前,对美国CAP血清盘的检测结果均与标准结果一致,说明所有操作人员的操作水平达标。对室内质控品的检测,所有试验均有效,评估的试验结果真实可靠。2.1参比室基础血清盘基础血清盘用于验证试剂的阳性符合率、阴性符合率。13种国产ELISA试剂中,除试剂F阴性符合率和试剂K的阳性符合率为97.5%(39/40)以外,其余试剂的阳性符合率和阴性符合率均可达到100%。两种进口试剂N、O的阳性符合率和阴性符合率均为100%(40/40)。与进口试剂N、O比较,国产试剂的阳性符合率、阴性符合率无明显差异。8种丙肝胶体金试剂中,试剂Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ的阳性符合率分别为92.5%(37/40)、82.5%(33/40)、92.5%(37/40),其余试剂阳性符合率均为100%(40/40);阴性符合率除试剂Ⅲ为97.5%(39/40)外,其余均为100%(40/40)。其阳性符合率与ELISA试剂有一定的差异。2.2商业阳转血清盘阳转血清盘的评价指标用平均延长天数表示,平均延长天数为4套血清盘延长天数的均值,评价结果见表1。15种HCVELISA试剂的平均延长天数分布在8-19天之间,对PHV906、PHV908、PHV910盘检出阳性晚于RIBA3.0的,分别有1种(试剂K)、13种、3种(试剂D、H、L)。对PHV914的检测中,除试剂J检出阳性的时间与RIBA相同外,其余试剂均早于RIBA。RIBA检测为阳性,ELISA试剂未检出的样本主要集中在PHV908盘中,该盘中第5支样本为HCVNS3抗体和HCVNS4抗体弱阳性,仅试剂F、N对此样本检测为阳性。PHV906盘中第1、2支样本为NS3单带强阳性、NS4带+/-,第1支样本有6种试剂检测阳性,第2支样本有13种试剂检测阳性。PHV914盘中第5、6支样本为Core单带阳性,第5支样本有6种试剂检出阳性,第6支样本有11种试剂检出阳性。2.3参比室干扰血清盘干扰血清盘用于评价试剂的分析特异性,检验抗-HIV、HBsAg和梅毒抗体对抗-HCV检测的干扰。15种抗HCVELISA试剂和8种HCV胶体金试剂的分析特异性均为100%,未出现假阳性检测结果。3讨论随着HCV研究的发展,其检测方法也在不断发展完善,HCVELISA试剂的敏感性、特异性有了很大的提高,HCV胶体金试剂也已发展成熟,广泛应用于基层实验室。因本次评估基础血清盘的样本量较少,因此在结果中用阴性符合率和阳性符合率表示,这两个指标可反映出试剂的敏感性、特异性。结果显示,HCVELISA试剂的敏感性、特异性普遍较高,且国产试剂与进口试剂无显著性差异。有研究指出国产HCVELISA试剂敏感性略高于进口试剂,但特异性稍差,这可能是由于各研究所使用的验证血清盘、样本阳性判定标准不同等多方面原因造成的。鉴于此种情况,要想更加全面真实地了解国内抗-HCV试剂的质量,还应采用大量样本,检测多批次试剂,利用长期数据进行试剂质量的评估。试剂K阳性符合率不足100%,说明还存在漏检现象。此情况在评估试剂中虽属于个别现象,但漏检一旦发生会影响病人的早发现早治疗,带来很多不良后果。因此试剂厂家还需要不断从技术、生产工艺等方面入手,杜绝试剂漏检的发生。部分HCV胶体金试剂通过阳性符合率计算出的敏感性偏低,有可能产生漏检现象。其他研究数据也指出,部分HCVELISA试剂检出阳性的样本,胶体金试剂检测为阴性。尽管HCV胶体金试剂的敏感性有待于进一步提高,但其简便、快速、对实验室环境和操作人员要求低等优点,使其在急诊术前、输血前检测及献血员初筛等方面具有广阔的应用前景。商业阳转血清盘评估结果显示,HCVELISA试剂对HCVCore抗体和HCVNS4抗体的检测能力存在一定的差异,多数试剂对HCVNS3抗体的检出能力有待提高。各试剂的平均延长天数存在一定差异,且国产试剂的平均延长天数普遍长于进口试剂,提示国产试剂在检测早期感染方面的能力还需完善。因此HCVELISA试剂在包被抗原的种类及其组成方面应进一步完善,以尽早地检出感染人群。15种HCVELISA试剂和8种胶体金试剂对干扰血清盘的检测结果表明,抗-HIV、HBsAg和梅毒抗体与抗-HCV的检测无交叉反应,说明HCVELISA和胶体金试剂具有较高的分析特异性,对这几种通过相似途径传播的疾病的病原物质或其抗体的抗干扰能力较强,因此发生因这几种病原共感染而造成假阳性的可能性较低。综上,HCVELISA试剂的敏感性、特异性都较高,适用于筛查。胶体金试剂的敏感性稍逊于ELISA