延胡索的活性成分提取工艺

延胡索的活性成分提取工艺摘要】目的：探讨延胡索的活性成分最佳提取工艺。方法：采用L9（34）正交试验，以浸膏得率和延胡索乙素质量分数作为考察指标，分析提取时间、乙醇体积分数及提取溶剂用量及对延胡索生物碱的提取效果影响，确定最佳的提取工艺。结果：延胡索生物碱提取的最佳工艺为超声提取3次，45min/次，加入7倍量的50%（体积分数）乙醇。结论：优选得到的工艺合理、经济可行，适用于延胡索活性成分生物碱的提取。【关键词】延胡索；活性成分；提取工艺延胡索为一种常用中草药，具有理气止痛、活血散瘀等功效［1-2］。延胡索具有类似吗啡样镇痛功效，镇痛效价约为吗啡的一半，特别对持续性的镇痛效果比吗啡优，并且患者不存在欣快感，无成瘾性。现代研究表明延胡索生物碱中延胡索乙素存在脑内多巴胺阻断剂的作用，效价仅居于吗啡之后，此外还能加强肾上腺皮质激素分泌。延胡索主要活性成分于化学结构上和罂粟碱同属于苯异哇啉类，二者的作用非常相似，但延胡索不存在成瘾性，所有系理想镇痛药物［3］。提取延胡索活性成分过程中，因大部分采用水作为溶媒，使其活性成分延胡索乙素的含量极低，进而使其止痛作用欠佳。本文笔者探讨延胡索活性成分的最佳提取工艺，现报告如下。1仪器与试药洁康牌数码有限公司PS-20A超声波清洗仪，常州澳华仪器有限公司HH-Z数显恒温水浴锅，上海精天电子仪器厂FA2104A分析天平，上海精密科学仪器有限公司721分光光度计。水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯；延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110726-200610）；延胡索药材（亳州徐重道中药饮片厂，批号：11035）。2方法与结果2.1对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品5.0mg至25mL容量瓶中，加入70%乙醇溶解，并定容至刻度，摇匀，即为对照品溶液。2.2正交试验预试验的结果显示超声提取延胡索药材3次较完全，故正交试验采用的提取次数3次。按照延胡索乙素理化性质⑷和预实验的结果，选取提取时间（A）、乙醇体积分数（B）、提取溶剂用量（C）3个因素为考察因素，且每因素设定3个水平（见表1）。2.3供试品溶液的制备用粉碎机将延胡索药材粉碎，过60目筛。取正交试验的各项下获得的延胡索生物碱提取液进行抽滤，将滤液合并，减压回收乙醇，定容于100mL容量瓶。精密各吸取0.5mL，分别置于50mL容量瓶，加入70%乙醇并定容至刻度，摇匀，即为供试品溶液。2.4线性关系考察［5-6］分别取延胡索乙素对照品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、3.0mL，分别以70%乙醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，即得一系列质量浓度的延胡索乙素对照品溶液。采用70%乙醇作为空白对照，在280nm波长处测定一系列质量浓度的延胡索乙素对照品溶液吸光度。横坐标为延胡索乙素质量浓度(C)，纵坐标为吸光度(A),进行线性回归。得回归方程：A=15.286C+0.0391，r=0.9991。结果显示延胡索乙素在浓度范围(0.01~0.05)mg/mL之间与吸光度有好的线性关系。2.5浸膏得率测定精密从100mL延胡索生物碱提取液中量取25mL，置于干燥至恒重蒸发皿内，水浴蒸干，然后再105C烘箱内干燥3h，置于干燥器内室温冷却30min，迅速测定质量。公式为浸膏得率=(浸膏质量x4)/每份药材质量X100%。2.6醇浸膏得率和延胡索乙素含量测定称取延胡索粉9份，30.00g/份，根据设定的时间超声提取三次，照L9(34)正交表进行试验。分别测定延胡索提取液的浸膏得率与延胡索乙素含量，结果见表2-4。表2结果显示，评价指标为浸膏得率时，三个因素对延胡索提取的影响程度依次为B>A>C；表3结果显示，提取时间与乙醇体积分数对浸膏得率的影响均存在统计学意义，而提取溶剂用量对浸膏得率的影响则无统计学意义，故最佳的提取工艺为A3B3C2。表2结果显示，评价指标为延胡索乙素的质量分数时，三个因素对延胡索提取的影响程度依次为B>A>C，与三个因素对延胡索浸膏得率影响结果一致；表4结果显示，提取时间、乙醇体积分数和提取溶剂用量对延胡索乙素的质量分数影响均存在统计学意义，故最佳的提取工艺为A3B3C2。因此优选的最佳提取工艺为A3B3C2,即超声提取3次，45min/次，加入7倍量的50%(体积分数)乙醇。3讨论延胡索的主要活性成分为生物碱类化合物，其中延胡索乙素的活性最强、质量分数最高，其能够显著地镇静、镇痛［7-9］，其含量多少跟延胡索的功能主治有着密切关系，可直接地影响着临床疗效。目前常见的延胡索乙素提取方法有索氏提取法、乙醇回流法、CO2超临界流体萃取法、微波提取法及超声提取法等［10-11］，其中超声提取法简便、迅速，也可降低高温水煮对延胡索乙素破坏，能够增加延胡索乙素利用率，所以本研究采用超声提取法作提取延胡索乙素。此外，由于水提的效果较差，因此本研究应用乙醇提取。本实验结果显示，延胡索生物碱提取的最佳工艺为超声提取3次，45min/次，加入7倍量的50%(体积分数)乙醇。优选得到的工艺合理、经济可行，适用于延胡索活性成分生物碱的提取。参考文献：［1］ 贺凯，高建莉,赵光树.延胡索化学成分、药理作用及质量控制研究进展［J］.中草药，2007,38(12):1909-1911.［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［M］.北京：中国医药科技出版社,2010:130.［3］ 谢秀琼.中药新制剂开发与应用［M］.2版.北京:人民卫生出版社,2003:158.［4］ 马爱瑛.生物碱的提取与分离［J］.固原师专学报：自然科学版,2006,27(3):25-30.［5］ 朴惠善，沈光海,郑云花，等.紫外分光光度法测定关苍术复方制剂中延胡索乙素含量［J］.延边医学院学报,1996,19(1):11-13.［6］ 薛育梅.元胡止痛片提取工艺的探讨［J］.海峡药学,2004,16(6):27-28.［7］ LINMT,CHUEHFY,HSICHMT.Thehypothermiceffectsofdl-tetrahydropalmatineinrats[J].NeurosciLett,2001,315(1/2):53-56.张晓丽，曲扬.延胡索的化学成分[J].沈阳药科大学学报,2008,25⑺：534-540.王光宁，孟江，廖华卫.延胡索炮制历史沿革研究[J].广东药学院学报,2007,23(3):349