艾滋病检测点培训

HIV实验室检测培训1整理ppt艾滋病基础知识---定义艾滋病（AIDS）：由人类免疫缺陷病毒（HIV）所引起的一种以辅助性T淋巴细胞（CD4+T淋巴细胞）数量减少导致免疫功能减退为主要特征的严重传染性疾病。---来源20世纪40-50年代的非洲，HIV病毒可能由猴子体内的猿免疫缺陷病毒演变而来2整理ppt---流行最早在美国发现欧洲非洲20世纪80年代中后期传播到亚洲---感染的自然发展过程窗口期受到HIV感染到可以检测出艾滋病抗体的这一段时间特点：轻微的一过性感冒症状在窗口期内检测不出抗体感染（HIV-1）2-3周可检出P24抗原

感染者的血液、精液、阴道分泌物等体液中，含有大量HIV

3整理ppt无症状潜伏期8-10年特点：HIV抗体+临床症状出现平均10年的潜伏期后出现艾滋病病人临床症状出现后1年发展为病人死亡无抗病毒治疗情况下，半年到2年的时间，病人死于艾滋病

HIV抗体（-）

HIV抗体（+），无症状

HIV抗体+有症状艾滋病

4-8周8—10年1年0.5—2年左右

个体感染艾滋病病毒后的自然发展过程4整理pptHIV检测是艾滋病防治的一项

重要保证措施明确HIV感染者（诊断）及早医学干预合宜的治疗指标和效果评估疫苗效果考评发现HIV阴性者做好减少危险（不安全性行为和药瘾者）的咨询开展VCT的基础流行病学监测和专题研究公共卫生规划（政策形成、保险、控制等）职业保护5整理ppt达到保证措施的必要条件贯彻有关HIV检测的法规（实验室网络、人员、仪器设备、房屋等条件）有效的检测方法和检测试剂常规质量控制和质量保证6整理ppt艾滋病检测工作管理文献1990.全国HIV检测管理规范（试行）1997.9.全国艾滋病检测工作规范2004.8.全国艾滋病检测技术规范（试行）-----“规范”2003.全国艾滋病检测工作管理办法-----“办法”2004.12全国艾滋病检测技术规范（正式）2009全国艾滋病检测技术规范（修订版）7整理pptHIV感染的实验诊断检测方法HIV培养，核酸测定，P24抗原检测，血清抗体测定金标准血清抗体测定，HIV感染后平均25天检出，待12周时几乎全检出HIV抗体检测两个阶段（筛查和确认）三个程序（初筛－复检－确认）2＋3标本（血清，全血，唾液，尿液，滤纸干血）8整理pptHIV筛查试剂要求和种类---要求SFDA注册批准中检所批批检合格CDC临床评估质量优良使用有效期内采供血机构必须使用HIV-1/2

---种类

酶联免疫试剂（EIA）颗粒凝集试剂（PA）其它快速试剂（RT）9整理ppt检测注意事项---HIV抗体检测工作应该按照《全国艾滋病检测技术规范》，在合格的艾滋病检测实验室进行---为了减少检测的错误和误差，应采取严格的质量保证、质量控制和质量评价措施---注意实验室生物安全防护和职业暴露预防---严格遵守实验室标准操作程序（SOP），按照试剂盒说明书操作，注意防止样品间交叉污染10整理ppt检测程序---筛查试验---重复检测---确认试验11整理pptHIV抗体筛查---职责经省卫生行政部门指定验收专家组，验收合格的HIV筛查实验室---方法、试剂酶联免疫实验：第三代双抗原夹心法试剂（ELISA）快速检测

明胶颗粒凝聚实验斑点ELISA

斑点免疫胶体金艾滋病唾液检测卡12整理ppt采集标本血液标本一般采集肘正中静脉血液3-5ml婴幼儿可选择颈外静脉13整理ppt采集标本以肘静脉取血为例。选择适宜静脉，在上臂扎上压脉带。先用25g/L碘酊棉签于欲穿刺处皮肤从内向外做环形消毒，待干后再用0.75L/L乙醇棉签以同样方式擦去碘迹。14整理ppt采集标本取无菌注射器，按牢针头，使针头斜面与针筒刻度平行，并查看有无阻塞和漏气。采用一次性注射器还应注意包装是否密封，有无过期，否则不得使用。15整理ppt采集标本嘱病人紧握拳头，使静脉显露。左手拇指固定穿刺部位下端，右手持注射器，使针筒刻度向上，先以约30º角度沿静脉正面进针，快速穿过皮肤刺入静脉中央。见回血后，右手固定注射器，用左手缓缓抽出注射器针栓，至所需血量后，解除压脉带，放松拳头，以消毒棉签压住穿刺孔，拔出针头。16整理ppt采集标本取下针头，将血液沿管（瓶）壁缓慢注入容器内，待血液自行凝固。血块收缩后，即可分离出血清。如需全血或血浆，则将血液注入事先准备的抗凝管（瓶）中，轻轻混匀，防止凝固，即为抗凝血。经适当离心可分离出血浆。血清和血浆的主要差别是，血清中无纤维蛋白原。采样完毕后应同时填写采样登记表17整理ppt标本处理将采集好的血液标本放入离心机3000转/分离心5分钟取出标本，用移液器（或一次性滴管）将血清移入血清储存管中（1.5ml）检测完毕后将血清储存管盖紧，放入冰箱冷冻室保存至少2个月18整理ppt胶体金快速检测技术19整理ppt一、原理

本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预包被金标记HIVgp160和gp36抗原，在硝酸纤维膜检测线和质控线上分别包被HIVgp41、gp36混合抗原和抗HIVgp41抗体，当检测进行时，样品中HIV抗体可与金标记的HIV抗原结合形成复合物，由于层析作用,使复合物沿试纸条向前移动。若样品中含有可被检测的HIV抗体，则与检测线预包被的HIV抗原结合形成“金标记HIV抗原-HIV抗体一HIV包被抗原"复合物凝聚显色；若样品中没有HIV抗体或HIV抗体的含量低于检测限时，则不形成复合物而不显色。20整理ppt二、试剂盒组成

1.

HIV(1／2)抗体胶体金试纸条／板50人份／盒，(5条)／lO袋。

2.说明书1份。

3.稀释液l份，4ml／瓶。21整理ppt三、操作步骤根据试剂盒说明书进行操作！一般操作步骤：

1．将密封袋打开，取出所需试纸条／板。

2．样本检测：取4Oul待检样本加在试纸条／板的加样区，再在近加样区上方加1滴稀释液。

3．30分钟内观察并记录试验结果。22整理ppt四、结果判断阳性结果：在试纸条／板的检测窗和质控窗位置上各出现一条紫红色条带。阴性结果：仅在试纸条／板的质控窗位置上出现一条紫红色条带。无效结果：在试纸条／板的检测窗和质控窗位置上均未出现紫红色条带为试验无效。23整理ppt五、实验结果判断示意图24整理ppt六、注意事项

1．被检样品、试剂应在室温2O℃左右平衡30分钟后检测。被检品应为新鲜样品。如发现试纸条／板密封袋破损则需废弃。

2．高血脂和高胆红素样品对检测结果无显著性影响，但溶血样品，尤其是大量溶血样品对检测结果有显著影响。

3．当质控窗与检测窗上均不出现紫红色条带时，应重新测试，如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品并与当地供货商联系。25整理ppt七、胶体金快速试剂实物26整理pptHIV检测中的保密的认识HIV检测前后咨询中获得的隐私HIV检测结果与专业人员的讨论在各种场合中对受检者的讨论（包括会议）档案记录与保存受检者，家属，朋友和单位传报医院匿名检测系统能确保保密，但不利于医学管理27整理ppt初筛结果处理---初筛（-）出具“HIV抗体阴性”报告初筛（+）可出具“HIV抗体待复检”的报告，但不能出具阳性报告。---送复检填写复检检测单，两人签字重新采集受检者的血样原样和新样连同送样单HIV筛查实验室

确认实验室筛查实验室复检做好检测前后咨询28整理ppt样品筛查检测一阴一阳均阳性反应阴性报告送初筛实验室进行复检重复检测均阴性反应阳性反应原有试剂＋另一种筛查试剂筛查试剂阴性反应检测点筛查试验流程图29整理ppt重复检测---职责HIV筛查实验室或HIV确认实验室

[筛查实验室拟作复检，加强自我质量控制]---试剂选择：两种不同原理或厂家品种：酶联免疫试剂快速检测试剂

30整理ppt重复检测结果处理---复检（-）出具“HIV抗体阴性”报告复检（+）可出具“HIV抗体待复查”的报告，但不能出具阳性报告。---送确认填写复查送样单，两人签字原样或新样连同送样单送确认实验室31整理ppt确认实验---职责确认实验室---检测方法免疫印迹实验（WB）线性免疫实验（LIA）免疫荧光实验（IFA）32整理ppt确认结果解释1.