il-17a、il-10、ifn-在炎症性肠病患者中的表达及意义

il-17a、il-10、ifn-在炎症性肠病患者中的表达及意义

th7是cd4-t细胞亚组，具有分泌il-17a的特点。它对促进免疫反应起到了重要作用，并在慢性炎症和自身免疫疾病中发挥了重要作用。本研究主要从缓解期炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,IBD)患者局部组织及外周血检测IL-17A的变化,并探讨其与IL-10水平是否存在相关性,进而探讨Th1、Th2、Th17细胞在IBD发病中的作用。1数据和方法1.1患者性别、年龄及诊断标准收集2007年10月—2008年4月于山东大学齐鲁医院消化内科住院患者及内镜室行肠镜检查处于缓解期的IBD患者57例,其中溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,UC)46例,男20例,女26例;年龄21~53岁,平均年龄39.7岁;Sutherland疾病活动指数≤2分。Crohn病(Crohndisease,CD)12例,男5例,女7例;年龄18~49岁,平均年龄37.1岁;简化CDAI≤4分,为缓解期患者。正常对照组为20名行肠镜检查为阴性的健康志愿者,年龄、性别比例与IBD组差异无统计学意义(P>0.05)。诊断标准依据:2007年中华医学会消化病学分会制定的中国IBD诊断治疗规范的共识意见,使用5-氨基水杨酸(5-ASA)于缓解期维持治疗。排除标准:尚使用激素的缓解期IBD患者;诊断不明确的各种肠炎;患有严重心、肝、肺、肾疾病;不能耐受结肠镜检查者;拒绝取活组织检查者或采静脉血者。1.2uz、il-17a、il-10及ifn-elisa试验剂免疫组织化学试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司,IL-17A抗体购于SantaCruz公司,IL-17A、IL-10及IFN-γELISA试剂盒购于Bioscience公司。1.3方法1.3.1l-17a抗体检测采用0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液抗原修复,高压锅热修复。IL-17A抗体浓度为1:100,4℃湿盒孵育48h。DAB显色,苏木精对比染色,梯度乙醇脱水,二甲苯透明后封片。空白对照以PBS代替一抗。结果判定:以胞质出现黄色、棕黄色颗粒或染色者为阳性。1.3.2elisa测定采集清晨空腹静脉血,离心后分离血清,置-80℃冰箱中保存,同批检测。ELISA操作步骤严格按照所购试剂盒说明书进行,在450nm波长及处测吸光度值A450。用标准物浓度与A450值计算出标准曲线的直线回归方程,将样品的A450值代入方程式求出样品浓度。1.4统计处理应用SPSS13.0统计软件包进行分析,数据以表示,采用t检验。以α=0.05作为检验水准。2结果2.1cd组的阳性细胞的分布CD、UC组淋巴细胞胞质均出现IL-17A阳性染色,UC组阳性细胞主要存在于上皮的固有层淋巴细胞中,呈棕黄色,分布于腺体的周围,CD组的阳性细胞肠壁全层可见,在各层中的分布未见明显区别(图1)。正常对照组肠黏膜全层均未见阳性染色。2.2血清中的17a、il-10和ifn2.2.1u和cd对血清il-17a表达的影响正常对照组血清中未检测到IL-17A,UC和CD组血清IL-17A水平明显升高,CD组平均水平较UC组高,但差异均无统计学意义(P>0.05,表1)。2.2.2两组不同时点左方差及正常对照组比较CD组IL-10表达水平高于UC组及正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),UC组与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05,见表1)。2.2.3ifn-蛋白CD组、UC组血清中IFN-γ的水平与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05,见表1)。3联合用药对il-17a表达的影响IBD是一类病因未明的胃肠道慢性复发性炎症性疾病,包括UC和CD。在欧洲,其发病率为(100~150)/10万,IBD发病高峰年龄在20~40岁,近年报道的病例明显增多。虽然,IBD的确切病因仍不清楚,一种被普遍接受的假说是环境因素作用于遗传易感者,在肠道的正常菌群的参与下,启动了肠道免疫及非免疫系统,最终导致免疫反应和炎症过程,引起肠道黏膜过度炎症反应,介导肠道损伤。传统观点根据分泌细胞因子的不同,通常把辅助性T细胞(Thelper,Th)分为Th1和Th2两个亚群,Th1和Th2在免疫过程中相互调节并相互制约。最近有学者在对2种自身免疫性疾病动物模型的实验性自身免疫性脑炎和胶原诱导关节炎的研究过程中发现了一类新的T细胞亚群——Th17细胞,能够通过分泌IL-17A诱导严重的自身免疫反应,缺失Th17能防止或减轻自身免疫性脑脊髓炎的进展,并且在多种自身免疫性疾病,包括类风湿性关节炎、多发性硬化及哮喘等患者的血清及组织中IL-17高表达。已有研究证实,在活动期IBD患者中,IL-17A的表达增加,并且与疾病的严重程度呈正相关。本研究发现,缓解期的IBD患者,UC和CD组结肠黏膜活组织中IL-17A高表达,而在正常对照组结肠黏膜活组织中未检测到IL-17A的表达,提示在IBD患者结肠局部浸润的淋巴细胞中可能有Th17细胞的存在,同时也在血清中也检测到IL-17A,考虑Th17可能在IBD患者的全身免疫中也发挥着作用。在正常状态下,体内的促炎因子与抑炎因子处于动态平衡,二者相互制约,从而维持机体内环境的稳定。IL-10主要由Th2细胞分泌,通过抑制巨噬细胞和单核细胞的抗原递呈功能,并下调Th1细胞IFN-γ的分泌,发挥其抗炎作用。本研究发现在缓解期IBD患者中IL-10水平上调,可能是机体对炎症反应的代偿机制。同时有研究亦发现:IL-10敲基因鼠可以诱导实验性结肠炎,同时UC患者肠黏膜局部及T细胞中IL-10表达明显增加,IL-10水平的增高为一种保护因素。本研究同时发现IFN-γ表达在缓解期IBD患者与对照组相比差异无统计学意义,可能是因为使用5-ASA作为缓解期维持治疗造成的,而同为促炎因子的IL-17A在IBD患