小柴胡片质量标准的薄层色谱定性鉴别

小柴胡片质量标准的薄层色谱定性鉴别

小柴胡汤是东汉张仲景的《伤寒论》。它由柴胡、黄甘草、党参、甘草和半夏组成。用于外感病、邪犯少阳症,症见寒热往来、胸胁苦满、食欲不振、心烦喜呕、口苦咽干等症。目前,小柴胡片的质量标准中有用薄层色谱法(TLC)鉴别黄芩和甘草。为了更好地控制小柴胡片的质量,保证用药安全有效,本试验对方中的柴胡、党参两味中药分别进行了薄层色谱定性鉴别,现报告如下。1材料和机器1.1试剂与仪器小柴胡片(广东环球制药有限公司,批号:110301);柴胡对照药材(中国药品生物制品检定所,批号:0992-0301);党参对照药材(中国药品生物制品检定所,批号:121057-200303);乙醇(新乡市三伟消毒试剂有限公司,分析纯);乙酸乙酯(天津市风船化学试剂科技有限公司,分析纯);丁酮(天津市科密欧化学试剂有限公司,分析纯);甲酸(天津市东丽区天大化学试剂厂,分析纯);正丁醇(北京北化精细化学品有限责任公司,分析纯);甲醇(天津市科密欧化学试剂有限公司,分析纯);D101大孔吸附树脂(上海科兴商贸有限公司);聚酰胺(上海金瑞化工产品有限公司)。1.2仪器和检测仪器HH-2电子恒温水浴锅(苏州威尔实验用品有限公司);CP114分析天平(奥豪斯仪器有限公司);硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂)。2方法和结果2.1柴胡tcl识别2.1.1对照药材溶液取柴胡对照药材1g,加水适量,煎煮1.5h,滤过,滤液浓缩至约10ml,加在聚酰胺柱(100~200目,4g,内径2cm,湿法装柱)上,分别用水100ml和50%乙醇150ml洗脱,收集50%乙醇洗脱液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。2.1.2供试品溶液的制备取小柴胡片2片,研细,加水20ml,搅拌使溶解,离心,取上清液,加在聚酰胺柱(100~200目,8g,内径2.5cm,湿法装柱)上,分别用水、20%乙醇、50%乙醇各100ml洗脱,收集50%乙醇洗脱液,蒸干残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。2.1.3缺乏正比溶液取自制缺柴胡的小柴胡片阴性样品2片,研细,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。2.1.4硫酸乙酯-甲醇法吸取供试品溶液、阴性对照溶液4μl与对照药材溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(12∶2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点(图1),阴性对照液色谱相应的位置无此斑点。2.2小柴胡图像的tcl识别2.2.1对照药材溶液的制备取党参对照药材粉末1g,加甲醇25ml,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水15ml使溶解,通过D101型大孔吸附树脂(内径为2.5cm,柱高为10cm),用水50ml洗脱,弃去水液,再用50%乙醇50ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,制成对照药材溶液。2.2.2试验溶液2.2.3缺乏基本评价溶液取自制缺党参的小柴胡片阴性样品2片,研细,按“2.2.1”项下的制备方法制成阴性对照溶液。2.2.4硫酸乙酯-正丁醇法吸取供试品溶液、阴性对照溶液4μl与对照药材溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-乙酸乙酯-水(7∶1∶1∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在100℃加热至斑点显色清晰,置日光灯下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点(图2),阴性对照液无此斑点。3小柴胡片tlc鉴别在柴胡的TLC鉴别中,本试验曾采用5%香草醛盐酸溶液显色,结果供试品溶液中斑点显色不明显。当改用5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液喷雾,热风吹至显色时,供试品溶液中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色清晰斑点,效果较好。在党参的TLC鉴别中,本文参照文献方法分别以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶0.5)、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(20∶4∶0.5)、甲苯-丙酮(9∶1)为展开剂,但展开效果均不理想。通过考察选择正丁醇-冰醋酸-乙酸乙酯-水(7∶1∶1∶0.5)为展开剂,结果显示,斑点均匀,展开分离效果较好。小柴胡片中的柴胡为方中君药,柴胡性味苦,微寒,归肝胆实经,有驱散退热、疏肝解郁、升阳举气之功效,用于治疗取小柴胡片2片,研细,按2.2.1项下的制备方法制成供试品溶液。寒热往来,胸满肋痛,口苦耳聋,头痛目眩、镇