高效液相色谱法同时测定肉中五种磺胺类药物残留

高效液相色谱法同时测定肉中五种磺胺类药物残留

氨基磺酸是一种抗感染药物，具有杀菌效果，因此在饲料中经常添加。但是,过量的药物残留会损害人体健康,因此各国对兽药在动物性食品中的残留量都有严格规定。目前,常用的检测方法为HPLC法。我们在参考有关文献的基础上,采用反相高效液相色谱法,同时测定肉中五种磺胺类药物残留,获得了较满意的结果。1实验部分1.1主要试剂及标准品仪器:Agilent-1100高效液相色谱仪(配DAD-紫外检测器)、匀浆机、旋转蒸发仪、离心机、震荡器、超声波发生器和涡流混匀器等。主要试剂:磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧基嘧啶、磺胺喹恶啉,五种磺胺标准品纯度大于99%;乙腈、正己烷和无水硫酸钠为分析纯。1.2条件11.2.1柱法的色度KromasilC84.6×250mm。1.2.2流量相甲醇+乙腈+2%乙酸=9+18+73。1.2.3相流速度1.0ml/min。1.2.4检测波长270nm。1.2.5柱温25℃。1.3标准溶液的配制精确称取适量的磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧基嘧啶、磺胺甲恶唑,磺胺二甲氧基嘧啶和磺胺喹恶啉标准物,用乙腈配成100μg/ml的标准储备液,保存在4℃冰箱内,每次实验前根据需要用流动相稀释成混合标准工作液。1.4乙腈的制备肉品切块后,制成肉糜。准确称取5g样品,加入10g无水硫酸钠,25ml乙腈,均质2min,而后在离心机上以3000r/min离心5min。取出乙腈于50ml分液漏斗中,加入25ml用乙腈饱和的正几烷,震荡5min,静止分层后下层液移入圆底烧瓶中。上面离心后的残渣加入25ml乙腈,超生30s,再以5000r/min离心5min,取出乙腈后放入上面所用的50ml分液漏斗中,震荡5min后,下层液移入圆底烧瓶中,与上次乙腈液合并。乙腈提取液在50℃下旋转蒸干,残余物用2ml流动相移出,加入1ml用乙腈饱和的正几烷,以5000r/min离心5min,取下层乙腈液20μL进行HPLC分析。1.55-磺胺类药物的hplc质量分析2结果和讨论2.1线性回归分析吸取100μg/ml的五种磺胺类药物标准储备液,用流动相稀释成0.1～2μg/ml范围内的系列标准溶液,在上述色谱条件下分别进样20μl。以峰高为纵坐标,以注入的标准品质量浓度C(μg/ml)为横坐标,进行线性回归分析,相关系数计算结果列于表1中。结果表明,五种磺胺类药物在0.1～2μg/ml范围内有着良好的线性关系。2.2标准曲线的建立选定一个不含磺胺类药物的肉样,称9份,每份5g,在其加入一定量的磺胺类药物标准混合溶液,而后做前处理,最终体积2ml,分别进20μl做色谱分析,试验结果见表2。计算结果显示本方法在0.1～2μg/ml范围内有着良好的回收率,五种磺胺类药物的回收率从85.5%～96.6%,符合痕量分析检测要求。2.3混合液的精密度选择一猪肉样品,在其中加入一定量的磺胺类药物标准混合溶液,混匀后称6份,每份5g,而后做前处理,并分别进行HPLC分析,检测结果列于表3,精密度亦令人满意。2.4样品测定采用本方法,我们挑选了一块鸡肉和一块猪肉样品,做前处理并进行20μl分析,结果见表4。2.5流动成本行为对于一般性肉类样品,采用本方法都能满足检测要求,但是个别样品会出现杂峰干扰的存在,导致假阳性结果。在这种情况下,可通过改变流动相配比增加保留时间进行定性或采用固相萃取技术对样品做净化处理。前处理中使用正己烷萃取的主要目的是去除样品中脂肪等杂质的干扰,提高检