各省PCR上岗证考试题库文档资料

各省PCR上岗证考试题库⼀、选择题（共20题，每题2分）

1、PCR技术扩增DNA，需要的条件是(A)①⽬目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥

2、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为（D）A、0.3-1mmol/LB、0.5-1mmol/LC、0.3-2mmol/LD、0.5-2mmol/L

3、多重PCR需要的引物对为（D）A、一对引物B、半对引物C、两对引物D、多对引物

4、PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，其特异性决定因素为（B）A、模板B、引物C、dNTP

5、在PCR反应中，下列哪项可以引起⾮靶序列的扩增的扩增(C)A、TaqDNA聚合酶加量过多B、引物加量过多C、A、B都可D、缓冲液中镁离⼦含量过⾼

6、PCR技术的发明⼈是（A）A、MullisB、史蒂文.沙夫C、兰德尔.才木

7、PCR产物短期存放可在（A）保存。A、4℃B、常温C、-80℃D、高温

8、PCR产物长期储存最好置于（D）。A、4℃B、常温C、16℃D、-20℃

9、PCR的基本反应过程包括（A）A、变性、退火、延伸B、变性、延伸C、变性、退火

10、在实际工作中，基因扩增实验室污染类型包括(D)A、扩增产物的污染B、天然基因组DNA的污染C、试剂污染和标本间交叉污染D、A、B、C都可能

11、PCR技术于哪⼀年发明（A）A、1983B、1971C、1987D、1993

12、TaqDNA聚合酶酶促反应最快最适温度为（C）A、30-45℃B、50-55℃C、70-75℃D、80-85℃

13、以下哪种物质在PCR反应中不需要（D）A、TaqDNA聚合酶B、dNTPsC、镁离子D、RNA酶

14、PCR检测中，经过n个循环的扩增，拷贝数将增加（C）A、nB、2nC、2nD、n2

15、PCR基因扩增仪最关键的部分是（A）A、温度控制系统B、荧光检测系统C、软件系统D、热盖

16、以下哪项不是临床PCR实验室设计的一般原则（A）A、各区合并B、注意风向C、因地制宜D、方便工作

17、PCR实验室一般包括(D)A、试剂准备区B、标本制备区C、扩增区和产物分析区D、A、B、C都含

18、PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（D）。A、白细胞DNAB、病毒蛋白质C、血浆抗体D、病毒核酸

19、如果反应体系中加入模板DNA分子100个，则经过30个循环后，DNA分子的数量将达到（D）个。A、100×30B、100×30×2C、100×30²D、100×2³º

20、PCR扩增产物的分析方法主要有（D）A、凝胶电泳分析法B、点杂交法C、荧光探针定量PCR法D、A、B、C都是

二、判断题（共20题，每题2分）

1、PCR引物设计的目的是在扩增特异性和扩增效率间间取得平衡。（√）

2、在PCR反应中，dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作为DNA合成的原料。（√）

3、DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的⽅法破坏氢键，使模板DNA解旋。（√）

4、PCR反应中，复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成。（√）

5、PCR与细胞内DNA复制相⽐所需要酶的最适温度较⾼。（√）

6、PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等。（√）

7、PCR技术需在体内进行。（×）

8、PCR反应体系中的缓冲液相当于细胞中的体液。（√）

9、核酸的复制是由5＇——→3＇方向进行的。（√）

10、配对的碱基总是A与T和G与C。（√）

11、HBsAg转阴性后一段时间才出现可检测的HBsAb，此段间隔期称之为“窗口期”。（√）

12、市面上多数试剂用淬灭基团Q基团和报告基团R基团来标记荧光定量PCR（√）

13、PCR反应体系中Mg2+的作用是促进TaqDNA聚合酶活性。（√）

14、若标本中含有蛋⽩变性剂（如甲醛），PH、离⼦强度、Mg2+等有较⼤改变都会影响Taq酶活性。（√）

15、每个子代DNA分子中均保留⼀条亲代DNA链和一条新合成的DNA链，这种复制方式称之为半保留复制。（√）

16、发生溶血的标本对PCR结果没影响。（×）

17、“平台效应”是描述PCR后期循环产物对数累积趋于饱和。（√）

18、逆转录聚合酶链式反应（reversetranscription-PCR，RT-PCR）就是在应用PCR方法检测RNA病毒时，以RNA为模板，在逆转录酶的作用下形成cDNA链，然后以cDNA为模板进行正常的PCR循环扩增。（√）

19、在定量PCR中，72℃这一步对荧光探针的结合有影响，故去除，实际上55℃仍可充分延伸，完成扩增复制。（√）

20、PCR可应用于遗传病、肿瘤及病原体检测三大方面（√）

三、简答(共两题，每题10分)

1、PCR技术

答：PCR技术是⽤⼀对寡聚核苷酸作为引物（要点1：2分），通过⾼温变性、低温退⽕、中温延伸（要点2：5分）这⼀周期的多次循环，使特异的DNA⽚段数量指数倍数增加（要点3：3分）。

2、简述定量PCR检测操作的全过程。

答：标本的采集，保存（2分）——→样品前处理（2分）——→待样品充分裂解后点样上机反应（2分）——→反应结束后观察结果（2分）——→发报告（2分）

PCR上岗证培训——历年考试知识点汇总在我国新冠病毒疫情防控进入常态化的今天，核酸检测也越来越普及越来越重要。6月8日，国家卫健委发布了《关于加快推进新冠病毒核酸检测的实施意见》，文件提出：二级以上医院应具备开展新冠病毒核酸检测能力。这就意味着全国大量医疗机构需建设PCR实验室。那么建设PCR实验室过程中最主要一点就是人员资质培训，实验室成员必须经过相关培训并通过考核。现将历年理论考试知识点总结如下，供大家参考。Q

PCR实验室建设、认证审核依据：A《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医政发〔2010〕194号）、《医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则》Q

临床基因扩增检验实验室技术审核流程包括：A申报、资料审核、现场验收、整改、通知审核结果。Q

临床基因扩增实验中质量保证：A室内质控（重复性）和室间质评（准确度）。Q

PCR技术的发明人是：AKaryMullis。Q

核酸包括两种类型：A脱氧核糖核酸（ATCG）和核糖核酸（AUCG）。Q

根据遗传中心法则，遗传信息的流动方向为ADNA⇔RNA⇒蛋白质。Q

临床基因扩增检验实验室一般包括四个分区：A试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。Q

核酸样品含量可根据（

）处波长的吸光度算出。A260nmQ

核酸样品纯度可根据（

）处波长的吸光度比值算出。A260/280nmQ

cfDNA是指A细胞游离DNA，ctDNA是指循环肿瘤DNA。Q:PCR检测用的试剂应当

A:经国家药监局批准。Q:医疗废物垃圾袋结扎采用

A:“鹅口颈”套扎结扎。Q:锐器盒容积达到总体积的（

）时需要更换。

A:3/4Q:PCR中，全血样本采集一般

A:使用EDTA或枸橼酸盐抗凝，不使用肝素抗凝。Q:Taqman探针两端标记有

A:荧光基团和淬灭基团。Q:新冠病毒核酸检测应该

A:在Ⅱ级生物安全实验室开展，同时采用生物安全Ⅲ级实验室的个人防护。Q:PCR基本反应过程包括

A:变性、退火、延伸。Q:核酸的基本结构单位是：

A:核苷酸，其组成包括碱基、核糖或脱氧核糖和磷酸。Q:DNA双链中

A:碱基A-T之间以两个氢键相连，G-C以三个氢键相连。Q:PCR试剂盒中

A:加入尿苷糖基酶（UNG）具有防“污染”作用。

DNA变性是指在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中其他共价键不受影响。

自制室内质控品时，应对质控品的均匀性和稳定性进行评价。

PCR的测定点在PCR的指数扩增期，非平台期。

临床检验中的随机误差通常表现为质控物测定结果的SD增大。

核酸溶于水，不溶于乙醇等有机溶剂。

核酸的解链温度（Tm）与G+C含量有关，G+C含量愈大，Tm愈高。

以次氯酸为主要成分的清洁剂在配制后24小时内使用。

质量管理体系要素包括质量方针、质量目标和质量指标。

核酸的复制是由5’-3’方向进行。

DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。

Q:核酸提取纯化中，RNase潜在污染源是：

A:实验室环境、实验用品如吸头、离心管等、实验人员的手。

Q:生物安全水平的级别共分为

A:四个等级。

Q:PCR出现基线漂移的可能原因有：

A:蒸发、探针水解、相邻荧光通道干扰等。

Q:常用RNase抑制剂是

A:DEPC（焦碳酸二乙酯）。

Q:Sanger测序体系与PCR反应体系的主要区别是

A:前者含有：ddNTP

Q:mRNA约占总RNA的

A:5%

Q:核酸检测对标本采集容器的要求是：

A:密闭、一次性、无DNase和RNase、无菌。

Q:肝素是TaqDNA聚合酶活性的

A:强抑制剂。

Q:PCR采用内标可识别扩增检测的

A:假阴性、假阳性。

Q:Taqman荧光探针常用的荧光基团是：

A:FAM,TET,VIC,HEX。

Q

新检测系统（

）情况下应进行性能验证。A常规应用前、常规使用期间（定期）、更换试剂、仪器、校准品溯源性改变、仪器搬迁、设施、环境严重失控等Q

PCR室内质控品的浓度设置：A弱阳性质控（浓度为检测限2-4倍），阳性质控，阴性质控品。Q

生物安全柜、超净工作台、通风橱三者的区别：AQ

阳性室内质控品出现假阴性失控的常见原因分析：A（1）核酸提取中的随机误差，如核酸提取中的丢失，有机溶剂的去除不彻底，标本中扩增抑制物的残留，所用耗材如离心管有PCR抑制物等。（2）仪器的问题，如扩增仪孔间温度的不一致性，孔内温度与所示温度的不一致性等。

（3）试剂的问