生物型乳牙根管充填材料的组织病理学研究

生物型乳牙根管充填材料的组织病理学研究

根管治疗是治疗感染根管和根尖周围疾病的最有效方法。由于乳牙是暂时性器官,到替牙期,乳牙牙根发生生理性吸收、脱落,恒牙萌出;因此对乳牙根管充填材料的要求是能随乳牙牙根吸收,且不影响继承恒牙发育和萌出的糊剂。临床传统应用氧化锌丁香油(zincoxideeugenol,ZOE)糊剂,为化学制剂。有研究表明根管内的ZOE糊剂不与牙根同步吸收。因此,人们一直在寻找生物制剂,用于乳牙的根管充填;如骨形成蛋白,但有不足之处。壳聚糖(Chitosan,CS)是甲壳素最重要的衍生物。甲壳素广泛存在于海洋动物的甲壳中,是由葡萄糖结构单元组成与纤维素具有相似结构的均一多糖,具有良好的生物相容性和独特的生物学活性。由于甲壳素分子中乙酰基的存在,不利于应用,现多用的是其脱乙酰化物即羧甲基脱乙酰壳多糖,又名壳聚糖。其具有成膜性、可纺性,并具有促进伤口愈合、骨形成等功能,且可被人体吸收利用。壳聚糖已被广泛应用在食品、生化、医药卫生、美容保健等领域。在口腔医学领域,近年来陆续将其应用于牙周病及龋病防治、拔牙术后干槽症预防和骨腔填充等方面,均显示其具有良好的生物学性能,但用作根充糊剂的报道不多。本研究旨在观察壳聚糖糊剂用于乳牙根管充填后的作用效果和反应,为研制生物型乳牙根管充填材料提供实验依据。实验材料的充填1. 壳聚糖根管充填根端微渗漏实验实验参照Rohde等的方法,通过比较根端微渗漏值,评价壳聚糖糊剂、壳聚糖硫酸钡糊剂(chitosan-bariumsulfate,CS-BS)和ZOE糊剂的根尖封闭性能。根充糊剂的制备:壳聚糖糊剂:将壳聚糖粉(北京环境研究所陈祖辉提供)与灭菌注射用水按1:1调成糊剂。壳聚糖硫酸钡糊剂:壳聚糖与硫酸钡粉4:1重量混合,再与灭菌注射用水1:1调成糊剂。ZOE糊剂:将氧化锌粉与丁香油液按临床常规调成根充糊剂。选择门诊患者因重度牙周炎或正畸需要而拔除的正常单根离体牙60颗。要求牙体组织完整、牙根发育完全,无畸形、损伤、龋坏及其他病变。将60颗离体牙随机分为4组,每组15颗;均于釉牙骨质线上1~2mm处去除牙冠,拔除根髓、测量并记录工作长度,用15~40#H扩大针扩锉根管,并可见根尖孔处15#扩大针通过,3%过氧化氢液及0.9%氯化钠溶液反复交替冲洗根管,棉捻吸干后常规充填根管。壳聚糖组、壳聚糖硫酸钡组采用输送充填器根充;ZOE组用螺旋根充器充填根管;各组根管口用磷酸锌粘固粉封闭。空白对照组根管内不填入任何根充物,根管口用磷酸锌粘固粉封闭。其中壳聚糖硫酸钡组、ZOE组牙根拍X线片证实根充良好;壳聚糖组肉眼确认根充到底(壳聚糖X线透射)。牙根放入内有无菌水棉球的密闭玻璃器皿中,置37℃、8d;待根充材料充分凝固,取出吹干,在距根尖孔2mm处根面向冠方均匀涂覆2层指甲油,再将牙根垂直悬吊于1%亚甲蓝染液中,深度约为牙根长度的3/4,浸泡6d;取出牙根,流水冲洗、吹干,用金刚砂车针在牙齿的唇舌面或近远中面沿长轴各磨一沟槽,用凿子将牙凿成两半,保证剖面通过根尖孔。30倍解剖镜测量染料自根尖至冠方的渗透距离,数值用SPSS10.0软件单因素方差分析,q检验比较组间差异。操作过程由1人完成。2壳聚糖乳牙根管充填动物实验根充糊剂的制备:无菌壳聚糖硫酸钡糊剂和氧化锌丁香油糊剂的配制同实验1。动物实验:选用中国农业科学院动物研究所提供的小型猪8头,雌雄各半,5月龄,体重15~18kg。选择上、下颌乳前磨牙为实验牙,共32颗。小型猪按1ml/kg体重耳后注射复方赛胺酮全身麻醉。放置开口器,随机选择一侧乳前磨牙16颗为实验组,行根管充填术,用壳聚糖硫酸钡糊剂作根充糊剂;对侧同名牙为对照组16颗,用氧化锌丁香油糊剂充填根管。均以磷酸锌水门汀封闭窝洞。术后拍X线片确认根充到底。组织学检查:分别于术后1、2、4、8周,每次处死2只动物。切取含实验牙的上下颌骨块,固定、脱钙、常规石腊包埋、切片、HE染色,光镜下观察根尖周的组织学变化。结果1.染料微渗漏深度壳聚糖糊剂组、壳聚糖硫酸钡糊剂组与氧化锌丁香油糊剂组染料微渗漏深度无显著差异(P>0.05)。3组根充材料与空白对照组相比均有极显著性差异(P<0.01)(表1)。2.根周膜的吸收所有小型猪术后饮食正常,无一头生病、死亡。①壳聚糖硫酸钡糊剂根充1周根管内可见根充物,1例超充,所有病例根周膜内可见较多的慢性炎症细胞浸润。术后2周根管内根充物完整,3例根尖孔由根周膜组织封闭,血管扩张、充血,炎症减轻;另1例超充,超充糊剂部分吸收。4周时根周膜血管扩张充血,仍有少量慢性炎症细胞浸润,超充糊剂完全吸收。8周时根管内均可见充填物,根周膜结构接近正常。②ZOE糊剂根充1周根管内可见根充物,2例超充,所有病例根周膜水肿、慢性炎症细胞浸润,血管扩张。术后2周恰填2例根周膜内血管扩张充血,少量炎症细胞浸润,超充2例超充物周围肉芽组织形成,慢性炎症细胞浸润。术后4周根管内可见根充物,根尖周组织根周膜血管扩张充血、慢性炎症细胞浸润,并可见根尖周组织长入根尖孔,根管内壁少量牙本质吸收。8周根周膜均有少量炎症细胞浸润,超充物未吸收,周围肉芽组织包裹,根周膜明显增宽,吞噬细胞不明显。综上,壳聚糖硫酸钡糊剂乳牙根管充填引起的根尖周炎症反应轻,超充物对周围组织刺激小、吸收快;ZOE糊剂根充引起的尖周炎症反应较重,超充物对周围组织刺激大,氧化锌颗粒被包裹、吸收缓慢。壳聚糖糊剂与zeo糊剂的进一步发展ZOE糊剂是最常用的根管充填糊剂,物理性能稳定,疗效较为肯定。本研究将其作为对照,探讨壳聚糖糊剂的生物相容性和对根管的封闭作用。根管充填是根管治疗术的最后一步。根管充填的目的就是严密封闭根管系统和防止根尖区微渗漏。作为理想的根管充填材料应具备良好的组织相容性及严密封闭根尖孔的能力。本实验所采用的染料法比较3种根管充填材料的根尖封闭性能,方法简便可靠。实验证明,壳聚糖糊剂与壳聚糖硫酸钡糊剂充填根管的根端微渗漏值略低于ZOE糊剂,从数值看根端封闭性能优于ZOE糊剂,但统计学分析无显著性差异。我们的研究结果表明壳聚糖作为根充材料,在封闭性能方面并不亚于传统的ZOE糊剂;但仍应对壳聚糖糊剂调制工艺加以改进,以提高密封性能。用于乳牙的根管充填材料除应具备一般的根管充填材料性能要求外,还应对继承恒牙胚无害,不影响恒牙的萌出,且根充材料能与乳牙根同步吸收,后一点至关重要。曾有ZOE糊剂根管充填的动物实验表明,根周组织有慢性炎症反应且材料吸收缓慢。Mani等临床观察中,有60%病例糊剂吸收慢于牙根吸收。超充组有66.7%病例在根充6个月后超充部分仍未见吸收。另外当牙根吸收乳牙脱落后仍有ZOE颗粒存留于牙槽骨内。说明它不能与乳牙根同步吸收。本实验中超充的病例在根充2个月后均未见糊剂吸收。超充的ZOE可能会引起异物反应,并游走到牙根之间,有可能对乳恒牙的替换造成影响。本实验病理切片可见超填的ZOE被纤维组织包裹,且未见明显的吞噬细胞。说明机体对ZOE主要表现为异物反应。选用壳聚糖硫酸钡糊剂作为根管充填材料是由于硫酸钡可阻射X线,治疗过程中可用X线观察根管充填情况。壳聚糖硫酸钡糊剂超充后,除有少量硫酸钡颗粒,壳聚糖本身能很快被吸收,根尖周的炎症反应也较轻。且临床操作更容易,特别对于根尖未形成的宽大根管,根管充填时明显较