离体蛙心灌流省名师优质课获奖课件市赛课一等奖课件

离体蛙心灌流第1页【目标要求】1、学习斯氏离体蛙心灌流法。2、观察离子及药品等对离体心脏活动影响。第2页【基本原理】心脏正常节律性活动需要一个适宜内环境（如Na＋，K＋，Ca2＋等浓度及百分比、pH值和温度），内环境改变直接影响到心脏正常节律性活动。将失去神经支配离体心脏保持于适宜理化环境中（任氏液Ringersolution），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。第3页

离子对心脏活动影响改变任氏液组成成份，离体心脏活动就会受到影响。K+参加心肌细胞复极化和自律细胞4期自动去极化过程，其改变不但取决于细胞内外K+浓度梯度，还与细胞膜对K+通透性相关，所以其影响是多方面。Ca2+对Na+内流存在竞争抑制作用，称膜屏障作用，对静息电位无影响。[Ca2+]o↑，可使心肌细胞兴奋性降低，传导减慢，收缩力增强。第4页在体心脏受交感神经和迷走神经双重支配交感神经末梢释放去甲肾上腺素，与心肌细胞β受体结合，使心肌收缩力加强，传导速度加紧，心率加紧；阻断剂心得安迷走神经末梢释放乙酰胆碱，与心肌细胞M受体结合，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢；阻断剂阿托品第5页【动物、器材与试剂】蟾蜍或蛙、纱布、毁髓针、眼科镊、手术剪、眼科剪、蛙板、蛙钉、玻璃分针、滴管、细棉线、蛙心夹、铁支架、万能滑轮、小烧杯、斯氏蛙心套管、双凹夹、套管夹、张力换能器、生物信号计算机采集系统任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1/10000肾上腺素、1/10000乙酰胆碱、阿托品、300U/ml肝素。第6页【方法与步骤】1、仪器准备2、离体蛙心制备3、连接试验装置4、试验观察第7页1、仪器准备打开计算机生物信号采集系统，选择试验项目-循环试验-离体蛙心灌流。熟悉试验标识使用。参考：生理模拟试验软件-离子和药品对离体蛙心影响第8页2、离体蛙心制备（斯氏蛙心插管法）在左主动脉下方穿线，靠上端结扎，作插管时牵引用在主动脉干下方穿线，在动脉圆锥上方打一活结备用（用以结扎和固定插管）。取蛙或蟾蜍，双毁髓后背位置于蛙板上，暴露心脏。仔细识别心脏周围大血管。第9页左手提起左主动脉上方结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉管壁剪一斜口（注意要剪破血管内膜，每次心缩时有血自切口涌出，但不要把血管剪断，剪口位置视套管尖端长度与心脏大小而定）。选择大小适宜斯氏蛙心套管，盛入少许任氏液（内加一滴肝素溶液，套管内2－3cm高度）。左手用眼科镊提起切口缘，右手将注有任氏液斯氏套管插入动脉干内，然后左手持左侧血管分支上结扎线向外拉，右手将蛙心套管送入动脉圆锥。第10页当套管尖端抵达动脉圆锥基部时，应将套管稍向后退（因主动脉内有螺旋瓣会妨碍插管前进），并将套管尾端稍向右主动脉方向及腹侧面倾斜，使插管尖端向动脉圆锥背部后下方及心尖方向推进，在心室收缩时经主动脉瓣进入心室。第11页注意插管不可插得过深，插管斜面应朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。此时可见血液冲入套管，并使液面随心脏搏动而上下移动，表明操作成功（不然需退回并重新插入）用滴管吸去套管中血液，换新鲜任氏液。第12页稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入套管用双结扎紧（不得翻液），再将结线固定在套管小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方血管。看清静脉窦位置，在心脏下方绕一线，将左右肺静脉及前后腔静脉一起结扎（注意切勿损坏静脉窦）。轻轻提起套管和心脏，于静脉窦下方剪断有牵连组织，仅保留静脉窦与心脏联络，使心脏离体。第13页用任氏液重复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致（1.5－2cm，或在套管下1/3处结一线作为标志，每次换任氏液时使液面与此线相平），即可进行试验。第14页其它方法技巧用蛙心夹提起心尖，使心室与动脉圆锥约呈100°-200°钝角，然后当心室缩紧时把套管平直往心室方向推进。当感觉套管进入心室后再把心尖放平，随即将套管稍向心室推进，调整适当位置，可见套管内液面随心跳而升降。第15页3、连接试验装置将套管固定在支架上，用蛙心夹在心舒期夹住少许心尖部肌肉（不要夹多，以免夹破心室而漏液）。将蛙心夹上系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。勿使灌流液滴到传感器上。调整统计仪器上收缩曲线幅度适中。第16页4、试验观察1)统计正常心搏曲线。2)改用0.65%NaCl溶液灌流，并作好加药标识，观察心搏改变。待曲线出现显著改变时，马上吸去套管中灌流液，同时做好冲洗标识，并用新鲜任氏液清洗2－3次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线基线，同时保持灌流液面一致（下同）。第17页3)向套管内加2－6滴5%NaCl溶液，作好加药标识，观察心搏曲线频率及振幅改变。当曲线出现显著改变时，应马上吸去套管中灌流液，并做好冲洗标识，快速用新鲜任氏液清洗2－3次，待心搏恢复正常。4)向套管内加1－2滴2%CaCl2溶液，作好加药记号，观察心搏曲线频率及振幅改变。标识、冲洗至心搏恢复正常5)向套管内加入1－2滴1%KCl溶液，统计心搏曲线改变。当心搏曲线改变时，同法更换灌流液，待心搏恢复正常。第18页6)同法统计套管中加入1－2滴肾上腺素溶液(1/10000)后心搏曲线改变。7)同法统计套管中加入1－2滴乙酰胆碱溶液(1/10000)后心搏曲线改变。8)同法统计套管中先加入阿托品后再加1－2滴乙酰胆碱溶液(1/10000)后心搏曲线改变。第19页【注意事项】1、制备离体心脏标本时，勿伤及静脉窦。2、蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖，防止因夹难过脏而造成漏液。3、每一观察项目都应先描记一段正常曲线，然后再加药并统计其效应。加药时应在心跳曲线上给予标识，方便观察分析。4、各种滴管应分开，不可混用。5、在试验过程中，插管内灌流液面高度应保持恒定；仪器各种参数一经调好，应不再变动。第20页6、标本制备好后，若心脏功效状态不好（不搏动），可向插管内滴加1～2滴2%CaCl2或1：10000肾上腺素，以促进（起动）心脏搏动。在试验程序安排上也可考虑促进和抑制心脏搏动药品交换使用。7、给药后若效果不显著，可再适量滴加，并亲密注意药品剂量添加后试验结果。给药量必须适度，加药出现改变后，就应马上更换任氏液，不然会造成不可挽回后果，尤其是K＋稍有过量，即可造成难以恢复心脏停跳。8、谨防灌流液沿丝线流入张力传感器内而损坏其电子元件。第21页试验结果试验项目收缩强度心率处理前处理后处理前处理后0.65%NaCl2%CaCl21%KCl1：10000E1：10000Ach阿托品+Ach第22页第23页第24页第25页CaCl2灌流[Ca2+]o↑Ca2+内流↑[Ca2+]i↑兴奋-收缩耦联↑收缩力↑第26页第27页第28页KCl灌流[K+]o↑AP平台期缩短Ca2+内流↓兴奋-收缩耦联↓收缩力↓第29页第30页第31页1:10000E灌流4期If、ICaT通道↑4期自动去极速度↑自律性↑心率↑与心肌β1受体结合Ca2+内流↑肌浆网释放Ca2+↑兴奋-收缩耦联↑收缩力↑cAMP第32页第33页第34页1:10000Ach灌流与心肌M受体结合K+外流↑,Ca2+内流↓E-C耦联↓收缩力↓最大复极电位↑4期K+外流↑

自律性↓心率↓[Ca2+]i↓第35页【思索题】1、心脏灌流说明心肌哪些生理特征？2、用试验说明内环境相对恒定主要意义。3、试分析任氏液中适量钠离子、钙离子与钾离子对心肌作用。4、为何强调试验中保持灌流液面恒定?灌流量对心脏活动会有什么影响？5、试想，活机体在心交感神经兴奋或心迷走神经兴奋时对心脏会有什么影响？第36页试