核酸的降解与核苷酸代谢【-】课件

9核酸的降解与核苷酸代谢Chapter9MetabolismofNucleotides

9核酸的降解与核苷酸代谢Chapter9Metabol1本章重点与难点重点：了解核酸的酶促降解及核苷酸合成与分解途径特点，掌握嘌呤环、嘧啶环的原子来源；了解核苷酸水解酶类，特别是限制性内切酶作用的特点。难点：嘌呤核苷酸与嘧啶核苷酸合成途径异同点，不同种类的生物分解嘌呤碱的终产物。本章重点与难点2第一节核酸的降解与核酸酶类第一节核酸的降解与核酸酶类3一、核酸的降解食物核蛋白蛋白质核酸（RNA及DNA）胃酸核苷酸胰核酸酶核苷磷酸胰、肠核苷酸酶碱基戊糖核苷酶一、核酸的降解食物核蛋白蛋白质核酸（RNA及DNA）胃酸核苷41、核酸酶的定义及分类核酸酶是指所有可以水解核酸的酶依据底物不同分类DNA酶(deoxyribonuclease,DNase)：专一降解DNA。RNA酶(ribonuclease,RNase)：专一降解RNA。依据切割部位不同核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性核酸内切酶。核酸外切酶：5´→3´或3´→5´核酸外切酶。二、核酸酶（Nuclease）1、核酸酶的定义及分类二、核酸酶（Nuclease）5参与DNA的合成与修复及RNA合成后的剪接等重要基因复制和基因表达过程负责清除多余的、结构和功能异常的核酸，同时也可以清除侵入细胞的外源性核酸在消化液中降解食物中的核酸以利吸收体外重组DNA技术中的重要工具酶生物体内的核酸酶负责细胞内外催化核酸的降解2、核酸酶的功能参与DNA的合成与修复及RNA合成后的剪接等重要基因复制和基6第二节核苷酸的代谢第二节核苷酸的代谢7一、核苷酸代谢的动态单核苷酸库氨基酸葡萄糖磷酸核苷酸的从头合成核酸的降解核苷酸的降解产物的再利用核苷酸的降解核酸的合成一、核苷酸代谢的动态单核苷酸库氨基酸葡萄糖磷酸核苷酸的从8嘌呤核苷酸的结构GMPAMP二、嘌呤核苷酸的分解代谢

MetabolismofPurineNucleotides嘌呤核苷酸的结构GMPAMP二、嘌呤核苷酸的分解代谢

Met9(一）嘌呤核苷酸的合成代谢从头合成途径(denovosynthesispathway)利用氨基酸等作为原料合成补救合成途径(salvagesynthesispathway)利用体内游离的碱基或核苷合成

(一）嘌呤核苷酸的合成代谢从头合成途径10嘌呤核苷酸的从头合成途径是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳单位及二氧化碳等简单物质为原料，经过一系列酶促反应，合成嘌呤核苷酸的途径。肝是体内从头合成嘌呤核苷酸的主要器官，其次是小肠和胸腺，而脑、骨髓则无法进行此合成途径。1、嘌呤核苷酸的从头合成定义合成部位嘌呤核苷酸的从头合成途径是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳单位及11嘌呤碱合成的元素来源CO2天冬氨酸甲酰基（一碳单位）甘氨酸甲酰基（一碳单位）谷氨酰胺（酰胺基）嘌呤碱合成的元素来源CO2天冬氨酸甲酰基甘氨酸甲酰基谷氨酰胺12核酸的降解与核苷酸代谢【-】课件13合成原料：天冬氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、一碳基团、CO2、磷酸核糖。合成特点：磷酸核糖为起始物，逐步加原料合成嘌呤环，形成重要中间产物IMP（次黄嘌呤核苷酸），再由它转变为AMP和GMP。合成原料：天冬氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、一碳基团、CO2、磷酸14过程1.IMP的合成2.AMP和GMP的生成过程1.IMP的合成2.AMP和GMP的生成15R-5-P（5-磷酸核糖）ATPAMPPRPP合成酶PP-1-R-5-P（5’－磷酸核糖－1’－焦磷酸）PRPP在谷氨酰胺、甘氨酸、一碳单位、二氧化碳及天冬氨酸的逐步参与下IMPAMPGMPH2N-1-R-5´-P（5´-磷酸核糖胺）谷氨酰胺谷氨酸酰胺转移酶R-5-PATPAMPPRPP合成酶PP-1-R-5-P在谷161）IMP的合成过程①磷酸核糖酰胺转移酶②GAR合成酶③转甲酰基酶④FGAM合成酶⑤AIR合成酶1）IMP的合成过程①磷酸核糖酰胺转移酶17目录目录18IMP生成总反应过程目录IMP生成总反应过程目录19①腺苷酸代琥珀酸合成酶③IMP脱氢酶②腺苷酸代琥珀酸裂解酶④GMP合成酶2）AMP和GMP的生成①腺苷酸代琥珀酸合成酶③IMP脱氢酶2）AMP和GM20AMPADPATPADPATP激酶ADPATP激酶GMPGDPGTPADPATP激酶ADPATP激酶AMPADPATPADPATP激酶ADPATP激酶GMPGD21•嘌呤核苷酸是在磷酸核糖分子上逐步合成的。•IMP的合成需5个ATP，6个高能磷酸键。AMP或GMP的合成又需1个ATP。嘌呤核苷酸从头合成特点•嘌呤核苷酸是在磷酸核糖分子上逐步合成的。嘌呤核苷酸从头合22从头合成的调节R-5-PATPPRPP合成酶PRPP酰胺转移酶PRAIMP腺苷酸代琥珀酸AMPADPATPXMPGMPGDPGTP++_____IMP腺苷酸代琥珀酸XMPAMPADPATPGMPGDPGTPATPGTP__++调节方式：反馈调节和交叉调节从头合成的调节R-5-PATPPRPP合成酶PRPP酰胺转移23利用体内游离的嘌呤或嘌呤核苷，经过简单的反应，合成嘌呤核苷酸的过程，称为补救合成（或重新利用）途径。2、嘌呤核苷酸的补救合成途径定义利用体内游离的嘌呤或嘌呤核苷，经过简单的反应，合成嘌呤核苷24腺嘌呤磷酸核糖转移酶(adeninephosphoribosyltransferase,APRT)次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guaninephosphoribosyltransferase,HGPRT)腺苷激酶(adenosinekinase)参与补救合成的酶腺嘌呤磷酸核糖转移酶参与补救合成的酶25腺嘌呤+

PRPPAMP+PPiAPRT次黄嘌呤+PRPPIMP+PPiHGPRT鸟嘌呤+

PRPPHGPRTGMP+PPi合成过程腺嘌呤核苷腺苷激酶ATPADPAMP腺嘌呤+PRPPAMP+PPiAPRT次黄嘌呤+26补救合成的生理意义补救合成节省从头合成时的能量和一些氨基酸的消耗。体内某些组织器官，如脑、骨髓等只能进行补救合成。补救合成的生理意义补救合成节省从头合成时的能量和一些氨基酸的273、嘌呤核苷酸的相互转变IMPAMP腺苷酸代琥珀酸XMPGMPNH3腺苷酸脱氨酶鸟苷酸还原酶NADPH+H+NADP+NH33、嘌呤核苷酸的相互转变IMPAMP腺苷酸代XMPGMPNH284、脱氧核糖核苷酸的生成在核苷二磷酸水平上进行（N代表A、G、U、C等碱基）4、脱氧核糖核苷酸的生成在核苷二磷酸水平上进行29dNDP

+

ATP激酶dNTP+ADP二磷酸脱氧核苷NDPdNDP二磷酸核糖核苷NADP+NADPH+H+核糖核苷酸还原酶，Mg2+还原型硫氧化还原蛋白-(SH)2氧化型硫氧化还原蛋白SS硫氧化还原蛋白还原酶（FAD）脱氧核苷酸的生成dNDP+ATP激酶dNTP+ADP二磷酸脱氧核苷305、嘌呤核苷酸的抗代谢物嘌呤核苷酸的抗代谢物是一些嘌呤、氨基酸或叶酸等的类似物。嘌呤类似物氨基酸类似物叶酸类似物6-巯基嘌呤6-巯基鸟嘌呤8-氮杂鸟嘌呤等氮杂丝氨酸等氨蝶呤氨甲蝶呤等5、嘌呤核苷酸的抗代谢物嘌呤核苷酸的抗代谢物是一些嘌呤、氨31能够抑制嘌呤核苷酸合成的一些抗代谢药物，通常是属于嘌呤、氨基酸或叶酸的类似物，主要通过对代谢酶的竞争性抑制作用，来干扰或抑制嘌呤核苷酸的合成，因而具有抗肿瘤治疗作用。在临床上应用较多的嘌呤核苷酸类似物主要是6-巯基嘌呤（6-MP）。6-MP的化学结构与次黄嘌呤类似，因而可以抑制IMP转变为AMP或GMP，从而干扰嘌呤核苷酸的合成能够抑制嘌呤核苷酸合成的一些抗代谢药物，通常是属于嘌呤、氨基32次黄嘌呤(H)6-巯基嘌呤(6-MP)6-巯基嘌呤的结构次黄嘌呤6-巯基嘌呤6-巯基嘌呤的结构33甲酰甘氨酰胺核苷酸（FGAR）PRPP谷氨酰胺（Gln）=PRA甘氨酰胺核苷酸（GAR）==甲酰甘氨脒核苷酸（FGAM）5-氨基异咪唑-4-甲酰胺核苷酸（AICAR）=5-甲酰胺基咪唑-4-甲酰胺核苷酸（FAICAR）IMP次黄嘌呤（H）PRPPPPi=AMP=PRPPPPi=腺嘌呤（A）GMP==PRPPPPi鸟嘌呤(G)6-MP6-MP6-MP6-MP6-MP6-MP氮杂丝氨酸氮杂丝氨酸氮杂丝氨酸MTXMTX目录甲酰甘氨酰PRPP谷氨酰胺=PRA甘氨酰胺==甲酰甘氨5-氨34核酸的降解与核苷酸代谢【-】课件35（二）嘌呤核苷酸的分解代谢核苷酸核苷核苷酸酶Pi核苷磷酸化酶碱基1-磷酸核糖（二）嘌呤核苷酸的分解代谢核苷酸核苷核苷酸酶Pi核苷磷酸化酶36嘌呤碱的最终代谢产物AMPGMPH（次黄嘌呤）GX（黄嘌呤）黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶嘌呤碱的最终AMPGMPHGX黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶37核酸的降解与核苷酸代谢【-】课件38不同种类的生物分解嘌呤碱的能力不同，因此，终产物也不同。排尿酸动物：灵长类、鸟类、昆虫、排尿酸爬虫类排尿囊素动物：哺乳动物（灵长类除外）、腹足类排尿囊酸动物：硬骨鱼类排尿素动物：大多数鱼类、两栖类某些低等动物能将尿素进一步分解成NH3和CO2排出。植物分解嘌呤的途径与动物相似，产生各种中间产物（尿囊素、尿囊酸、尿素、NH3）。微生物分解嘌呤类物质，生成NH3、CO2及有机酸（甲酸、乙酸、乳酸、等）。不同种类的生物分解嘌呤碱的能力不同，因此，终产物也不同。39核酸的降解与核苷酸代谢【-】课件40痛风症患者由于体内嘌呤核苷酸分解代谢异常，可致血中尿酸水平升高，以尿酸钠晶体沉积于软骨、关节、软组织及肾脏，临床上表现为皮下结节，关节疼痛等。

痛风症的治疗机制痛风症患者由于体内嘌呤核苷酸分解代谢异常，可致血中尿酸水平升41鸟嘌呤次黄嘌呤黄嘌呤尿酸黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶别嘌呤醇鸟嘌呤次黄嘌呤黄嘌呤尿酸黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶别嘌呤醇42嘧啶核苷酸的结构三、嘧啶核苷酸的代谢嘧啶核苷酸的结构三、嘧啶核苷酸的代谢43从头合成途径补救合成途径（一）嘧啶核苷酸的合成代谢从头合成途径（一）嘧啶核苷酸的合成代谢441、嘧啶核苷酸的从头合成主要是肝细胞胞液嘧啶核苷酸的从头合成是指利用磷酸核糖、氨基酸、一碳单位及二氧化碳等简单物质为原料，经过一系列酶促反应，合成嘧啶核苷酸的途径。定义合成部位1、嘧啶核苷酸的从头合成主要是肝细胞胞液嘧啶核苷酸的从头合成45嘧啶合成的元素来源氨基甲酰磷酸天冬氨酸嘧啶合成的元素来源氨基甲天冬氨酸46合成原料：谷氨酰胺、天冬氨酸、CO2、磷酸核糖。合成特点：用原料先合成嘧啶环，然后再与磷酸核糖连接生成嘧啶核苷酸。合成原料：谷氨酰胺、天冬氨酸、CO2、磷酸核糖。47合成过程1）尿嘧啶核苷酸的合成谷氨酰胺+

HCO3-氨基甲酰磷酸合成酶II2ATP2ADP+Pi谷氨酸+氨基甲酰磷酸合成过程1）尿嘧啶核苷酸的合成谷氨酰胺+HCO3-氨基48核酸的降解与核苷酸代谢【-】课件49核酸的降解与核苷酸代谢【-】课件502）胞嘧啶核苷酸的合成ATPADP尿苷酸激酶UDP二磷酸核苷激酶ATPADPUTPCTP合成酶谷氨酰胺ATP谷氨酸ADP+Pi2）胞嘧啶核苷酸的合成ATPADP尿苷酸激酶UDP二磷酸513）dTMP或TMP的生成TMP合酶N5,N10-甲烯FH4FH2FH2还原酶FH4NADP+NADPH+H+dUMP脱氧胸苷一磷酸dTMPUDP脱氧核苷酸还原酶dUDPCTPCDPdCDPdCMP3）dTMP或TMP的生成TMP合酶N5,N10-甲烯F52从头合成的调节---ATP+CO2+谷氨酰胺氨基甲酰磷酸UMP氨基甲酸天冬氨酸UTPCTP天冬氨酸嘌呤核苷酸ATP+5-磷酸核糖嘧啶核苷酸PRPP-从头合成的调节---ATP+CO2+谷氨酰胺氨基甲酰磷532、嘧啶核苷酸的补救合成嘧啶+

PRPP磷酸嘧啶核苷+PPi嘧啶磷酸核糖转移酶尿嘧啶核苷+ATP尿苷激酶UMP+ADP胸腺嘧啶核苷+ATP胸苷激酶TMP+ADP2、嘧啶核苷酸的补救合成嘧啶+PRPP磷酸嘧啶核苷+543、嘧啶核苷酸的抗代谢物嘧啶类似物胸腺嘧啶(T)5-氟尿嘧啶(5-FU)3、嘧啶核苷酸的抗代谢物嘧啶类似物胸腺嘧啶(T)5-氟尿嘧啶55某些改变了核糖结构的核苷类似物某些改变了核糖结构的核苷类似物56能够抑制嘧啶核苷酸合成的抗代谢药物也是一些嘧啶核苷酸的类似物，通过对酶的竞争性抑制而干扰或抑制嘧啶核苷酸的合成。主要的抗代谢药物是5-氟尿嘧啶（5-FU）。5-FU在体内可转变为F-dUMP，其结构与dUMP相似，可竞争性抑制胸苷酸合成酶的活性，从而抑制胸苷酸的合成。

能够抑制嘧啶核苷酸合成的抗代谢药物也是一些嘧啶核苷酸的类似物57UMPUTPCTPCDPdCDPUDPdUDPdUMPdTMP氮杂丝氨酸阿糖胞苷氨甲碟呤氮杂丝氨酸UMPUTPCTPCDPdCDPUDPdUDPdUMPdTM58（二）嘧啶核苷酸的分解代谢嘧啶碱1-磷酸核糖嘧啶核苷酸核苷核苷酸酶PPi核苷磷酸化酶（二）嘧啶核苷酸的分解代谢嘧啶碱1-磷酸核糖嘧啶核苷酸核苷59胞嘧啶NH3尿嘧啶二氢尿嘧啶H2OCO2+NH3β-丙氨酸胸腺嘧啶β-脲基异丁酸β-氨基异丁酸H2O丙二酸单酰CoA乙酰CoATCA肝尿素甲基丙二酸单酰CoA琥珀酰CoATCA糖异生胞嘧啶NH3尿嘧啶二氢尿嘧啶H2OCO2+NH3β-60qES(aoCR*9nBP%7lzO$6kyM#4ixLZ3hvJX1fuIW0esGU-drFT)bpDR(aoCQ&8mAO%7lzN!5jxM#4iwKY2guJX1ftHV+dsGU-cqES(apDR*9nBP%8mAO$6kyM#5jxLZ3hvJY2guIW0esGV+drFT)bpES(aoCQ&8mBP%7lzN!5kBP%7lzO$6kyM#4iwLZ3hvJX1fuIW0esGU-crFT)bpDR*aoCQ&8mAO$7lzN!5jxL#4iwKY2guIX1ftHV+drGU-cqES(aoDR*9nBP%7mAO$6kyM#4jxLZ3hvJX2guIW0esGV+drFT)bpDS(aoCQ&8mBP%7lzN!5jyM#4iwKY2hvJX1ftHV+esGU-cqES)bpDR*9nBP&8mAO$6kyN!5jxLZ3hvKY2guIW0etHV+drFT)bqES(aoCQ&9nBP%7lzN$6kyM#4iwKZ3hvJX1ftIW0esGU-cqFT)bpDR*9oCQ&8mAO$6lzN!5jxLZ4iwKY2guIW1ftHV+drFU-cqES(aoCR*9nBP%7lAO$6kyM#4ixLZ3hvJX1guIW0esGU+drFT)bpDR(aoCQ&8mAP%7lzN!5jxM#4iwKY2gvJX1ftHV+dsGU-cqES(bpDR*9nBP%8mAO$6kyM!5jxLZ3hvJY2guIW0esHV+drFT)bpES(aoCQ&8nBP%7lzN!6kyM#4iwKY3hvJX1ftHW0esGU-cqET)bpDR*9nCQ&8mAO$6kzN!5jxLZ3iwKY2guIW0ftHV+drFT-cqES(aoCQ*9nBP%7lzO$6kyM#4iwLZ3hvJX1fuIW0esGU-drFT)bpDR*aoCQ&8mAO%7lzN!5jxL#4iwKY2guJX1ftHV+drGU-cqES(apDR*9nBP%7mAO$6kyM#5jxLZ3hvJX2guIW0esGV+drFT)bpDS(aoCQ&8mBP%7lzN!5kyM#4iwKY2hvJX1ftHV0esGU-cqES)bpDR*9nBQ&8mAO$6kyN!5jxLZ3hwKY2guIW0etHV+drFT)cqES(aoCQ&9nBP%7lzN$9nBP%7mAO$6kyM#4jxLZ3hvJX2guIW0esGU+drFT)bpDS(aoCQ&8mAP%7lzN!5jyM#4iwKY2gvJX1ftHV+esGU-cqES(bpDR*9nBP&8mAO$6kyM!5jxLZ3hvKY2guIW0etHV+drFT)bqES(aoCQ&9nBP%7lzN!6kyM#4iwKZ3hvJX1ftHW0esGU-cqFT)bpDR*9nCQ&8mAO$6lzN!5jxLZ3iwKY2guIW1ftHV+drFT-cqES(aoCR*9nBP%7lAO$6kyM#4ixLZ3hvJX1guIW0esGU-drFT)bpDR(aoCQ&8mAO%7lzN!5jxM#4iwKY2guJX1ftHV+dsGU-cqES(apDR*9nBP%8mAO$6kyM#5jxLZ3hvJY2guIW0esHV+drFT)bpES(aoCQ&8nBP%7lzN!5kyM#4iwKY3hvJX1ftHV0esGU-cqET)bpDR*9nBQ&8mAO$6kzN!5jxLZ3hwKY2guIW0ftHV+drFT)cqES(aoCQ*9nBP%7lzO$6kyM#4iwLZ3hvJX1fuIW0esGU-crFT)bpDR*aoCQ&8mAO$7lzN!5jxL#4iwKY2guIX1ftHV+drGU-cqES(aoDR*9nBP%7mAO$6kyM#4jxLZ3hvJX2guIW0esGV+drFT)bpDS(aoCQ&8mBP%7lzN!5jyM#4iwKY2hvJX1ftHV+esGU-cqES)bpDR*9nBP&8mAO$9oCQ&8mAO$6lzN!5jxLZ4iwKY2guIW1ftHV+drFU-cqES(aoDR*9nBP%7lAO$6kyM#4jxLZ3hvJX1guIW0esGU+drFT)bpDR(aoCQ&8mAP%7lzN!5jxM#4iwKY2gvJX1ftHV+dsGU-cqES(bpDR*9nBP%8mAO$6kyM!5jxLZ3hvKY2guIW0esHV+drFT)bqES(aoCQ&8nBP%7lzN!6kyM#4iwKY3hvJX1ftHW0esGU-cqET)bpDR*9nCQ&8mAO$6kzN!5jxLZ3iwKY2guIW0ftHV+drFT-cqES(aoCR*9nBP%7lzO$6kyM#4ixLZ3hvJX1fuIW0esGU-drFT)bpDR*aoCQ&8mAO%7lzN!5jxL#4iwKY2guJX1ftHV+drGU-cqES(apDR*9nBP%7mAO$6kyM#5jxLZ3hvJY2guIW0esGV+drFT)bpES(aoCQ&8mBP%7lzN!5kyM#4iwKY2hvJX1ftHV0esGU-cqES)bpDR*9nBQ)bpDR*9oCQ&8mAO$7lzN!5jxL#4iwKY2guIX1ftHV+drGU-cqES(aoDR*9nBP%7mAO$6kyM#4jxLZ3hvJX2guIW0esGU+drFT)bpDS(aoCQ&8mAP%7lzN!5jyM#4iwKY2gvJX1ftHV+esGU-cqES)bpDR*9nBP&8mAO$6kyN!5jxLZ3hvKY2guIW0etHV+drFT)bqES(aoCQ&9nBP%7lzN!6kyM#4iwKZ3hvJX1ftHW0esGU-cqFT)bpDR*9nCQ&8mAO$6lzN!5jxLZ4iwKY2guIW1ftHV+drFU-cqES(aoCR*9nBP%7lAO$6kyM#4ixLZ3hvJX1guIW0esGU-drFT)bpDR(aoCQ&8mAO%7lzN!5jxM#4iwKY2guJX1ftHV+dsGU-cqES(bpDR*9nBP%8mAR*9nCQ&8mAO$6kzN!5jxLZ3iwKY2guIW0ftHV+drFT-cqES(aoCQ*9nBP%7lzO$6kyM#4iwLZ3hvJX1fuIW0esGU-crFT)bpDR*aoCQ&8mAO%7lzN!5jxL#4iwKY2guJX1ftHV+drGU-cqES(apDR*9nBP%7mAO$6kyM#5jxLZ3hvJX2guIW0esGV+drFT)bpDS(aoCQ&8mBP%7lzN!5jyM#4iwKY2hvJX1ftHV0esGU-cqES)bpDR*9nBQ&8mAO$6kyN!5jxLZ3hwKY2guIW0etHV+drFT)cqES(aoCQ&9nBP%7lzN$6kyM#4iwKZ3hvJX1ftIW0esGU-cqFT)bpDR*9oCQ&8mAO$7lzN!5jxLZ4iwKY2jyM#4iwKY2gvJX1ftHV+esGU-cqES(bpDR*9nBP&8mAO$6kyM!5jxLZ3hvKY2guIW0esHV+drFT)bqES(aoCQ&9nBP%7lzN!6kyM#4iwKZ3hvJX1ftHW0esGU-cqFT)bpDR*9nCQ&8mAO$6lzN!5jxLZ3iwKY2guIW1ftHV+drFT-cqES(aoCR*9nBP%7lzO$6kyM#4ixLZ3hvJX1guIW0esGU-drFT)bpDR(aoCQ&8mAO%7lzN!5jxM#4iwKY2guJX1fwKY3hvJX1ftHV0esGU-cqET)bpDR*9nBQ&8mAO$6kzN!5jxLZ3hwKY2guIW0ftHV+drFT-cqES(aoCQ*9nBP%7lzO$6kyM#4iwLZ3hvJX1fuIW0esGU-crFT)bpDR*aoCQ&8mAO$7lzN!5jxL#4lzN!5jyM#4iwKY2hvJX1ftHV0esGU-cqES)bpDR*9nBQ&8mAO$6kyN!5jxLZ3hwKY2guIW0etHV+drFT)cqES(aoCQ&9nBP%7lzN$6kyM#4iwKZ3hvJX1ftIW0esGU-cqFT)bpDR*9oCQ&8mAO$7lzN!5jxLZ4iwKY2guIX1ftHV+drFU-cqES(aoDR*9nBP%7lAO$6kyM#4jxLZ3hvJX1guIW0esGU+drFT)bpDR(aoCQ&8mAP%7lzN!5jxM#4iwKY2gvJX4iwKZ3hvJX1ftHW0esGU-cqFT)bpDR*9nCQ&8mAO$6lzN!5jxLZ3iwKY2guIW1ftHV+drFT-cqES(aoCR*9nBP%7lzO$6kyM#4ixLZ3hvJX1fuIW0esGU-drFW0esHV+drFT)bpES(aoCQ&8nBP%7lzN!5kyM#4iwKY3hvJX1ftHV0esGU-cqET)bpDR*9nBQ&8mAO$6kzN!5jxLZ3hwKY2guIW0ftHV+drFT-cqES(aoCQ*9nBP%