丹参葡萄糖注射液的急性毒性及局部用药毒性研究

丹参葡萄糖注射液的急性毒性及局部用药毒性研究

丹参具有活血通络、消除淤血、镇痛、净化心脏疾病的作用。广泛用于心血管疾病的治疗。随着临床广泛应用,对丹参不良反应的文献报道日益增多:如过敏性休克、心律失常、心衰、药物性肝炎,静脉滴注过快,出现恶心、呕吐、头晕、血压下降等反应。为此我们对丹参进行了系统的长期毒性研究,发现静注过快有一过性血压下降等表现;对Beagle犬[0.8g/(kg·d),i.v]和大鼠[12.5g/(kg·d),i.v或i.p]应用6个月体重增长明显减慢,凝血时间延长,AST明显升高,光镜下显示有不同程度的肝脂肪变性及肝细胞水肿,但停药21d基本恢复正常,提示丹参对肝脏等有一定可逆性毒性反应。但对于动物急性和局部应用毒性未见确切报道,故本文采用不同动物、不同方法、不同给药途径,进一步观察其在动物体内急性毒性反应及局部用药毒性,为拟定人用安全剂量提供依据,现将结果报告如下。1材料表面1.1生药/瓶配制丹参,安徽华源生物制药有限公司,批号:990907,含量:临床使用的制剂及规格量是16g/250ml,作为试验剂量及浓度均不适宜,故由厂家提供浓缩液为640g生药/瓶(100ml)。配制方法:实验前将640g生药/瓶(100ml)丹参液,用5%葡萄糖水稀释成含3.2g/ml的溶液,以10mol/LNaOH调节pH6.5~7.0,供实验用。卵蛋白购于上海伯澳生物科技公司,批号:990817,临用前用生理盐水制成0.5%溶液。1.2实验动物及场ICR小鼠18~20g,南京医科大学实验动物中心,合格证号:苏动(质)97001;SD大鼠100~130g,中科院上海实验动物中心,合格证号:中科院动管会005号;家兔1.8~2.3kg,购自皖南医学院实验动物中心;豚鼠体重150~180g,购自上海市松江区松联实验动物场,合格证号:沪医动字第02-52-2号。保持室温(23±2)℃,相对湿度60%~65%,自然光照,自由进水,给药前禁食12h。颗粒饲料由皖南医学院动物中心提供。1.3统计方法采用孙瑞元教授等编制的DAS2.0软件,用Bliss法计算小鼠的LD50。2方法和结果2.1急性中毒试验2.1.1尾静脉用药后小鼠的急性毒性反应小鼠120只,雌雄各半,随机分成6组,经预试确定100%致死量丹参为35.6kg,依次按1∶0.9用5%葡萄糖水稀释(剂量见表1),6组小鼠分别一次性尾静脉注射给药,给药容量均为0.2ml/10g,在1min内注射完毕并开始记录死亡时间,用药后连续观察7d。记录逐日的小鼠毒性反应及死亡数。死亡小鼠进行尸体解剖,对病变器官进行病理组织学检查。结果发现致死剂量下,多数死亡动物在用药后10~60s内皮肤粘膜紫绀、躁动、呼吸急促、四肢瘫痪、呼吸停止而死亡,部分动物可迁延至3min内死亡,经系统尸解发现内脏血管明显扩张,腹腔广泛出血。用Bliss法计算小鼠的LD50=26.89g/kg,各组动物死亡数及计算结果见表1。2.1.2小鼠急性毒性反应及病理组织学检测小鼠100只,雌雄各半,随机分成5组,经预试找出100%致死量为45g/kg,依次按1∶0.9用5%葡萄糖水稀释(剂量见表2),5组小鼠分别一次性腹腔注射给药,给药容量均为0.2ml/10g。在1min内注射完毕并开始记录死亡时间,用药后连续观察7d。记录每日的小鼠毒性反应及死亡数。死亡小鼠进行尸体解剖,对病变器官进行病理组织学检查。结果死亡动物均在用药后1~2d内因呼吸停止而死亡。用Bliss法计算小鼠LD50=36.09g/kg,各组动物死亡数及计算结果见表2。2.1.3尾静脉用药后大鼠的急性毒性反应大鼠50只,雌雄各半,随机分成5组,经预试确定100%致死量为34.0g/kg,以此为最大剂量组,以下各组依次按1:0.9用5%葡萄水稀释,5组大鼠分别一次性尾静脉注射,给药容量均为1.0ml/100g,在1min内注射完毕并开始记录死亡时间,用药后连续观察7d,记录每日的大鼠毒性反应及死亡数。死亡大鼠进行尸体解剖,对病变器官进行病理组织学检查。结果大部分死亡动物在用药后10~90s内因呼吸停止而死亡,系统尸解发现内脏血管扩张,腹腔内广泛出血。用Bliss法计算大鼠的LD50=27.02g/kg,各组动物死亡数及计算结果见表3。2.1.4成人剂量及动物系数由表4可见,小鼠和大鼠尾静脉注射给药的LD50分别为26.89g/kg和27.02g/kg,按体重计算约为成人剂量的100倍;按动物系数计算,分别为成人量的11及14倍。小鼠腹腔注射的LD50大于静脉注射,提示腹腔给药吸收较慢,其毒性低于静脉注射。2.2局部毒性试验2.2.1红细胞凝集液的制备自家兔耳动脉取血20ml,置于烧瓶内,用玻璃棒轻轻搅动,除去纤维蛋白,取出血液,加等量0.9%NS,离心(1500转/min,10min),除去上清液;沉淀的红细胞再加0.9%NS清洗,离心。如此重复直至上清液透明。经离心沉淀(3000r/min,10min)后,按红细胞的容积0.9%NS配成2%的混悬液。取烤干试管7只,分别编号,依次加入6.4%丹参、5%葡萄糖水、2%红细胞悬液(见表5),摇匀,置于37℃保温箱中,分别于0.5、1、2、3h观察是否有溶血及凝集现象。结果丹参在3h内未见溶血及凝集现象,而蒸馏水组出现溶血。2.2.2不同剂量0.2.2不同次用药家兔8只,4只于一侧耳缘静脉注入连接含有5%葡萄糖注射器的头皮静脉针头,注入静脉后再将针头连接含有6.4%丹参输液器。静脉滴注丹参10ml,滴速约30滴/min(药液浓度及滴注速度均与临床相同)。另4只家兔按同样方法静滴等量5%葡萄糖水。每日1次,连续5d。末次用药24h后,观察静滴药液处向心端0~1、1~2、2~3cm处的血管及周围组织变化,并与5%葡萄糖水组对照。然后处死动物,在静滴药液处,分别按血流方向,每隔1cm取血管连同周围组织,共4处,用10%甲醛固定,以作组织学检查。结果丹参静脉滴注5d后,肉眼观察无充血、水肿,硬结和坏死;组织学检查未见间质内皮细胞浸润,血管内血栓形成、周围出血灶、扩张充血和组织坏死;提示丹参对血管无明显刺激作用。2.2.3单次肌注后大鼠血清中的利益变化豚鼠18只,随机分为6.4%丹参组、0.5%卵蛋白阳性对照组及5%葡萄糖水阴性对照组,分别在腿部肌注药液每只0.5ml,隔日1次,共3次。每组再分两批,第一批每组3只。在首次肌注后的第14d,在后脚掌外侧静脉,分别静注6.4g%丹参、0.5%卵蛋白溶液及5%葡萄糖水,剂量均为每只2ml,观察记录2h内有无抓鼻,竖毛,咳嗽,呼吸困难,痉挛,休克,大小便失禁,死亡等过敏症状。第二批在首次肌注后的第21d,将3组各余下的3只动物,用同样方法给药及进行观察记录。结果3次致敏后,于第14d和第21d静脉注射诱导发敏,丹参组及葡萄糖水组均未见过敏反应,而卵蛋白溶液组3只均出现咳嗽,呼吸困难,痉挛,休克,大小便失禁等严重过敏反应,全部动物死亡。3麻黄葡萄糖注射液不良反应发生情况3.1研究结果表明,大、小鼠静脉注射丹参的LD50分别为27.02g/kg和26.89g/kg,按动物系数计算,分别为成人量的11及14倍,提示本品毒性很小,临床使用较安全可靠。但我们发现,在致死剂量下,动物出现皮肤粘膜紫绀、躁动、呼吸急促、四肢瘫痪、呼吸停止,最终死亡,尸检发现内脏血管扩张,广泛出血,这与文献报道的结果一致。动物死亡的原因可能与短时间内体内血药浓度急剧升高,使血管扩张,而致血压快速下降;也可能与肝功能受损、凝血时间延长等有关。提示丹参的临床用量不能盲目