ecanrmp150全自动酶免疫仪稳定性评价

ecanrmp150全自动酶免疫仪稳定性评价

自动酶标仪在临床使用中越来越常见。传统的酶联免疫计算方法（elisa）逐渐被标准化和自动取代。我科自2005年2月购进瑞士TECAN公司的RMP150型全自动酶免仪,我们对该仪器的性能进行了全面的评价,并对加样系统运行两年后的准确性进行了校检比较,现报告如下。1材料和方法1.1各配套试剂RMP150型全自动酶免仪,瑞士TECAN公司生产。AbbottAXSYM及配套试剂,美国雅培公司生产。空白酶标微孔板条和乙肝五项检测试剂盒,北京万泰药业有限公司生产。乙型肝炎表面抗原(HbsAg)阴、阳性混合血清及35份标本均来自江苏省中医院临床病人。1.2方法1.2.1加样回收及变异度计算用电子天平称量8根加样针分别加样10μl和100μl蒸馏水的重量,每根加样针重复加样15次,计算其均值及变异度(CV)值。该仪器使用两年后用同样方法测定加样系统加样的准确性。1.2.2阅读方法读数系统的零点飘移、通道差、孔间差、精密度、线性评价参照文献方法进行。1.2.3残液量的测定取三块空白酶标微孔板(96孔板),先用电子天平称取重量,再分别用该仪器以蒸馏水洗涤5次后,分别称取重量,计算洗板后总的残液量及平均每孔的残液量。1.2.4阳性标本加样将HbsAg阳、阴性混合血清各分为3组,每组均为8管,以H表示阳性标本(阳性混合血清测定的吸光度在3.0以上),以L表示阴性标本,使每根加样针按H1、H2、H3、L1、L2、L3的顺序加样。实验结果以公式(L1-L3)/H×100%计算污染率。1.2.5测定五项指标AbbottAXSYM仪器对照试验35份标本,用全自动酶标仪和AbbottAXSYM测定乙肝五项指标,结果进行比较。2结果2.1样品系统的取样精度实验见表1、表2。2.2点飘移a值经测定TECANRMP150型全自动酶标仪的八个通道的零点飘移A值均在±0.003范围内波动;通道差极差值为0.009,孔间差为±0.005086;线性的回归方程y=0.9236x+0.0553,r=0.9999;精密度评价结果见表3。2.3清洁板的残余液量测量三块空白酶标微孔板用蒸馏水洗涤5次前后的重量及每孔残液量见表4。2.4样品和样品的交叉污染见表5。2.5比较abbottassm仪器的结果见表6。3交叉污染的检测仪器加样准确性是保证实验结果准确性的首要条件,我们用电子天平称量8根加样针分别加样10μl和100μl蒸馏水的重量,重复测定15次,结果表明该仪器的加样系统加样的准确性符合设计要求(仪器设计要求加样10μl的CV值<3%,加样100μl的CV值<0.5%)。仪器使用两年后用同样方法对仪器进行测定,结果仍符合要求(见表1、表2)。零点飘移是评价仪器在一定时间内零点吸光度的变化趋势,间接地反映了仪器内部检测系统在一定时间内处于工作状态下的稳定性,TECANRMP150仪器的八个通道的零点飘移A值在±0.003范围内波动,反应该仪器光学系统的稳定性较好;通道差是仪器的内部固有误差,是衡量酶标仪性能好坏的重要指标之一,其极差值越接近于零,通道差越小,说明同一样品在不同通道检测结果的一致性越好,该仪器的通道差极差值为0.009,孔间差值为±0.005086。同时这三个指标也能评价仪器的机械性能情况,如连续进板、检测、退出等,测定的入射光是否对准板孔中央,酶标板移动后位置是否准确等情况。检测结果表明该仪器的比色系统的内部电路部件、光学部件及机械部件性能良好。批内精密度是由20d中每天2批,每批2次之差经统计学处理后所得的结果;日内批间精密度由20d中每天2批测定结果均值之差经统计学处理后所得的结果;日间精密度表示20d中每天所测均值的标准差,反映了每日均值的离散度;总精密度则是对批内、批间和日间精密度进行加权统计的结果。本实验的该仪器的批内、日内批间、日间及总精密度小于等1.698%,能满足临床工作需要。线性评价是评价仪器的一个重要手段,可显示分析物浓度与分析系统响应的相关性,其线性越好、线性范围越广,则其检测的可报告范围也就越广,检测结果也就越准确。该仪器于492波长处检测甲基橙系列溶液,回归方程Y=0.9236X+0.0553,r=0.9999,反映仪器的线性响应较好。在ELISA法实验中洗板的好坏及洗板后残液量的多少直接影响了实验结果,决定了实验的成败。本仪器所特有的洗板机吸针插入反应孔底部两点吸样的方式,确保了洗板残液量少的特性。从表4结果可见,洗板残液量平均每孔小于0.4μl,该残液量对检测结果基本无影响。本次实验中的交叉污染实验设计,HbsAg阳、阴性混合血清各3组,每组8管,使仪器的8根加样针均能连续3次加高浓度样品(阳性混合血清的吸光度平均值为3.475)后,连续3次加低浓度样品(阴性混合血清的吸光度平均值勤为0.007),并且保证了每根加样加在同一排,洗板的顺序也同样由高浓度向低浓度。如此设计使实验不仅反映加样针所携带的标本和试剂交叉污染情况,也能反映洗板机探针引起的污染误差。本实验的交叉污染率在0.029%～0.802%内,为可接受的低水平。将TECANRMP150与AbbottAXSYM仪器对照试验,同时测定了35个临床标本的乙肝五项指标,总的符合率为96.57%,其中抗HBs和抗HBe分别有一个标本AbbottAXSYM测定为阳性而本仪器测定为阴性,抗HBc有4个标本AbbottAXSYM测定为阳性而本仪器测定为阴性。两仪器测定结果不相符的6个测试中有4个AbbottAXSYM测定值接近与参考值相近,分别为抗HBs为12mIU/mL(>10mIU/ml为阳性)、抗HBe为0.89S/CO(<1S/CO为阳性)、抗HBc有两个分别为0.91S/CO和0.82S/CO(<1S/CO为阳性),另2个抗HBc测试TECANRMP150仪测定结果是明显的假阴性。原因分析,一方面是由于ELISA方法本身的敏感性比AbbottAXSYM差;再者是国产