血液检测常见影响因素及处理方法

血液检测常见影响因素及处理方法

在免疫室进行肝酶、肝酶、抗毒酶和抗毒酶的特定检测。最常用的检测方法是酶联免疫吸附试验。该试验用已知抗原检测未知抗体,或用已知抗体检测未知抗原,虽然操作简便,但影响因素诸多,一个环节出现问题,都可能会导致检测的失败。现将酶联免疫吸附试验常见影响因素及处理方法总结如下。1试剂的因素1.1试剂的选择和使用对“证”证”的影响试剂的选择是保证血液检测质量的关键因素,要选购知名度高,质量有保证,具有“三证”的试剂,最好选用配套试剂。也可以和同行交流,其他实验室对某种试剂盒的实际使用效果,往往具有很强的说服力,因此应使用检测口碑好的试剂(可通过室间质评组织获得)。不使用过期试剂,不同批号试剂不能混用,同批号试剂盒的组分也不可混用。1.2试剂盒的质量保障1.2.1试剂的储存至关重要,试剂一到科室,即应立即放入冷藏冰箱,必须注意不得靠近冰箱后壁,以防试剂冻结,影响检测结果。1.2.2试剂供应商必须保障试剂在进入科室前运输储存的质量,试剂盒从出厂到用户手中,均要历经运输(如送检、检定、发货等)及运输中的储存环节,某一环节不当,均影响试剂盒的临床使用质量。去年我科有一段时间所做的表面抗原项目,今天阳性,同一份标本明天复检有可能是弱阳性甚至阴性,查找原因可能是这批试剂在进入科室前储存温度出现了问题,与试剂商联系更换新的批号试剂后,此现象消失。1.3假阴性的检测在临床实验室,试剂的准备一般不太注意,工作人员通常在试验时将试剂从冰箱中拿出来就用,其直接后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此酶联免疫吸附试验中,试剂准备最关键的是使试剂盒在使用前与室温平衡,以满足检测要求,一般检测前30min即应将试剂盒从冰箱中取出,检测时试剂盒可与室温平衡。2样品要素标本因素包括标本溶血、被污染、标本保存时间过长和标本凝固不全等。2.1血清蛋白的检测血红蛋白中含铁血红素有类过氧化物酶活性,因此以辣根过氧化物酶为标记的酶联免疫吸附试验测定中,如血清中血红蛋白浓度较高,很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的辣根过氧化物酶反应显色,造成假阳性。因此在采血过程中应注意,采集血液标本时应缓慢抽动,注射器插入生化管应让血液自动靠负压注入生化管,不能用手推注射器栓塞,以防标本溶血。处理方法:若轻微溶血影响还不大,若为中度或重度溶血,则必须与临床联系,重新抽取标本,并讲清楚正确采集血标本的重要性。并由有关部门定期培训临床护士怎样正确采集血液标本。2.2新鲜标本的保存菌体可能含有内源性过氧化物酶,可出现非特异性显色,因此宜用新鲜标本,如有特殊情况,应冰箱保存或冰冻保存,并应加盖保存。阳性结果应重抽血双孔复检。2.3新鲜标本的选择标本在冰箱中保存时间过长,可能造成污染或效价降低,可引起假阴性,因此应尽量用新鲜标本。冰冻标本应避免反复冻融,因冰冻标本的反复冻融产生的机械力对标本中的蛋白分子有破坏作用,可引起假阴性。2.4样品的离心标本凝固不全的血清中有部分纤维蛋白原,影响结果。有的工作人员着急赶时间,刚采集的标本就离心(虽然现在都采用促凝生化管),结果刚离心完血清还可以,但是在洗涤时,此孔血清呈果冻状,显然反应不完全。处理方法:标本采集后在37℃水浴30min后再离心,以3500转/min离心5min可获得满意标本。3操作因素3.1注意不可分批操作孵育前加样时间过长,漏加样本,酶试剂加入孔外,用滴瓶滴加试剂时加量不准等都可使试验结果不可靠。处理方法:(1)标本过多时,可分批操作,标本要轻拿轻放,防止标本溅出交叉感染;(2)加完样品封板前要仔细观察反应板,看是否有样品漏加,以便及时发现;(3)加酶试剂后可用吸水纸吸干孔外试剂;(4)使用滴瓶加试剂时,应垂直滴加,匀速滴加,以免速度过快有的孔中多加1滴试剂,建议采用微量加样器加试验中的所有组分;(5)加样器应定期校准,消毒,吸头要一次性使用,以免交叉污染。3.2孔内温度增加的影响及处理温育是最为关键、最容易出现问题的步骤;温育的时间、温度选择一般按照试剂盒说明进行,加完样本和试剂后微孔板放入水浴箱或温箱中,孔内温度从室温升至摄氏37℃需一定时间,若一放入就计时,就容易造成孵育时间不够,易致弱阳性标本检测不出。处理方法:(1)可采用适当延长几分钟时间(大约2min);(2)可把反应板封板后直接放入37℃水浴箱水中;(3)用37℃孵育箱将是不错的选择。3.3ph值的调节3.3.1洗涤液的配制,按照说明书要求1∶20稀释,看似很简单,但必须注意一些细节问题:(1)注意洗涤液是否有结晶析出,冬天洗涤液易结晶,如不注意很容易堵塞洗板机管路。处理方法:事先将洗涤液置37℃水温箱中预温一会再行配制就可解决。(2)要注意去离子水的pH值。处理方法:用0.1nNaOH调节pH值至7左右。3.3.2洗板有两种,即手工洗板和洗板机洗板。采取手工洗板,孔与孔之间液体易交叉;采取洗板机洗板时,洗液量不足导致洗板不彻底,针孔堵塞导致抽吸不完全,清洗效果差。处理方法:(1)手工洗板时,孔内洗液不能溢出,拍板时要垂直,但用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱落;(2)用洗板机洗板,洗涤液要新鲜配制,洗板机要经常检查冲洗头是否畅通,洗涤液瓶应定期彻底清洗,要定期检查整个管路,疏通管路,若针头被堵塞,可用注射器排除;(3)我科采用机洗5遍人工加洗1遍,效果较好;(4)洗板时,吸水纸不可重复使用;(5)洗完板时,应充分扣干反应孔,可用吸水纸包住反应板扣干。3.4显色3.5注意试验的连续性加入终止液后用酶标仪检测,酶标仪需预热15min~30min,因反应板加入A、B显色剂后在37℃放置30min,反应板底部会有水雾,检测时可出现假阳性,上机前一定要在吸水纸上吸干。在以上的操作过程中,要保持试验的连续性,有的工作人员在洗完板时,因故未能及时加A、B显色液,会对测定结果造成影响,因此要注意试验的连续性,这