种子生产快繁技术-种子生产快繁技术

《薯类种子生产技术》马铃薯试管苗切段快繁目录CONTENTS一二仪器用品和材料准备脱毒试管苗快繁技术1.用具和仪器酒精棉球、小块纱布、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台等。超净工作台一、仪器用品和材料准备接种专用酒精灯器械支架接种专用剪刀器械灭菌器一、仪器用品和材料准备2.药品和试剂一、仪器用品和材料准备3.脱毒试管苗一、仪器用品和材料准备开口消毒试管苗切段茎段接种封口消毒快繁基础苗1.快繁流程二、切段快繁技术2.准备工作①接种室的清洁和消毒。②超净工作台的开机和消毒。③剪刀、镊子、已灭菌培养皿、酒精棉球、酒精灯、待用培养基等的准备。超净工作台消毒二、切段快繁技术2.无菌操作①操作前，操作人员洗手及手消毒。②使用的镊子、解剖刀等用95％酒精浸泡，之后放在酒精灯上灼烧灭菌，再放在灭菌后的培养皿中冷却后使用。③培养瓶外壁的消毒。二、切段快繁技术2.无菌操作④将马铃薯试管苗剪为单节茎段后接种到培养基中，在植入材料的前后，培养瓶的瓶口须在酒精灯火焰上烧烤灭菌。二、切段快繁技术2.无菌操作⑤封口、标记、将培养瓶置于培养架上，在温度20~25℃，光照强度2000~3000lx，光照时间12~14小时/天的条件下培养。二、切段快繁技术《薯类种子种苗生产技术》植物无糖培养快繁技术及其优点引言植物体生长方式一是植物体靠光合作用进行自然生长（自养）二是植物体靠培养基中的糖进行生长（异养）传统的组培中都必须加糖，为小植株提供碳源或能源。常规组培苗生长不好的原因由于小植株长期靠培养基中的糖进行异养而导致叶片表层结构发育差，气孔开闭功能差，叶片小，叶绿素含量降低，继而使小植株丧失了光合作用的能力，或者由于环境条件抑制了其进行光合作用。小植株表现为生长速度慢、徒长、发育差、生理形态异常、个体差异大、变异性增加、成活率降低。主要内容一二植物无糖培养快繁技术植物无糖培养快繁技术的优点（一）提出植物无糖培养快繁技术是由日本设施园艺与环境控制专家古在丰树教授在20世纪80年代末提出的，是一种全新的植物组织培养技术。一、植物无糖培养快繁技术植物无糖培养室及其环境控制系统（二）含义植物无糖培养快繁技术，又称为光自养微繁殖技术，是指在植物组织培养中以CO2代替糖作为植物体的碳源，通过控制影响组培苗生长发育的环境因子，促进植株光合作用，以更接近植物自然生长状态、成本相对较低的方式生产优质种苗的一种植物组织培养技术。一、植物无糖培养快繁技术植物无糖培养箱（三）与常规组培技术的不同点改变了碳源的供给途径，即改变培养基成分，培养基中不再含有糖；组培苗培养容器改为箱式大容器培养；输入可控制量的CO2气体作为碳源。并通过控制培养环境因子，促进植株光合作用速率，使之由异养型转变为自养型。因而可使植株长势良好，生物量较有糖培养的显著增加，污染率明显降低。一、植物无糖培养快繁技术（三）与常规组培技术的不同点植物无糖培养控制系统主体硬件构造（四）目标与要求植物无糖培养快繁的目标是在短时间内获得大量的遗传基因相同、生理一致、生长发育正常、无病无毒的群体植株。要求植株有高的光合能力或光独立生长能力（能利用空气中的CO2作主要的碳源）。一、植物无糖培养快繁技术（一）缩短培养周期通过人工控制，动态调整优化植物生长环境，为种苗繁殖生长提供最佳的CO2浓度、光照、湿度、温度等环境条件，促进了植株的生长发育，苗齐、苗壮，培养周期缩短40%以上。（二）简化培养程序无糖组培工艺的简单化，流程缩短，技术和设备的集成度提高，降低了操作技术难度和劳动作业强度，更易于在工厂化生产上推广应用。二、植物无糖培养快繁技术的优点（三）提高种苗质量无糖培养组培苗生长健壮，消除了小植株生理和形态方面的紊乱，植株的生根率、驯化期间的成活率大幅度提高。二、植物无糖培养快繁技术的优点海棠无糖培养与常规培养的试验对照（三）提高种苗质量（四）降低生产成本采取无糖培养技术，大幅度降低植物组培生产过程中的微生物污染和电的消耗。二、植物无糖培养快繁技术的优点以大豆、海棠、核桃、生姜、甘薯、香蕉等20多种植物为材料的植物无糖培养试验表明，无糖组培苗的移栽成活率可提高10%以上，培养周期缩短了25%以上，生产成本降低了35%以上。

二、植物无糖培养快繁技术的优点《薯类种子种苗生产技术》目录CONTENTS一二准备阶段试管苗的驯化移植二无菌培养体系的建立三四试管苗的增殖试管苗的壮苗生根五一、准备阶段1.信息的准备--资料的收集、分析查明需要组培植物的学名、品种名及商品名等，然后有目的地进行文献检索，查阅该植物组织培养方面相关的报道，着重阅读近3～5年的文献，进行综合分析。2.实验条件的准备3.实验技术的准备二、无菌培养体系的建立（一）工作流程母液配制培养基配制培养基灭菌培养基配方选择与制备外植体选取与消毒外植体接种外植体启动培养外植体选取外植体整理外植体洗涤材料消毒灭菌接种室消毒无菌操作环境因子调节观察记录处理二、无菌培养体系建立（二）关键问题1.探索出适宜的外植体消毒方案2.获得无菌培养物，诱导出中间繁殖体3.建立无菌培养体系（三）解决措施1.试验筛选2.树立无菌意识，严格无菌操作三、试管苗的增殖（一）工作流程试验筛选最适增殖培养基配方试验筛选最佳环境条件最适培养基与培养条件的筛选继代增殖培养反复继代培养修正配方与环境参数克服污染、玻璃化等问题三、试管苗的增殖（二）促进试管苗增殖的措施

1.

改良培养基根据基本培养基配方的特点、材料种类与快繁（植株再生增殖）类型，选择合适的基本培养基。2.改善培养条件（具体措施）温度、光照、相对湿度、pH、气体四、试管苗的壮苗、生根（一）工作流程试验筛选最适生根培养基配方试验筛选最佳生根环境条件培养基与培养条件的筛选壮苗生根培养按批次继代生根培养修正配方与环境参数克服污染、玻璃化等问题四、试管苗的壮苗、生根（二）促进试管苗壮苗、生根的措施

1.

选择合适的基因型植株、合适的部位、合适的年龄、合适的生理状态。2.改良培养基。3.改善培养条件：适宜温度一般在16~25℃，过高过低均不利于生根。一般发根不需要光。不同类型植物需要光照时间和光照强度不同。pH一般5.0~6.0。五、试管苗驯化移植（一）炼苗适期当小植株生出3~5条水平根、每条根长2~3cm时，为最适宜的出瓶炼苗阶段，随即进入试管苗的炼苗移栽阶段。五、试管苗驯化移植（二）炼苗驯化将长有完整试管苗的培养瓶由培养室转到半遮荫的自然光下锻炼，并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐渐降低温度，转向有菌，一般进行1~2周。五、试管苗驯化移植（三）移植1.直接移栽法直接将试管苗移栽到盆钵的方法。2.常规移栽法3.嫁接移栽法《种苗快繁脱毒技术—马铃薯脱毒技术》目录CONTENTS一脱毒种薯生产程序茎尖培养脱毒马铃薯无病毒苗的鉴定二三脱毒种薯生产程序一、脱毒种薯生产程序

采用微茎尖组织培养的方法，诱导出苗，采用联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后，无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。试管苗采用固体、液体培养基相结合的方法，进行扩繁基础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原原种（或称脱毒小薯）。用原原种在一定隔离条件下产生原种1代，以后逐级称为原种2代、良种1代、良种2代。茎尖培养脱毒二、茎尖培养脱毒1、初代培养预处理：多采用在室内发芽，芽经热处理（38℃）2周。表面消毒：取顶芽或侧芽茎尖（1cm）自来水下冲洗70％的酒精浸润（15-20s）2％次氯酸钠溶液浸泡（4～5min）无菌水冲洗3次。接种：把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留1-2个叶原基，0.2-0.3mm，随即接种于培养基中。培养基：MS＋NAA0.1＋GA30.2＋BA0.5＋2%蔗糖（液体，pH5.8）培养条件：21-25℃、2000-3000lx、12h/d。生长情况:2-3周愈伤，4-5周绿点，3-6月长成2-3cm小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。2、继代和生根培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒）鉴定后（检测:1次/3月，4次/年）鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体培养基上培养，长成5-10cm高，继续切段繁殖，每月可繁殖5-8倍；试管苗也可采用浅层静止液体培养。培养基：MS+NAA0.2～0.5+D-泛酸钙10+3%蔗糖培养条件：20-25度，3000-4000LX，14-16小时光照，每3周继代一次，单芽茎段约1cm，可插也可平放，原则试管苗用2年-3年。3、驯化与移栽为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力，移植前对试管苗要进行光、温锻炼。炼苗期温度：白天23-27℃，夜间不低于14℃。方法：移植前7d左右，将长有3-5片叶、高2-3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。4、微型薯生产网室内，铺6cm蛭石，3%撒可富稀释一倍，喷潮湿即可。插前浇水湿润，插后浇透。覆膜一周（但不要压紧），湿度80%以上，期间喷水2次。揭膜后喷营养液撒可富3%，喷水冲洗（每周2次），每周喷一次0.5%硫酸铜（叶面），中后期喷药防病，防早疫、晚疫病，连续喷2-4次。喷辛硫磷防害虫。苗高6-8cm培蛭石防绿薯，1-2cm厚，约35-40天出现气生薯，不断盖蛭石。微型薯马铃薯无病毒苗的鉴定三、马铃薯无病毒苗的鉴定1、指示植物鉴定方法在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。2、鉴定寄主的准备马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼陀罗、烟草等。寄主植物应在无虫网室中培养。3、指示植物鉴定将病组织采回后，放在用洗衣粉水洗过的研钵内，用小型喷粉器将400目的金刚砂喷洒在指示植物叶片上，将病组织摩擦接种在不同的指示植物上，接种后用清水洗掉接种叶片上的杂物，3-7天后逐日观察发病症状。根据实践发现，不同的病毒种类在同一指示植物上的症状不同，同一种病毒在不同指示植物上的症状不同。4、接种液制备及接种

叶片洗净研钵中研成糊状用纱布滤出汁液蒸馏水稀释10倍（混入金刚砂接种物）

蘸取接种液均匀在寄主叶背面擦过（不成伤痕）清水冲洗多余接种物放置在防虫室内5-10天可发病。5、无病毒株的繁殖通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而生产上需要数以万计的健康种薯。同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁殖中再次侵染。如何防止病毒再侵染，有主要几种方法：（１）直接块茎繁殖（２）扦插繁殖（３）组织培养切段繁殖

A：继代培养

B：低温保存种子生产基础《种苗快繁脱毒技术-植物快繁的程序》目录CONTENTS一无菌培养物的建立繁殖体增殖二三芽苗生根小植株的移栽驯化四无菌培养物的建立一、无菌培养的建立（一）母株（stockplant)和外植体的选取：木本、较大草本：带芽茎段、顶芽或腋芽矮小草本：叶片、叶柄、花瓣（二）无菌培养物的获得一