实验微生物显微镜的使用细菌形态的观察和细菌的革兰氏染色-2739省名师优质课获奖课件市赛课一等奖课件

试验微生物显微镜使用细菌形态观察和细菌革兰氏染色第1页试验目标1）掌握显微镜油镜使用和保护法2）认识细菌基本形态与特殊结构。3）掌握细菌涂片标本制备、革兰氏染色法步骤、细菌革兰氏染色结果。4）学习无菌操作技术第2页试验内容：

1）显微镜油镜使用方法；2）观察细菌基本形态染色装片；3）观察几个常见细菌菌落；4）进行革兰氏染色法操作第3页试验原理

显微镜光学系统中，物镜性能最为关键，影响显微镜分辨率。显微镜物镜中油镜放大倍数最大，可达100X,

油镜使用需在载玻片与镜头之间滴加镜油（香柏油）。

油镜基本原理第4页总放大倍数(物镜放大倍数x目镜放大倍数)物镜数值孔径NANA=n•sin

n是指介质（空气、浸油等）折射率；

是孔径角二分之一。第5页分辨率显微镜所能分辨两点之间距离分辨率＝

/2×N.A.=/2×n•sin

（为所使用光线波长）油镜分辨率为0.2µm左右第6页

油镜使用

增加照明亮度油镜头焦距很短，直径很小，所需光照强度最大增加显微镜分辨率显微镜性能优劣主要决定其分辨率大小。

第7页为何使用香柏油？

当物镜与装片间介质是空气（空气折射率n=1.0）时，光线会发生折射，使进入物镜光线降低，降低了视野照明度。当介质为香柏油时，香柏油折射率（1.52）与玻璃相近，光线可经过载片直接进入物镜而不发生折射，增加了照明度，更主要是增加了数值孔径到达提升分辨率目标。第8页显微镜使用方法第9页显微镜各部分名称第10页第11页第12页第13页第14页第15页第16页第17页油镜维护与保养透镜清洁用无水乙醇和无水乙醚（3:7/4:6）擦拭镜头。尤其是用完油镜后。干燥预防生霉第18页目标要求巩固显微镜油镜使用方法认识细菌基本形态和特殊结构观察并描绘几个常见微生物基本形态与特殊结构微生物形态观察第19页试验仪器、材料和用具显微镜、镜油、镜头纸、擦镜液细菌装片：细菌三种基本形态装片及细菌特殊结构-芽孢、鞭毛、荚膜装片。第20页细菌基本形态观察（1）观察金黄色葡萄球菌、八叠球菌装片。注意菌体间关系。（2）观察枯草芽孢杆菌、大肠杆菌装片。（3）观察螺菌装片。注意菌体螺旋。第21页

细菌基本形态第22页ArrangementofCocci球菌A.arrangementofcocciB.staphylococcusarrangementC.streptococcusarrangementD.sarcinaarrangementE.diplococcusarrangement第23页ArrangementsofBacilli牙孢杆菌A.arrangementsofbacilliB.singlebacillusC.streptobacillus第24页SpiralFormsA.spiralformsB.spirillumC.spirochete(arrows)mixedwithredbloodcellsD.vibrio第25页细菌特殊结构观察（1）固氮菌（荚膜）装片：注意菌体和荚膜染色差异，荚膜大小、以及与菌体关系。（2）螺菌（鞭毛）装片：注意鞭毛染色、位置、数目、形状和大小。（3）巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、破伤风梭菌装片，注意孢体和菌体染色差异，芽孢形状、大小和位置。第26页CapsulestainofEnterobacteraerogenes细菌荚膜第27页细菌鞭毛第28页arrangementofflagella鞭毛第29页细菌芽孢第30页第31页目标要求掌握细菌涂片标本制备方法及革兰氏染色法步骤识别细菌革兰氏染色结果学习无菌操作技术细菌革兰氏染色第32页试验仪器、材料和用具(1)显微镜、镜油、擦镜纸、擦镜液(2)结晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番红染液(3)载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、(4)枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌液体培养液、牙垢第33页试验原理第34页试验步骤涂片左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中取菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜;从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少许菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有一滴自来水中;第35页干燥在空气中自然干燥第36页用镊子夹住涂片一端,

在火焰上连续经过三次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜.固定第37页3.95%乙醇脱色：滴加95%乙醇，轻轻摇动玻片进行脱色，直至流出乙醇无紫色时，水洗；染色步骤1.结晶紫初染：滴加数滴结晶紫染液于细菌涂片上，

染色1分钟，水洗；2.卢戈氏碘液媒染：用卢戈氏碘液覆盖涂片1分钟，水洗；4.蕃红复染：滴加蕃红染液复染2分钟以上，水洗，吸干镜检。第38页第39页载玻片上滴加一滴香柏油，放油镜下镜检;注意标本中细菌形态、大小,排列,和颜色镜检染色结果：革兰氏阳性菌呈紫色;革兰氏阴性菌呈红色;第40页金黄色葡萄球菌染色结果第41页讨论统计革兰氏染色结果,并描述形状,菌体排列和颜色,看看与理论上是否相同;如不一样,分析原因;

分析影响革兰氏染色结果原因;

牙垢里大约能看到几类菌，哪几个较多？第42页注意事项载玻片是否洁净,取菌量、适当菌龄、热固定及每一步水洗和酒精脱色程度是试验成功关键禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中第43页影响革兰氏染色结果原因★菌龄：取处于对数生长久细菌，此时结果经典。★操作：热固定：温度不能太高，不然会造成细菌结构破坏。染色：染料应过量，防止结晶。初染和媒染：时间在30-60s为宜。复染：时间可稍长脱色：约30s，以流下脱色液无色为准,不然制片上会留有杂质或造成假阳性或假阴性。水洗：要充分，不然制片上会留有杂质。第44页

萋－纳氏抗酸染色法染液：石炭酸复红，3％盐酸酒精，碱性美蓝染液。菌液：枯草芽孢杆菌器具：显微镜，载玻片，酒精灯，接种环。第45页（1）用接种环挑取一环枯草芽孢杆菌菌液，涂于玻片上做成薄膜，自然干燥后经火焰固定。（2)滴加石炭酸复红液于涂片上，用玻片夹住涂片微火加热，保持染液冒蒸汽约5分钟，