硫代葡萄糖苷的检测

硫代葡萄糖苷的检测1硫代葡萄糖苷的简介硫代葡萄糖昔（以下简称硫昔）是主要分布于十字花科和刺山柑植物中的含硫次生代谢产物。由8-D-硫葡萄糖基、硫化肟基团和来源于氨基酸的可变侧链R组成。其生物合成途径分为三部分：前体氨基酸侧链延伸、核心结构形成及次级侧链的修饰。硫昔以稳定化合物的形式分布于植物营养器官和生殖器官中，当植物组织受到破坏时，分布于细胞质的黑芥子酶将液泡中的硫昔分解成腈、异硫氤酸酯、硫氤酸酯、恶唑烷酮等多种降解产物，反应产物因硫昔种类、金属离子、pH值等而不同，其过程十分复杂。2硫苷生理功能2.1增强植物抗逆性硫昔及其降解产物具有抵御草食动物、抗病虫及抗病原微生物能力，在植物的防卫反应中发挥重要的作用。硫昔降解产物烯丙基异硫氤酸酯、2-苯乙基异硫氤酸酯、n-丁基异硫氤酸酯及1-氤基-2-苯乙烷对芸苔属专食性昆虫卵具有致死作用。其中2-苯乙基异硫氤酸酯致死剂量最低，烯丙基异硫氤酸酯、n-丁基异硫氤酸酯次之，1-氤基-2-苯乙烷最高。较适应寄主植物中异硫氤酸酯含量比适应寄主植物高，因而可推测硫昔组成及浓度对专食性昆虫有影响。异硫氤酸酯对土传病虫害防治效果因其含量、病虫对其敏感性，在土壤中的释放速率及残留时间等而不同。当植株中2-苯乙基硫昔含量增加时，蚜虫数量减少，植株抗虫性增强。2.2诱虫作用硫昔是黄曲条跳甲进行寄主选择的主要因素，同一蔬菜品种中硫昔含量与其选择性呈显著相关。除此之外，硫昔还能刺激小菜蛾产卵，其产卵量与硫昔含量变化趋势基本相符。因而，硫昔具有诱虫作用。2.3致甲状腺肿大硫昔是菜籽饼中最主要的抗营养因子，其降解产物异硫酸氤盐及恶唑烷酮能够引起畜禽甲状腺肿大，并且甲状腺受损存在种间差异。2.4抗癌吲哚族硫昔降解产物对S180小鼠具有抗肿瘤作用。葡萄糖莱菔子昔（硫昔中一种）降解产物萝卜硫素是蔬菜抗癌效果最好的植物活性物质，诱导人或动物体内Phase酶II（如谷光昔肽-S-转移酶、苯醌还原酶和UDP-葡萄糖醛酸转移酶）数量的增加，抑制Pha-seI酶的产生，从而阻断致癌物产生的代谢途径，抑制癌细胞分裂和生长。3检测方法：原子吸收法本法可测定umol/g量的硫代荀萄糖普。重量法、容量法、侧葡萄糖法、氯化肥法气相色谱法和液相色谱法.这些方法有的操作繁复，费时，所需样品量大，再现性差，有的需要昂贵的酶试剂，而各种方法的结果又难以比较，正如Uppstrom[”在1985年国际油菜分析化学讨论会上指出的有关硫普总量的测定，需要解决的问题很多.将欲测的有机物直接（或将其转化为某种化合物后）与金属离子反应，再用原子吸收法测定反应产物中（或未反应的）过量金属离子，即可求得有机物的含量.这种方法既可扩大原子吸收法的应用范围，又可解决一些有机分析方法要用纯有机化合物做标准的困难.本文用这种方法测定了油菜籽中硫代葡萄搪普（以下简称硫普）.硫普分子虽然复杂，但经酶解后，均能无例外地定量产生等摩尔的H2SO4,而测定so4-目前一般被认为是较可靠的方法，因此若用巳知量的钡离子溶液与其反应，然后用原子吸收法测量过量的钡离子，即可间接求得硫普的含量。实验部分：1仪器与试剂zeeman原子吸收分光光度计，离心机，超级恒温槽.0.01000mol/L钡标准溶液:称取l.9734gBaCo:溶于20mL2mol/L的HCI中，用水稀释至IL，用时再稀释为1.00mmol/L.0.0l000mol/LSO三一标准溶液:称取1.4204gNa:50。溶于少量水中，再稀释成1L,用时再稀释成1.00mmo1/L.油菜籽:江苏省农科院经作所提供.2工作条件用单纯型方法选定的最佳测定条件如下.波长:553.6nm，狭缝:1.3nm，灯电流:20mA，燃烧器高度7mm，乙炔流量2.5L/min.3分析步骤将一定体积含so4近中性试样溶液，移入已校正过的l0mL离心管中，加入2.00mLI.00mmol/L的Ba离子标准溶液，沸水浴5min，取出冷全室温，用水稀释至4.OmL，摇匀，在3500rPm.下离心lmin，用原子吸收法测定溶液中过量的Ba离子.4样品分析4.1工作曲线往预先校正过的10mL离心试管中，分别加入1.00mol/L的so42-标准溶液。0.00、0.40、0.80、1.20、l.60mL，再分别加入2.00mL的l.00mmol/L的Ba离子标准溶液，摇匀、沸水浴5min，取出冷全室温。用水稀释至4.00mL，摇匀，在3500rPm下离心lmin.用原子吸收法测定溶液中过量的Ba离子.5结果和讨论5.1酸度试验结果表明，pH值为4一8时对测定无影响，故试样的测定酸度为pH5、7。5.2加.热时间为改善BaSO4的沉淀品形，.沉淀后，沸水浴加热5、60min，对结果无影响，故加热时间定为5、l0min.5.3离心时间与速度为使BaSO4。快速沉降，用不同的离心速度和时间进行试验，当转速为3500rPm时，离心lmin即可得到满意的结果.由此可说明，在所述条件下，可不用分离BaSO4。，也能得到满意的结果。甲醇回流提取法原理：采用甲醇法提取西兰花中硫代葡萄糖苷，利用重量法测定其中硫代葡萄糖苷的含量，得出硫代葡萄糖苷最佳提取条件。1材料与设备1.1主要实验材料新鲜西兰花(市售)、定量滤纸(中速)、瓷坩蜗、牛津杯(内径6mm、外径8mm、高10mm)、移液枪等。无水甲醇、醋酸钡、氯化钡、浓盐酸、抗生素(硫酸链霉素)。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、白葡萄球菌(whitestaphylococcus)、枯草芽孢杆菌(Bacil-lussubtilis)、大肠杆菌(Escherichiacoli)(以上菌种来自于哈尔滨医科大学)。1.2主要实验设备粉碎机、马福炉、电热恒温鼓风干燥箱、微电脑控制生化培养箱、电热恒温培养箱、立式自动电热压力蒸汽灭菌器、高压灭菌锅、无菌操作台。2实验方法2.1工艺流程2.1.1硫代葡萄糖苷的提取工艺流程西兰花一洗涤一切片一干燥一粉碎称重(西兰花蕾部位)一甲醇加热回流一加入Pb(AC)2一静止一离心一滤液(硫代葡萄糖苷的粗提物)。2.1.2硫代葡萄糖苷的测定工艺流程(采用重量法测定，参考吴谋成［6］、褚庆华［7］的测定方法，略有改动)：上述滤液一加入Ba(AC)2，过滤一除甲醇一加入BaCl2、HCl—沸水浴一静止过夜一过滤一灰化至衡重一称重一计算硫代葡萄糖苷含量(同时做空白)。操作要点如下：切片：切片厚度在