中药复方蜜炼川贝杷膏质量标准的薄层扫描法

中药复方蜜炼川贝杷膏质量标准的薄层扫描法

蜂蜜蜜是由川贝母、枇杷叶、甘草等16种中药组成的膏剂。具有治疗久咳、除顽固粘液和风咳的功效。用于炎热、咳嗽、感冒、咳嗽等疾病。川贝母的质量控制通常采用紫外分光光度法测定总生物碱含量。本文采用薄层扫描法对蜜炼川贝枇杷膏中川贝母的有效成分贝母素乙作定量测定。由于原质量标准仅对川贝母作定性薄层鉴别,而本文则对川贝母的有效成分贝母素乙作定量测定,进一步完善了该制剂质量标准。方法简便,结果可靠,效果满意。1实验部分1.1苯乙酸乙对照品日本岛津CS-9000型薄层扫描仪;贝母素乙对照品由中国药品生物制品检定所提供;硅胶G(青岛海洋化工厂出品);其它试剂均为分析纯。1.2溶液的制备1.2.1对照溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的贝母素乙对照品,制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。1.2.2大孔吸附树脂柱法精密称取供试品约100g,加水100ml,搅匀后,加氨水约50ml,调pH值至11～14。将此溶液上已预处理的大孔吸附树脂柱(D101型,柱高10cm,内径12mm,流速1～2ml/min),用水洗脱至基本无色。再用氯仿100ml洗脱,收集氯仿洗脱液,用氨水5ml,萃取,分取氯仿层,蒸干,残渣用甲醇定容至1ml。1.3在薄梯度下的铬条件下薄层板:0.7%CMC-Na硅胶G板。展开剂:正己烷-醋酸乙酯-二乙胺(8∶4∶1)两次展开。显色:稀碘化铋钾试液浸板。1.4薄层色谱扫描取贝母素乙对照品溶液与供试品溶液,分别点于同一块硅胶G薄层板上,依法展开,晾干显色后置薄层色谱扫描仪。在370～700nm波长范围内进行光谱扫描。结果表明,供试液与贝母素乙的光谱完全一致,并在500nm波长处有最大吸收,在600nm波长处几乎无吸收,故选择测定波长λs=500nm,参比波长λR=600nm。1.5薄层板上时间线性回归分析准确吸取贝母素乙对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μl,点于同一块硅胶G薄层板上,依法展开,晾干,显色后扫描,结果见表1。所得数据以浓度与峰面积进行回归计算,得回归方程为Y=166399.31X+8796.27,γ=0.9997。结果表明,点样量在1.036～5.180μg范围内,浓度与斑点峰面积积分值呈良好线形关系。1.6表面活性剂测试取贝母素乙对照品溶液2μl,点于硅胶G薄层板上,依法展开,晾干,显色后置薄层扫描仪内,每隔半小时扫描一次,结果RSD=2.32%(n=8),说明贝母素乙在3.5h内基本稳定。1.7薄层扫描结果取贝母素乙对照品溶液1μl,点于硅胶G薄层板上,依法展开,晾干,显色后置薄层扫描仪内扫描,重复操作8次,结果见表2,RSD=2.73%(n=8)。1.8加样回收试验精密称取已知含量样品,精密加入贝母素乙对照品,制成加样回收试验溶液,点于同一块硅胶G薄层板上,依法展开,晾干,显色后扫描,结果平均回收率为98.7%(n=6),RSD=2.21%。1.9试验对象的测量准确吸取供试品溶液10μl,对照品溶液1μl与3μl,分别交叉点于薄层板上,依法展开,晾干显色后扫描,结果见表3。2提取方法的筛选由于蜜炼川贝枇杷膏是一种煎膏剂,药味多,成分杂,所以其有效成分的测定具有一定的难度。原质量标准仅对川贝母作定性鉴别,本文摸索了多种提取方法、展开系统及显色方法,最后筛选出上述方法,可对川贝母的有效成分贝母素乙作定量测定。在提取方法上,除去糖分的干扰是个关键。采用大孔树脂除糖的方法,得到了较满意的结果。因供试品本身为弱酸性,加入强碱性氨水调pH值至11～14后,此时样品溶液变成强碱性溶液,使生物碱从样品中游离出来,过柱时不易堵塞柱子,流速能较好地控制在1～2ml