实验室职业防护和生物安全

实验室生物安全和职业防护上海市临床检验中心

1涉及病原微生物实验室生物安全法律法规与监督管理法律:

中华人民共和国传染病防治法法规:

病原微生物实验室生物安全管理条例、医疗废物管理条例规章:

传染性非典型肺炎病毒的毒种保存、使用和感染动物模型的暂行管理办法、传染性非典型肺炎病毒研究实验室暂行管理办法、人间传染的病原微生物名录

标准:《实验室生物安全通用要求》（GB19489－2008）、《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》（WS233－2002）、《生物安全实验室建设技术规范》规范:

上海市病原微生物实验室生物安全管理实施细则、上海市一、二级病原微生物实验室生物安全管理规范

2重硬件，轻软件把生物安全当做科学实验之外的“行政”任务谁来强制执行？目前存在的普遍问题3经血或体液传播的职业暴露经皮肤或粘膜暴露HIV、HBV、HCV感染为主传播方式：针刺或其他锐器损害病毒入皮肤抓伤、皮损、擦伤、烧伤病毒因意外溅入眼、鼻、口三种病毒不会经空气传播4HBV、HCV和HIV职业感染的相对危险性病毒HBVHCVHIV健康工作者的血清阳转率（%）3－351－280.12－0.4每ml血中病毒颗粒数102－10810－10610－103针头刺伤的传播概率6－300.75－100－3美国CDC5全球卫生保健人员被针刺伤

病种 传染力 流行率

(中国)

HBV 30%

14%HCV 6%

4.1%HIV 0.3%

<0.1%6健康工作者HIV感染的职业危险暴露类型经皮损粘膜经皮损和粘膜未知皮肤报告数量截至99年6月475210单次HIV暴露的危险性（％）0.30.03<0.037HIV职业暴露平均感染率皮肤破损0.33%（

0.2-0.5%）粘膜接触0.09%（

0.06-0.5%）8上海市发生HIV职业暴露疾控中心

医院

妇产科

护士

检验科9要求做的几个要素组成生物安全组织体系生物安全危害评估，明确危害防护等级建立实验室生物安全防护设施设备建立实验室生物安全手册，包含安全行为规范、安全操作规程、培训、健康监护、应急处置预案10上海市临床检验实验室生物安全实施方法实验室生物安全自我评估,明确防护等级向当地卫生监督部门上报备案人员培训，合格颁上岗证当地卫生监督部门现场检查当地卫生监督部门批准11实验室感染取决于病原微生物自身性质：毒力、感染量、侵入途径感染对象状况：免疫状况（性别、种族、年龄、怀孕、免疫耐受、免疫抑制、疾病等）实验室安全防护措施力度（生物安全）：安全操作技术、安全设备、实验室设施的安全构造12实验室主要生物危害途径13不同病原微生物的感染剂量14Aerosolgenerating1516操作一次可产生各种严重程度微生物气溶胶的活动17实验室感染传播链及其控制手段容器中的病原体泄漏预防接种感染途径/感染剂量传播个人防护装备易感宿主规程/设备潜伏期传染病监测18危害评估的原则病原微生物危害程度不同的实验活动19病原微生物危害程度分类主要依据

微生物的致病性。致病性越强，导致的疾病越严重，其等级越高

微生物的传播方式和宿主范围。它们可能会受到当地人群已有的免疫水平、宿主群体的密度和流动、适宜媒介的存在以及环境卫生水平等因素的影响

当地所具备的有效预防措施。包括：通过接种疫苗或给予抗血清的预防（被动免疫）；卫生措施，例如食品和饮水的卫生；动物宿主或节肢动物媒介的控制

当地所具备的有效治疗措施。包括：被动免疫、暴露后接种疫苗以及使用抗生素、抗病毒药物和化学治疗药物，还应考虑出现耐药菌株的可能性20《病原微生物实验室生物安全管理条例》第一类

是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物

第二类

是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物

第三类

是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物第四类

是指在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物

21不同的实验活动的危害对于同一病原微生物而言，从事不同的实验活动，操作者接触微生物的数量、浓度、可能的感染途径是不同的，一旦暴露，其后果也是不同的对于不同的实验活动均应进行危害评估，以指导操作者采取合适的生物安全防护

2223根据以上实际情况，临床微生物实验室及免疫学病原体筛检的防护标准应该是病原体危害程度分类实验活动BSL级别各类肠道致病菌3类（VC2类）BSL-2各类呼吸道致病菌3类（TB2类）BSL-2各类条件致病菌3类BSL-2乙型肝炎病毒3类BSL-2丙型肝炎病毒3类BSL-2爱滋病病毒2类BSL-2梅毒螺旋体3类BSL-224生物安全实验室

操作技术规范25所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书；在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物及相关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程序文件，对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施并对这些细节了然于胸；熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、装备的操作步骤和要点，对于各种可能的危害应非常熟悉；应掌握各种感染性物质操作的一般准则和技术要点。生物安全意识至关重要26实验室的生物安全规范

实验室的运行规范（SOP）仪器设备的使用规范针对感染性材料的操作规范个人防护用品的使用规范……271.初级防护:保护工作人员:

实验室操作和技术-标准操作-特殊操作

安全设备

:初级屏障2.二级防护:保护环境

设施设计和建筑:二级屏障生物安全原则28安全设备（初级屏障）防护服实验室工作外套手套29安全设备（初级屏障）人员防护设备面部保护眼部保护30安全设备（初级屏障）高压灭菌锅洗眼/喷淋装置31一、BSL-2实验室32BSL-133BSL-2标准的BSL-2实验室除了满足BSL-1的要求以外，在门上增加了生物危险标志、II级生物安全柜。按国标（GB19489-2008）,还要配备高压蒸汽灭菌器、洗眼器34BSL-2必须强调对污染的针头或利器的使用要非常谨慎。对易于通过气溶胶途径传播的微生物、具有增加工作人员暴露气溶胶或高度飞溅物的程序二级生物安全防护水平微生物操作必需在一级生物安全防护水平的基础之上，增加生物安全柜、高压灭菌器、安全离心机罩帽、防溅罩或面罩等。35（一）实验室的进入未经批准，任何人不得进入实验室工作区域。儿童不得进入实验室工作区域。可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员不允许进入实验室或动物房。BSL-2实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因子、实验室负责人或其他人姓名、电话、以及进入实验室的特殊要求。实验室的门应保持关闭。工作人员进入动物房应当经过特别批准。与实验室工作无关的动物不得带入实验室。363738（二）防护要求在实验室工作时，必须穿着合适的工作服或防护服。在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。严禁穿着实验室防护服离开实验室工作区域。不得在实验室内穿露脚趾的鞋。禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。39（三）有关操作的指导原则严禁用口吸移液管,严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其他用途。实验室应制订并执行处理溢出物的标准操作程序。出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室负责人报告。实验室应如实记录有关暴露和处理的情况，保存相关记录。污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果准备专门的污水处理系统。只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室40针与锋利器具的防范4142（四）实验室工作区的管理原则实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危害性的材料溢出应立即清除污染。所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先清除污染。感染性材料的包装和运输应遵循国家和∕或国际的相关规定。如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。43（五）生物安全管理的指导原则实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或/和操作手册。实验室应能提供常规的实验室安全培训,并建立制度。实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或/和操作手册，并遵循标准的操作程序。实验室内应备有可供取阅的安全或/或操作手册。所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定和操作程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、监测和治疗，并建立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室内潜在的因子相关的免疫接种或检测。44生物安全柜的使用

4546II级生物安全柜的气流方向474849生物安全柜内感染性材料溢洒的处理当发生少量溢洒时，应用吸收纸巾立即处理，并立即用浸满消毒液的毛巾或纱布对生物安全柜及其内部的所以物品进行擦洗。工作面消毒后应更换手套，不论是摘下手套还是更换手套都要洗手。若发生大量溢洒，液体会通过生物安全柜前面或后面的格栅流到下面去，生物安全柜内所有的物品都应该进行表面消毒并拿出生物安全柜，在确保生物安全柜的排水阀被关闭后，可将消毒液倒在工作台面上，使液体通过格栅流到排水盘上。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和/或高压灭菌处理。50病毒分離時液体落下消毒用70％酒精擦拭51实验室仪器设备的使用52仪器相关危险干燥器爆裂、瓶子碎片和感染性物质飞出培养物搅拌器，混合器，搅拌器产生气溶胶、喷溅和溢出皮下注射针头意外接种产生气溶胶或感染性物质溢出离心机产生气溶胶、溅出和管子破裂超速离心机管子破裂高速搅拌器，组织匀浆器飞沫、渗漏和容器破裂超声波破碎机、超声波清洁器产生气溶胶、听力受损、皮炎冻干机（冷冻干燥机）产生气溶胶、直接接触污染水浴微生物生长，叠氮化钠和一些金属形成爆炸复合物53二、离心机的使用离心分类

转头转速（rpm）

微速离心

～15,00

低/高速离心

2,000～20,000

超速离心

～120,000

54离心可能造成的伤害途径离心机机械故障实验器材故障，如离心管等

产生气溶胶；

操作者失误。55所有的离心机应处于正常的工作状态并具有合格的机械性能，要根据厂家的说明书进行操作。离心机应放到适宜的位置和高度，以使工作人员能看见离心桶并便于进行各项操作。用于离心的离心管和标本容器应该根据厂家要求选用，最好使用塑料制品，而且在使用前应检查有无破损。必须在安全柜内打开盖子。使用转头时应注意转头盖与转头型号是否匹配。操作病原微生物时，离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。空离心桶配平时应该用蒸馏水或70％乙醇、异丙醇，不应使用盐水和次氯酸盐溶液。离心管内液面水平距管口应留出一定空隙，以确保离心过程中液体不会溢出，尤其是使用角转头时更要注意。应该每天检查在特定的转速下，离心杯的内表面有无污物。离心转头和离心桶应每天检查有无腐蚀点以及极细的裂缝，以确保安全。离心桶、转头和离心机腔每次用后都应该消毒。每次用后，应该把离心桶倒放，以排净离心配平的液体。56对于高致病性病原微生物，必须要高度警惕离心过程中产生的气溶胶风险。－大型离心机上应加装负压罩，以及时吸出离心机排出的气体，并排至实验室的过滤通风系统，在BSL-3及以上级别实验室尤其要注意。－微型离心机则可放在安全柜内离心，但要注意其对安全柜气流的影响。－如果不能在安全柜内离心也无负压罩，则必须将密封的转头在安全柜内打开。－所有的离心管必须带盖密封，其开启应在安全柜内进行。57双重锁定转头盖58生物安全转头

样品瓶外套是转头的一部分样品