姬松茸多糖对哮喘模型小鼠气道炎症和h2类细胞因子水平的影响

姬松茸多糖对哮喘模型小鼠气道炎症和h2类细胞因子水平的影响

气管哮喘是由嗜酸性粒细胞、大细胞、淋巴氏合金等疾病细胞参与的呼吸道慢性炎症。当th1和th2的免疫平衡受到破坏时，th2占主导地位后，th2细胞将通过释放白色介质素（il）-4、il-5和il-13等炎症细胞因子，促进ige的形成和释放，以及嗜酸性细胞的聚集和激活，诱导玻璃细胞过度分泌。加剧呼吸道炎症的发生。因此，减少th2炎症细胞因子是哮喘免疫治疗的研究热点。季松又名胡普，属于亚硝泮、层菌、伞菌、蘑菇科和蘑菇科。它来自巴西，是一种食品菌。它的深层发酵体和发芽液中含有各种生物活动，其中糖作为主要活性物质。结果表明，季松糖能降低血压，肿瘤、辐射和氧化反应。初始研究结果表明，季松糖对大鼠呼吸道炎症和th2细胞因子水平的影响具有抑制作用。1材料和方法1.1细胞因子及仪器实验动物选择雌性Balb/c小鼠40只,体质量为(18±4)g,由延边大学实验动物中心提供,合格证号为SCXK(吉)2011-0007.卵清蛋白(OVA)及氢氧化铝粉均购自美国Sigma公司;细胞因子IL-4,IL-5,IL-13检测试剂盒均购自长春百奥生物有限公司.仪器:雾化吸入器(大连医疗器械厂U219,欧姆龙);酶联免疫检测仪(RT-2100C,美国).姬松茸多糖由延边大学药学院郑昌吉副教授提供.1.2方法1.2.1动物和组成选择雌性Balb/c小鼠40只,按照随机数字表法分为4个组,即正常对照组、哮喘模型组、姬松茸多糖小、大剂量组,每组各为10只.1.2.4肺组织病理学的观察取左肺常规固定、脱水、包埋、切片、HE和三色染色,观察肺组织病理学改变.1.2.5统计学处理采用SPSS14.0统计软件进行数据分析.实验数据以均数±标准偏差表示,多组均数比较采用单因素方差分析,其样本均数之间的两两比较采用LSD法,以P<0.05为差异有统计学意义.2结果2.1嗜酸性事业细胞、淋巴细胞计数变化与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中炎症细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数均明显升高(P<0.05);与哮喘模型组比较,姬松茸多糖小、大剂量组小鼠BALF中炎症细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞计数均明显降低(P<0.05).见表1.2.2il-13、il-13水平与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中IL-4,IL-5,IL-13水平均明显升高(P<0.05);与哮喘模型组比较,姬松茸多糖小、大剂量组小鼠BALF中细胞因子IL-4,IL-5,IL-13水平均明显降低(P<0.05).见表2.2.3对小鼠肺组织病理学改变的影响正常对照组小鼠肺组织无明显病理学改变.哮喘模型组小鼠肺组织切片HE染色观察可见支气管管腔狭窄、上皮细胞损伤、支气管及血管周围有大量炎症细胞浸润,以嗜酸性粒细胞为主.姬松茸多糖小、大剂量组小鼠肺组织病理学改变与哮喘模型组相比较明显减轻.见图1.3不同模型小鼠th2和il-13变化支气管哮喘的主要发病机制为Th1/Th2细胞因子免疫平衡被破坏,Th1反应减弱,Th2反应增强从而释放IL-4,IL-5,IL-13等炎症细胞因子所致.Th2细胞亚群主要释放IL-4,IL-5,IL-13等炎症细胞因子,可诱导嗜酸性粒细胞的产生和聚集,协助B细胞产生IgE等抗体,介导体液免疫应答及Ⅰ型变态反应.本实验采用哮喘模型观察了Th2型细胞因子IL-4,IL-5,IL-13的水平变化,结果表明哮喘模型组小鼠IL-4,IL-5,IL-13水平均明显升高,提示Th2优势显著.本实验结果亦表明,姬松茸多糖干预后,不仅肺组织病理学改变较哮喘模型组显着减轻,且小鼠BALF中炎症细胞数计数、IL-4,IL-5,IL-13水平均明显降低,提示姬松茸多糖对哮喘模型小鼠具有保护作用,其机制可能与下调Th2优势、减少炎症细胞浸润有关.1.2.2对姬松茸多糖的诱导实验样本的获取与处理参照文献中的方法.除正常对照组小鼠外,其他各组小鼠分别从第1,14d开始致敏,每只小鼠腹腔注射给予混合液(OVA20μg、氢氧化铝凝胶1mg)200μL.在致敏后的第21,22,23d,分别雾化吸入给予1%(体积分数)OVA溶液20min.正常对照组以给予生理盐水代替OVA进行腹腔注射及雾化吸入.姬松茸多糖小、大剂量组于致敏后第17~23d分别灌胃给予姬松茸多糖200,400mg/kg进行治疗,对照组和哮喘模型组分别灌胃给予同等剂量的生理盐水,灌胃1h后给予雾化吸入.最后1次雾化吸入结束48h后将小鼠处死.以PBS1mL行支气管肺泡灌洗,来回冲洗3次,收集、混匀支气管肺泡灌洗液(BALF).取50μL加入等剂量的细胞计数液,用细胞计数板计数细胞.之后于4℃条件下,以3000r/min离心10min,取上清液,-80℃超低温冰箱保存.细胞涂片,在高倍显微镜下观察嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞,进行分类计数