CAR-T细胞治疗质量控制浅谈

CAR—T细胞治疗质量控制浅谈细胞治疗，将改变人类疾病的治疗范式，由过去重复的症状控制转为一次性的治愈是引领生物医学的希望。其中，嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法是近年来发展非常迅速的一种细胞治疗技术。目前在全球已有两款药物获得FDA的批准上市,分别是诺华的Kymriah和凯特的YESCARTA，中国有多家公司产品进入临床申报阶段，这种疗法已成为更多患者的选择,CAR—T细胞制造过程符合全球监管要求成为广泛讨论的话题。1中国正衽申报临床的I南示传奇生物科技科济生物制药药明巨诺重庆精准医疗上海叵润达生复星凯特北京艺妙神州科技上海优卡迪生物中源协和北京马力喏生物博生吉医药科技恒瑞源正生物细胞治疗质量控制分析其中细胞质量控制贯穿CAR-T从研发到临床的所有步骤，但CAR—T作为“活”的药物，其很多特性与传统药物有很大的差别，下表列举了与传统药物的主要差异点：组成成分致性保质期/稳宦性生产分析方法细胞治疗产品明确的组成成分组成成分致性保质期/稳宦性生产分析方法细胞治疗产品明确的组成成分明确的组成成分可能含有不同的细胞类型批次少批次少（亡口站明确）自休治疗,一个病人・f批次4°C以下可以稳定数月或数年K弋可以稳左数年24小时内稳定』长时间保存*需要低于130°C全球布周生产全球布局生产保质期眼制*一般当地牛产主要是物理化学和生物学实验主要是物理化学和PCR及瞬胶电泳主雯是生物学实验第一个上市的CAR-T药物Kymriah的释放标准涉及到多个方面的指标，下图是小编收集到的Kymriah的释放指标所需要测试的实验：TitbitKYMRJAHLot冒亡恳毎TestRequir^meiitsfurcommercialuseSampleufiedf(»rtellingAppearanceColorleMtos3sghtlyyellowForm11late(1product(b)(4)IdentitybyCARq-PCKPositiveforPCR.signal(b)⑷■Pert少也雛of诉址沁Tedl右<b)(4)Finalproduct(b)(4)DeterniinatinnoftransductionefficientbyCAR-q-PCR(t>)(4)(b){4)saCellviability(b)(4)Finalproduct(b)(4)Determinattonofresidua.]beadsbymi^mscnpy(b)⑷(b)(4)■Percentageof\iaNcCD19中Bcelk何糾Finalpmducl(b)(4)TotalcellCdunHReportoelis/mLFinn]product(b)(4)Numberoftnablecells(calculated)(b)(4)totalviablecellsFin^lproduct(b)(4)Dose(calenlated]62to弘cxio6CARpositiveviableTcells/bodyweightk囂j0,]to2.5xioflCARpositiveviableTcellst>50kg)FinalpruJucL(aHerthaw)1Calcdationformula；(%VAR唧YiwiGnxViablemWcoh诧玳mioNxVoiitmcperdo雜站rg(perpatients(弐典kgthiaftuiniierisdiuidedperKybod甘u.rei(fhl)DetenHiBatioELctfCARex卩rcssiflnhy打仃殆’(ytomctryFinalproduct(b)(4)ReleaseofIFNyonreaponseCD19-expressingtargeteeHs■1t(b)(4)J⑹⑷Finalproduct(b)(4)ractcri^ilEndotoxins⑼(4)Finalpr()clud(b)(4)SterilityNegiliv-6(4)Mycoplajsma(b)(醴1DeterminationofVSV-GDbJA五yquantitativePCR(qPCR)(b)⑷(b)(4)■KITE的丫ESCARTA的质量控制也涉及到非常多的生物学实验，篇幅有限，就不一-列举了，具体指标可参考如下的链接：https:〃/downloads/BiologicsBloodVaccines/CellularGeneTherapyProducts/ApprovedProducts/UCM584335。pdf

另一方面CAR—T制造工艺复杂，下图列举了CAR—T的制作流程，其中涉及到病毒转染，外源物质的引进，长时间培养等因素，这势必对质量控制提出了巨大的挑战.MolecularTherapy—Oncolytics(2016)16015细胞治疗质量控制原则及法规基于以上原因，CAR-T细胞质量控制特别强调制备工艺的稳定性、多批次验证、全程质控和按照SOP严格操作。要建立稳定的质量检验和放行检验标准。

美国和欧洲出台了相应的法规来规范细胞治疗的质量控制，以下是国外针对细胞治疗出台的相关政策法规：FD扎GuidanceforIndustry：GuidsnceforHlumanSomaticC«llTh电ippyandGeneTherapy（RDckvilltjMD.Mar.1998）.FDA,Guidenc#forIndustry：SwpplemenUllGuidanceonTestingforReplicationiCompetentRetrovirusinRfltrcviralVictorBa^edlGeneTherapyProdwctssandDuringFollow-upofPatientsin11initialTrialsUsingRetroviralVectors(Rockville,MUNov.200&)-FDA.GuidanceforFDAReviewersandSponsors;ContentandReviewofCherni5tryrManufacturing,andControl(CMC)InformationforHumanSoniiaticCellTherapyInveBtigationalNewDrugApplii匚zticm占(INDe)(R□匚kville,MD.Apr.2008).FDA^GuidanceforIndustry：PotencyTestsforCellularandGeneTherapyProducts(Rockville,MD.Jan.2011).FDA,GuidanceforIndustry：Pirecliniica)AssessmentofInves-tigationalCelliul^randGeneTherapyProducts(RockvilleMDrNov.2012),USP.USPGeneralChapter<1046>,"CellandG«n«TherapyProducts"(Rockville.MD,2011).EMA.GuidelineonDevelopmentandManufactureofLentiviralVectors[London^May2005)-EDQM.EurPhjGeneTransferMedicinalProductsforHucnaniU&e5.14(EDQM.Strasbourg.France,2010]..(大家如有需要,可至文末扫码下载)在我国，细胞治疗的国家主管部门是国家卫生和计划生育委员会(NHFPC)和国家食品药品监督管理总局(CFDA),下图是我国针对细胞治疗出台的相关政策法规：成人的侔细胞治疗屋基因泊抒临床研究盛控要点》因治抒申报临庸试嵋指导原则伊1993.51湖.4《医疗技术临床应用管理办法》瓦人体细胞泊疗硏究和制剂质左控制技术的指导2003^成人的侔细胞治疗屋基因泊抒临床研究盛控要点》因治抒申报临庸试嵋指导原则伊1993.51湖.4《医疗技术临床应用管理办法》瓦人体细胞泊疗硏究和制剂质左控制技术的指导2003^祇首批光许临床应用的第三类医疗技术冃录3去于即发干细胸临味研究笆理办法（试行〉的谨知治疗产品硏究与评阶技术抬导虚则〔试行）$C按新菊进行笆理）成圉冢卫生计主餐关于取消第三裘医疗技术临岸引用准入审批有关工作的通知陥SOO^.3500S.5200^.6201&.G4015.75015.81017.12《自悴免疫姻腕廿細胞、NK《自悴免疫姻腕廿細胞、NK细腿〕泊抒技术管岬规范£征求意见福〉》恋干细胞临床诩究背理为法矗和瓦干细胸制剂质Z控制21临康前硏究扌旨导原则｛试f亍】＞以下以CTL019为例来分析细胞治疗质量控制策略，目前细胞治疗产品的质量控制分为四个大的方面，分别为安全性（Safety），纯度（Purity），潜能性（Potency）以及均一性（Identity）,这些质量控制会贯穿CAR—T生产的不同阶段，下图列举了这些检测会在不同的阶段开展.

0ODB003000_MailefCell妙k(MCB)00000Vjrvs歸祁^MVBiWVB}阳fki呷CtllBank(WCB)Pr&CW(Grij^IVRodLKlnn/McxIificdlbOfi)□vugSutet^nc#MvnMirWpp^Dr%>gPfflduct■QMK镣BioReliancetrSAK0ODB003000_MailefCell妙k(MCB)00000Vjrvs歸祁^MVBiWVB}阳fki呷CtllBank(WCB)Pr&CW(Grij^IVRodLKlnn/McxIificdlbOfi)□vugSutet^nc#MvnMirWpp^Dr%>gPfflduct■QMK♦无竄.内亩素r支原体♦♦无竄.内亩素r支原体♦眈删，雷檢界栓遼■衆宝且堆旳•匸吋删•瓯岀规期a‘主”尸收.家址堆攏访巍据♦畑电活率CD45tCD3+-ftfflfMM(FACS)*匚丸R在―扯腕表面表这量(:AC5)CRE转迥效室rnRN体平(qPrR)♦娩余8汕扯测(ELI5A)♦雀余陋珠检测4残余肿ASH(CEJ4S+CD3-CD15+Frd'entityrtrene!tl,njj检测(FACE)♦细胞it敦、戈小、活率♦-细胞佛鉴產(:AC：］♦络胞因子释放和反应件♦再剽散后细胞土丘速靈测试检测/UCD1?表迖的吧帝细胞功能愷测F【:^entity■trengitfj♦c/.RFFrSBS表直表迟呈(facs)♦匚削转染逐血丽水平｛；|PCR)♦细胞很度(全口动细胞计数牧)♦毎干克煤豆HR表1ST整胞剤环计算生物学实验用于质量分析带来的挑战在这些实验中，大部分是生物学实验，生物学实验因为操作方法，样本差异等因素会给结果带来较大的波动，也给这些方法向GMP转移带来了挑战，同时这些实验结果的验收标准和规范难以制定，以CAR-T的转染效率测定为例，不同的人对流式细胞仪结果设门得到的差异会有较大的差异.53dld幺ICPCIO3TG53dld幺ICPCIO3TG31护4声SA-PEPE-A细胞治疗质量控制的基石实验一浓度，活率细胞浓度活率测试方面，其是很多生物学实验的基础，比如细胞生长速率测定，细胞因子检测，细胞生物学效应检测方面，细胞计数是这些实验的第一步，这一步如果错误，那么结果波动大是预料之中的。另外在在细胞培养过程中，极为重要的一点是优化细胞培养条件•细胞的浓度，活率，结团率形态是了解反应器中细胞培养状态的重要指标•总而言之，CAR-T从细胞收集开始到最后的产品回输，浓度活率一直是最关键的指标之一•既然浓度活率对于CAR—T整个生产过程这么的重要，小编自作主张的调研和试用了市场上最畅销的几款细胞计数仪尤其衷爱我国自主研发生产的CountstarRigel荧光细胞分析仪。不得不说，这款产品的智能、精准、合规满足了小编对细胞计数仪所有的想象。智能作为新时代年轻人，触屏的使用已经深入人心，这款产品的设计也让小编有告别传统PC时代，与科技进步共发展的认同感。只需动一动手指，即可全自动获得细胞分析结果和图像。高质量的图像可通过多点触控放大或缩小，让你看得真切，让小编对结果的真实性不再怀疑。三分钟检测五个样，用这样的神器，老板再也不用担心我的计数速度啦。正是这款小小的荧光细胞分析仪其实具有大智慧•除细胞浓度活率检测外，对于CarT细胞中效应细胞毒性、细胞凋亡等测试这款仪器也能进行很好的分析。AO/PIS$缺婵AO/PIS$缺婵细胞遍亡细鬼丽CDMarkEr^^r精准小编亲测，使用AOPI活率检测程序测试细胞浓度和活率，看一遍即会使用,5槽测试结果CV<5%，线性R2>0。99,多台仪器间测试结果一致。多个地区，多类样品，多个人开展测试，也不再担心数据的一致性.CountstarRigel的AOPI细胞活率测试，可用于全血的质量评估,PBMC分离效率检测，T细胞的培养状态，T细胞的增殖率和活率，产品释放质量控制，在CarT细胞治疗整个质量控制过程均可使用。抚取样#址谢修怖抚取样#址谢修怖合规从美国药典，FDA以及CFDA的法规来看，对细胞治疗产品用于药品，符合GMP规范进行管理成为未来的趋势。所以，小编对仪器最重要最基本的要求就是需要符合GMP/cGMP、数据审计追踪、FDA21CFRPARTll.CountstarRigel从设计到服务完全符合这个要求！同时,CountstarRigel提供标准微珠颗粒、3Q验证服务，并且