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文档简介

YPD培养基YPD或YPED,:YeastExtractPeptoneDextroseMedium（1L）,又叫酵母浸出粉胨配方：1%YeastExtract（酵母膏），2%Peptone（蛋白月东） ，2%Dextrose（glucose）（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：.溶解10gYeastExtract（酵母膏），20gPeptone（蛋白东），20g琼脂粉于900ml水中.高压115度20min3.加入100ml10xDextrose（glucose）（葡萄糖），（葡糖糖溶液灭菌后加入）,注：葡萄糖，yeastextract,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。1、 接种：取酵母0.5克，加入到5ml的YPD培养液中，在30°C摇床中过夜培养，可见培养液变浑浊。2、 计数：将酵母菌液稀释到合适的倍数（约102-103倍）以每小格的菌数可数为度，涂于血球计数板上，在高倍显微镜下计数酵母菌数。3、 涂皿：将培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml稀释合适倍数的菌液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。做平行样。4、 分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上三区划线，培养后分离得到单个菌落。5、 镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。6、 菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。血球计数板使用取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。测数完毕，取下盖玻

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