医学微生物学：实验1-寇晓霞

医学微生物学寇晓霞kouxiaoxia163@163.com实验一广州医科大学金域检验学院实验室规则临床微生物检验实验室规则实验室意外的应急处理值日卫生请严格遵守各项规则、注意安全、节约！1.进入实验室要穿白大衣。书及文具等放指定区域。实验材料严禁带出实验室外。2.实验室内禁止饮食。3.严格操作规程，无菌操作。出现皮肤刺伤、感染性物品溢出等意外要立即报告老师，及时处理。4.污染标本及使用过的有菌器材放于指定的消毒缸内，统一进行消毒处理。5.酒精灯要人离灯灭。严防发生火灾。6.禁止将实验用菌株带出实验室外。7.实验完毕要清理桌面。白大衣反折，消毒液浸泡或肥皂水洗手后方可离开。

值日搞卫生实验室规则

1．皮肤刺伤或擦伤：受伤人员应当脱下实验服，清洗双手，尽可能挤出损伤处的血液，除尽异物，用肥皂和清水冲洗伤口或沾污的皮肤；如果粘膜破损，应用生理盐水(或清水)反复冲洗。伤口应使用适当的皮肤消毒剂(如酒精、碘伏等)涂抹消毒，必要时进行医学处理。

2．菌液流洒桌面：应倾倒适量消毒液于污染面，让其浸泡30min后抹去；若手上沾有活菌，亦应浸泡于上述消毒液10min后，再以肥皂及水清洗干净。实验室意外应急处理措施医学微生物学实验报告1.实验名称、实验时间2.主要材料（简略）3.实验原理（必要时）4.步骤（简略）5.结果6.讨论及问答请在实验报告封面写上：姓名班别学号组别医学微生物学实验报告

1.独立操作；认真观察示教结果。2.如实记录实验过程及结果。

实验一1、细菌的革兰染色法（每人做）取金葡菌、铜绿或大肠进行革兰染色。2、细菌的特殊结构（示教）3、油镜的使用与保护目的要求1、掌握细菌涂片制作方法2、掌握革兰染色法3、认识细菌的基本形态和特殊结构特点实验内容器材接种环接种针金属环金属柄塑料柄接种环器材染色涂片制备法（1）涂片：取洁净载玻片一张，点燃酒精灯，左手持NS试管，右手以持手笔方式拿接种环，烧灼灭菌后取2环NS，烧灼灭菌后从平板取少量待检菌，在NS中研磨。厚度适宜均匀（以透过涂面能看清字迹为宜）。（2）干燥：自然干燥；或将涂面向上，距火焰稍远处烘干，切忌紧靠火焰。（3）固定：涂面向上在火焰最热部分往返通过三次。

涂片厚薄适度，否则效果不好。涂片制作----染色前操作步骤1.涂片2.干燥3.固定染色细菌的涂片制作从平板上刮取菌落革兰氏染色原理1.平板划线法2.琼脂斜面接种法3.液体接种法4.穿刺接种法5.涂布接种法（药敏，计数）6.倾注平板法1.通透性学说：革兰阳性菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入，不能溶解脱去细胞内结合的结晶紫；革兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易渗入，易使细胞内结合的结晶紫溶解脱去，随后染上复红的红色。2.等电点学说：革兰阳性菌等电点比革兰阴性菌低，所带负电荷比革兰阴性菌多，与带正电荷的结晶紫结合牢固不易脱色3.化学学说：革兰阳性菌含大量核糖核酸镁盐，与结晶紫染料结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色革兰氏染色意义

1：将细菌染成两大类，即革兰阳性菌和革兰阴性菌,可用于鉴别细菌。

2：研究细菌的致病性，革兰阳性菌可产生外毒素，革兰阴性菌可产生内毒素。3：选择敏感的抗生素用于治疗。革兰染色

1.结晶紫：初染1min水洗

2.卢戈氏碘液：媒染1min水洗

3.95％乙醇：脱色0.5min水洗

4.稀释石炭酸复红：复染0.5min水洗

影响因素:操作染液菌龄等因素初染1min

水洗媒染1min脱色0.5min复染0.5min镜检1、操作因素涂片太厚或太薄，脱色时间长短2、染液因素染液新鲜配制，涂片积水过多改变染液浓度，脱色液乙醇浓度以95％为宜。3、细菌因素菌龄（老或幼龄），以18-24h培养物最好。革兰染色法影响因素粗调焦螺旋细调焦螺旋油镜的使用和保护

1.加香柏油时，一定要从载物台上清取下玻片，加好之后再放上去，不能直接在载物台上加香柏油。2.油镜使用完毕，一定要及时的用擦镜纸擦干净镜头上的香柏油，保护镜头。

革兰阳性

革兰阴性结果观察注意观察细菌基本形态，比较其形状、大小排列及染色性。球菌杆菌弧菌1、观察标本

用油镜观察。（１）观察荚膜的特点，如大小、颜色与菌体的关系。（２）观察鞭毛的特点，如鞭毛的形态，数目及其位置。（３）观察芽胞，注意芽胞的形状、颜色及位置。

2、实验报告

画图，图示细菌基本形态及特殊结构，并加以适当描述细菌的特殊结构（示教）荚膜鞭毛周鞭毛单鞭毛芽孢染色涂片制备法（1）涂片：取洁净载物玻片一张，点燃酒精灯，左手持NS试管，右手以持手笔方式拿接种环，烧灼灭菌后取2环NS，烧灼灭菌后从平板取少量待检菌，在NS中研磨。厚度适宜均匀（以透过涂面能看清字迹为宜）。（2）干燥：自然干燥；或将涂面向上，距火焰稍远处烘干，切忌紧靠火焰。（3）固定：涂面向上在火焰最热部分往返通过三次。

涂片厚薄适度，否则效果不好。

1.结晶紫：初染1min水洗

2.卢戈氏碘液：媒染1min水洗

3.95％乙醇：脱色0.5min水洗

4.稀释石炭酸复红：